【摘要】：隨著社會(huì)的快速發(fā)展,競(jìng)爭(zhēng)的日益激烈,人民群眾的生活壓力也越來(lái)越大。抑郁癥也變成了一種常見(jiàn)的精神類疾病,并且抑郁癥患病率隨著社會(huì)壓力的增加正在逐年上升。世界衛(wèi)生組織認(rèn)為抑郁癥的危害性僅次于心臟病。由于抑郁癥患者的不斷增加,抗抑郁藥的使用量在不斷提高。SSRI類抗抑郁藥是目前臨床使用最多的一類抗抑郁藥,通過(guò)提高突觸間隙5-HT濃度達(dá)到治療抑郁癥的目的。目前,藥物引起的環(huán)境污染問(wèn)題逐漸受到廣大學(xué)者的關(guān)注。人類丟棄及代謝不完全排除體外的藥物由于不能得到良好的清除,導(dǎo)致其廣泛存在于地表水、海洋等水體環(huán)境中,嚴(yán)重危害水生生物的健康。本研究選取SSRI類抗抑郁代表性藥物氟西汀和帕羅西汀,探討其對(duì)斑馬魚(yú)腦組織5-HT能神經(jīng)傳導(dǎo)系統(tǒng)關(guān)鍵功能分子蛋白5-HT_(1A)受體和5-HT轉(zhuǎn)運(yùn)體(5-Hydroxytryptamine Transporter,SERT)轉(zhuǎn)錄及表達(dá)水平的影響,了解SSRI類抗抑郁藥對(duì)斑馬魚(yú)腦組織5-HT神經(jīng)傳導(dǎo)系統(tǒng)的影響。成年斑馬魚(yú)分別連續(xù)暴露于氟西汀、帕羅西汀7d和14d,于染毒后檢測(cè)5-HT_(1A)和SERT轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)水平。結(jié)果顯示,氟西汀和帕羅西汀可引起5-HT_(1A)、SERT基因轉(zhuǎn)錄水平升高,伴有SERT蛋白表達(dá)水平降低。本研究結(jié)果提示,SSRI類抗抑郁藥物氟西汀和帕羅西汀通過(guò)引起斑馬魚(yú)腦組織5-HT_(1A)受體和SERT水平異常,影響5-HT能神經(jīng)突觸結(jié)構(gòu),干擾斑馬魚(yú)腦組織5-HT能神經(jīng)傳導(dǎo)系統(tǒng)的正常生理功能,危害斑馬魚(yú)健康。本研究為進(jìn)一步研究SSRI類抗抑郁藥物對(duì)斑馬魚(yú)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的不良影響提供科學(xué)依據(jù),為研究其他藥物對(duì)水生生物的健康損害效應(yīng)提供參考。
【圖文】：

配置 3%瓊脂糖溶液。稱取 3g 瓊脂糖（Agarose）于錐形瓶中，加入 100mlTBE緩沖液混勻。并用報(bào)紙封口防止加熱過(guò)程中外濺。放入微波爐中加熱 5 分鐘，徹底熔解清除氣泡后取出。適當(dāng)冷卻后加入 50 μlNA-Red，混勻后倒入膠板中制膠。待徹底冷卻后將膠塊放入含有電泳液為 TBE 緩沖液的電泳儀中。取適量實(shí)時(shí)熒光定量產(chǎn)物，加入 DNA 上樣緩沖液（6X），，混勻后上樣 5 μl。DNA 分子量標(biāo)準(zhǔn)上樣 5 μl。電泳儀電壓設(shè)置為 120V，電泳時(shí)間 40 分鐘。電泳完成后，取出膠塊，將凝膠成像儀擦凈，放入膠塊擺正，通過(guò)凝膠成像儀進(jìn)行觀察。記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。2.3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.3.1 實(shí)時(shí)熒光定量結(jié)果超微量分光光度儀測(cè)定四組樣品 OD260/280 比值為 1.95~1.99。圖 2-1（D 為5-HT1A，E 為 SERT，F(xiàn) 為 β-actin），圖 2-2（E 為 5-HT1A，F(xiàn) 為 SERT，G 為β-actin）分別為染毒 7d 及 14d 氟西汀組，帕羅西汀組，混合組以及空白對(duì)照組四組的5-HT1A，SERT，β-actin 三個(gè)基因的 QPCR 擴(kuò)增曲線和熔解曲線。

圖 2-2 染毒 14dQPCR 的擴(kuò)增曲線（左）和熔解曲線（右）Fig. 2-2 amplification curve (left) and melting curve (right) of QPCR at 14 days after exposure統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示（表 2-4,*為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義）。染毒 7d 時(shí)，氟西汀組和帕羅西汀組 5-HT1A和 SERT 轉(zhuǎn)錄水平高于空白對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0. 05)；混合組 5-HT1A和 SERT 轉(zhuǎn)錄水平高于空白對(duì)照組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0. 05)；氟西汀組 5-HT1A轉(zhuǎn)錄水平高于帕羅西汀組和混合組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0. 05)；氟西汀組 SERT 轉(zhuǎn)錄水平高于帕羅西汀組和混合組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0. 05)；帕羅西汀組 5-HT1A和 SERT 轉(zhuǎn)錄水平低于混合組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0. 05)。表 2-4 5-HT1A及 SERT 相對(duì)表達(dá)量（ x±s，n=3）Tab.2- 4 Relative expression levels of 5-HT1Aand SERT（ x±s，n=3）染毒天數(shù) Days ofexposure分組 Grouping5-HT1A轉(zhuǎn)錄水平5-HT1ATranscriptionlevelSERT 轉(zhuǎn)錄水平SERT Transcriptionlevel氟西汀 87.45±5.87* 8.04±0.69*帕羅西汀 1.37±0.11* 2.74±0.06*7 d
【學(xué)位授予單位】：浙江海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R965

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