發(fā)布時間：2020-05-30 22:50

【摘要】：目的:癌癥是現(xiàn)階段在全球范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率都處于較高水平的一類疾病,它的發(fā)生和發(fā)展嚴重危害著人類的生命健康。據(jù)報道,在全球范圍內(nèi)每年至少有一千萬以上的人身患癌癥,其發(fā)病率和死亡率也在呈逐年上升的趨勢。目前臨床上治療癌癥的主要方法還是通過化療、放療等,鉑類、烷化劑和抗代謝類化學藥物在治療癌癥的同時,也會給機體的正常細胞帶來嚴重且不可逆的傷害,嚴重影響了癌癥的治療效果,也給患者帶來很大的痛苦。因此,研發(fā)新型的、有效的且選擇性良好的抗腫瘤藥物,降低藥物的毒副作用,對于臨床癌癥患者的治療是刻不容緩的。白樺脂酸是一種存在于自然界多種植物中的五環(huán)三萜酸,具有十分廣泛的生物學活性,如抗炎、抗瘧疾、抗HIV等,近年來,大量的實驗研究表明白樺脂酸在抗腫瘤方面也具有良好的藥理活性。但是由于其水溶性較差,生物利用度不高,且在治療癌癥時對機體的正常細胞也有所傷害,選擇性較差,治療效果不是特別理想,因此,我們嘗試在白樺脂酸的結構基礎上進行改造得到新的白樺脂酸衍生物,有望提高其水溶性和生物利用度,降低毒副作用,為臨床開發(fā)新的抗腫瘤藥物提供實驗依據(jù)。本研究設計并合成白樺脂酸衍生物zx-1和zx-2,體外檢測兩個化合物的抗腫瘤活性,對其抗腫瘤作用機制做初步探討。方法:1.白樺脂酸衍生物zx-1和zx-2的設計與合成2.采用MTT法檢測化合物zx-1和zx-2對多種癌細胞的抑制作用,設置對照組和空白組。3.在倒置顯微鏡下觀察經(jīng)化合物zx-1和zx-2作用后,非小細胞肺癌A549細胞的生長狀態(tài)和形態(tài)發(fā)生的變化,并拍照。4.通過細胞劃痕實驗檢測化合物zx-1和zx-2對A549細胞遷移的影響,在顯微鏡下觀察,取樣并拍照。5.運用流式細胞術(Annexin V-FITC/PI雙染法)檢測經(jīng)化合物zx-1和zx-2作用后,A549細胞凋亡率的變化,用流式細胞儀檢測細胞凋亡率。6.運用流式細胞術(PI單染法)檢測經(jīng)化合物zx-1和zx-2作用后,A549細胞周期分布的發(fā)生的改變,用流式細胞儀檢測細胞的周期分布。7.Western blot方法檢測化合物zx-2作用后的A549細胞中的P53、Bax、Bcl-2和Caspase-3幾種蛋白表達的影響。結果:1.合成并得到編號為zx-1和zx-2的白樺脂酸核苷衍生物。2.MTT法檢測結果表明,不同濃度的化合物zx-1和zx-2分別作用于非小細胞肺癌(A549)細胞、胃腺癌(SGC-7901)細胞、肝癌(LUC-7721)細胞、乳腺癌(MCF-7)細胞48 h后,對細胞均產(chǎn)生不同程度的抑制作用,其抑制作用具有明顯的劑量依賴性。3.通過顯微鏡下的細胞形態(tài)學觀察可發(fā)現(xiàn),化合物zx-1和zx-2作用于A549細胞24 h后,細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化,主要表現(xiàn)為細胞體積變小變圓,邊緣模糊化,細胞質(zhì)發(fā)生皺縮,呈現(xiàn)明顯的凋亡趨勢。4.通過細胞劃痕實驗,在顯微鏡下觀察可發(fā)現(xiàn),化合物zx-1和zx-2作用后的A549細胞與對照組相比,劃痕面積明顯增大,細胞向劃痕區(qū)域遷移的能力顯著降低,與對照組相比具有顯著性差異(P0.05)說明兩化合物均可抑制A549細胞的遷移。5.流式細胞術檢測結果顯示,在化合物zx-1和zx-2作用于48 h后,A549細胞的凋亡率均出現(xiàn)明顯的提高,且隨著濃度提高,細胞的凋亡率也隨之增加,呈現(xiàn)明顯的劑量依賴性。由檢測結果也可知道,同等濃度條件下,化合物zx-2誘導A549細胞凋亡的作用比zx-1顯著。6.流式細胞術檢測結果顯示,在化合物zx-1和zx-2作用于48h后,A549細胞的細胞周期分布發(fā)生了明顯的變化,化合物zx-1作用于A549細胞后,可將細胞分裂阻滯于G0/G1期;經(jīng)化合物zx-2處理后,A549細胞的細胞分裂被阻滯于將S期,且其作用均呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴性。7.Western blot實驗結果表明,化合物zx-2作用于A549細胞48 h后,細胞內(nèi)P53、Bax、Bcl-2和Caspase-3幾種蛋白的表達均發(fā)生了變化。與對照組相比較,zx-2可以促進Bax和Caspase-3蛋白的表達,同時下調(diào)Bcl-2和P53蛋白的表達,并且均呈現(xiàn)劑量依賴性。結論:白樺脂酸衍生物zx-1和zx-2能夠抑制多種腫瘤細胞的生長和增殖,能夠誘導非小細胞肺癌A549細胞凋亡壞死,調(diào)節(jié)細胞周期,抑制細胞的遷移,化合物zx-2能夠促進Bax和Caspase-3蛋白的表達,下調(diào)Bcl-2和P53蛋白的表達,這些可能與化合物zx-1和zx-2發(fā)揮抗腫瘤作用的機制有關。
【圖文】：

`A：control group；B：20 mol/L group；C：40 mol/L group；D：60 group；E：80 mol/L group；F：100 mol/L group圖 1.2 不同濃度的化合物 zx-1 作用于 A549 細胞 48h 后細胞的生長狀態(tài)

A：control group；B：20 mol/L group；C：40 mol/L group；D：60 mogroup；E：80 mol/L group；F：100 mol/L group圖 1.3 不同濃度的化合物 zx-2 作用于 A549 細胞 48h 后細胞的生長狀態(tài)
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R914;R96

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 畢毅;徐進宜;吳曉明;葉文才;袁勝濤;張陸勇;;23-羥基白樺脂酸的30位羥基衍生物的合成及其抗腫瘤活性[J];中國藥科大學學報;2007年02期

2 方庭;;抗癌原料藥白樺脂酸生物合成研究取得新進展[J];首都食品與醫(yī)藥;2016年19期

3 劉善新;靳光乾;;HPLC法測定不同地區(qū)市售藕節(jié)中3-表白樺脂酸[J];中藥材;2010年03期

4 劉善新;王萌;靳光乾;郭承軍;蘇本正;;藕節(jié)炭中3-表白樺脂酸含量的測定[J];中國中醫(yī)藥信息雜志;2009年06期

5 李萬華;栗巧云;王小剛;范代娣;;皂角刺中白樺脂酸型三萜化合物提取工藝研究[J];西北大學學報(自然科學版);2011年05期

6 李國強;李韻儀;譚卓杰;;蒲桃中白樺脂酸的分離及結構鑒定[J];廣東化工;2018年08期

7 陳建彬;王泰人;石佳月;;白樺脂酸上調(diào)DHX15表達抑制食管鱗癌細胞增殖和遷移的研究[J];中國藥師;2019年03期

8 任娟;孫興;詹雁;譚鐳;阮佳;徐超群;;LC-MS測定白樺脂酸在大鼠體內(nèi)的血藥濃度[J];中華中醫(yī)藥學刊;2018年12期

9 張麗娟;劉永紅;古同男;鐘家亮;;精氨白樺脂酸的制備及其對三陰性人乳腺癌細胞MDA-MB-231增殖的影響[J];中國藥房;2018年07期

10 相洪琴;;白樺脂酸抗黑素瘤有效[J];國外醫(yī)學情報;1996年04期

相關會議論文 前2條

1 李豪;陳啟和;;白樺脂酸誘導HepG2細胞凋亡的作用及機制研究[A];中國食品科學技術學會第十三屆年會論文摘要集[C];2016年

2 張翠英;劉峰;郭麗麗;張秋燕;程慧平;王階;;酸棗仁醇提物4個活性成分的含量測定[A];2011年中華中醫(yī)藥學會心病分會學術年會暨北京中醫(yī)藥學會心血管病專業(yè)委員會年會論文集[C];2011年

相關博士學位論文 前4條

1 徐軍;白樺脂酸衍生物作為破骨細胞分化抑制劑的設計、合成與活性研究[D];華東師范大學;2013年

2 陳秀瑋;白樺脂酸誘導人宮頸癌HeLa細胞凋亡及機制的研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學;2012年

3 戴林;白樺脂酸納米藥物遞送系統(tǒng)的構建及功效研究[D];北京林業(yè)大學;2016年

4 楊立靖;抗多發(fā)性骨髓瘤細胞的兩種新型單體天然藥物的分子靶點研究[D];華中科技大學;2013年

相關碩士學位論文 前10條

1 葉淑柯;白樺脂酸衍生物的合成及體外抗腫瘤活性的初步探究[D];鄭州大學;2019年

2 關羽虹;白樺脂酸在大鼠體內(nèi)藥代動力學及組織分布研究[D];延邊大學;2015年

3 陳誠;白樺脂酸類衍生物的設計、合成與殺蟲活性研究[D];蘭州大學;2018年

4 謝瑩;馬甲子的提取純化工藝及其特性研究[D];成都中醫(yī)藥大學;2017年

5 李欣;白樺脂酸基于調(diào)節(jié)STAT3信號通路改善[D];延邊大學;2015年

6 劉婧;黃綠蜜環(huán)菌生物催化白樺脂醇合成白樺脂酸的研究[D];浙江大學;2011年

7 趙新湖;云芝的本草考證及其藥理活性成分的研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學;2015年

8 賴玲;白樺脂酸的提取與膠囊劑的制備[D];華中科技大學;2006年

9 姜林錕;臭牡丹莖的化學成分及白樺脂酸與甘草次酸的修飾合成[D];貴州大學;2009年

10 孫嘉;白樺脂酸增強抗腫瘤藥物誘導U266細胞凋亡及其機制研究[D];貴陽醫(yī)學院;2015年

，

本文編號：2688847