本文關(guān)鍵詞：吖啶類衍生物LTW02抗腫瘤多藥耐藥作用及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：實驗目的:評價新型吖啶類衍生物LTW02的體外抗腫瘤活性及抗腫瘤多藥耐藥作用,并探討其作用機制。實驗方法:以K562(人白血病細胞)、K562/ADM(耐阿霉素人白血病細胞)為研究對象,MTT法測定K562/ADM的耐藥倍數(shù);MTT法檢測LTW02的抗腫瘤活性;羅丹明蓄積實驗檢測LTW02對P-gp功能的影響;Hoechst 33342染色并通過高內(nèi)涵活細胞成像系統(tǒng)觀察LTW02作用后細胞凋亡的形態(tài)學變化;PI染色并通過流式細胞儀檢測分析LTW02對細胞周期的影響;RH123/Hoechst 33342染色高內(nèi)涵檢測線粒體膜電位;MDC、Lyso-Tracker Red熒光染色法流式檢測分析細胞自噬的情況;通過免疫印跡法來檢測P-gp、Caspases家族,Bcl-2家族,細胞色素c、p53、LC3、BECN1、m TOR等蛋白的表達,并分析了其相互關(guān)系。實驗結(jié)果:MTT法檢測結(jié)果顯示,阿霉素對敏感細胞株K562的IC50為(1.62±0.10)μg/m L,對耐藥細胞株K562/ADM的IC50為(178.14±7.72)μg/m L,耐藥倍數(shù)為110倍。MTT法檢測顯示,LTW02對白血病敏感細胞株K562和耐藥細胞株K562/ADM均表現(xiàn)出強的細胞毒性,其48 h的IC50分別為(15.09±0.19)μM、(14.96±0.26)μM,并且LTW02對K562/ADM的細胞毒作用呈濃度和時間依賴性。羅丹明蓄積實驗結(jié)果顯示,LTW02能夠濃度依賴性增加Rh123在細胞內(nèi)的蓄積。Western Blot進一步檢測到LTW02使K562/ADM細胞中的P-gp的表達降低。Hoechst 33342染色及細胞周期檢測均證實,LTW02能濃度依賴性誘導耐藥細胞K562/ADM發(fā)生凋亡。LTW02作用于細胞后,在形態(tài)上可見濃染致密的顆粒狀熒光,并有典型的凋亡小體生成。PI染色法顯示,LTW02對K562/ADM細胞周期影響不大,但在DNA直方圖中出現(xiàn)亞二倍體峰(凋亡細胞峰),并且隨著LTW02濃度增加,亞二倍體峰比列增大。為進一步研究LTW02誘導細胞發(fā)生凋亡的機制,通過RH123/Hoechst 33342染色來檢測線粒體膜電位,高內(nèi)涵檢測結(jié)果顯示,LTW02能夠下調(diào)K562/ADM細胞線粒體膜電位。Western Blot分析證實,LTW02可以通過改變細胞線粒體膜電位導致線粒體釋放細胞色素c,細胞色素c進入細胞之后,激活Caspases-9、Caspases-3,啟動線粒體凋亡途徑。我們還發(fā)現(xiàn)LTW02下調(diào)抑凋亡蛋白Bcl-2,上調(diào)促凋亡蛋白Bax,導致Bcl-2家族成員抑凋亡蛋白和促凋亡蛋白的比值下降,使耐藥細胞K562/ADM發(fā)生凋亡。另外,LTW02還可以上調(diào)p53的表達。MDC染色及Lyso-Tracker Red染色法均證實,LTW02能夠誘導K562/ADM細胞發(fā)生自噬。通過Western Blot分析可知,經(jīng)LTW02處理后的細胞,自噬相關(guān)蛋白BECN1表達增多,LC3Ⅰ型向Ⅱ型轉(zhuǎn)化增多。另外,我們還發(fā)現(xiàn)m TOR表達減少。結(jié)論:吖啶類衍生物LTW02對多藥耐藥細胞株K562/ADM的生長有明顯的抑制作用,其通過抑制P-gp的功能及表達,誘導K562/ADM細胞發(fā)生凋亡和自噬,發(fā)揮抗K562/ADM細胞多藥耐藥作用。
【關(guān)鍵詞】：吖啶類衍生物 多藥耐藥 P-糖蛋白 凋亡 自噬
【學位授予單位】：河南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-12
• 第一章 文獻綜述12-26
• 1 引言12
• 2 吖啶類化合物的研究進展12-14
• 2.1 概述12-13
• 2.2 吖啶類化合物在醫(yī)藥領(lǐng)域的研究現(xiàn)狀13-14
• 2.3 吖啶類化合物的抗腫瘤研究進展14
• 3 多藥耐藥的形成機制14-17
• 3.1 MDR基因及其編碼的P-糖蛋白高表達14-15
• 3.2 相關(guān)蛋白介導的多藥耐藥15-17
• 3.3 酶介導的多藥耐藥17
• 4 細胞死亡17-20
• 4.1 細胞凋亡17-18
• 4.2 細胞自噬18-20
• 參考文獻20-26
• 第二章 LTW02對K562和K562/ADM細胞增殖的影響26-36
• 1 實驗材料26-28
• 1.1 腫瘤細胞株26
• 1.2 試劑及主要溶液的配制26-27
• 1.3 主要儀器27-28
• 2 實驗方法28-30
• 2.1 細胞株的復蘇28
• 2.2 細胞株的培養(yǎng)28
• 2.3 細胞株的凍存28-29
• 2.4 倒置相差顯微鏡觀察耐藥細胞K562/ADM形態(tài)29
• 2.5 MTT比色法檢測耐藥細胞K562/ADM的耐藥倍數(shù)29
• 2.6 MTT比色法檢測LTW02對K562和K562/ADM細胞的增殖作用29-30
• 2.7 統(tǒng)計分析30
• 3 實驗結(jié)果30-32
• 3.1 倒置相差顯微鏡觀察耐藥細胞K562/ADM的形態(tài)30
• 3.2 阿霉素對K562及K562/ADM細胞的毒性30-31
• 3.3 LTW02對K562和K562/ADM細胞增值的影響31-32
• 4 討論32-33
• 5 小結(jié)33-34
• 參考文獻34-36
• 第三章 LTW02抗腫瘤多藥耐藥機制研究36-62
• 第一節(jié) LTW02對耐藥細胞K562/ADM P-gp的影響36-44
• 1 實驗材料36-38
• 1.1 腫瘤細胞株36
• 1.2 試劑及主要溶液的配制36-38
• 1.3 主要儀器38
• 2 實驗方法38-40
• 2.1 羅丹明蓄積實驗38
• 2.2 Western Blot檢測P-gp的表達38-40
• 2.3 統(tǒng)計分析40
• 3 實驗結(jié)果40-42
• 3.1 LTW02對耐藥細胞P-gp功能的影響40-41
• 3.2 LTW02對耐藥細胞P-gp表達的影響41-42
• 4 討論42-43
• 5 小結(jié)43-44
• 第二節(jié) LTW02誘導耐藥細胞K562/ADM凋亡的研究44-52
• 1 實驗材料44
• 1.1 腫瘤細胞株44
• 1.2 試劑及主要溶液的配制44
• 1.3 主要儀器44
• 2 實驗方法44-46
• 2.1 Hoechst33342染色法觀察細胞核形態(tài)44-45
• 2.2 PI染色法檢測細胞周期45
• 2.3 Rh123/ Hoechst33342檢測細胞線粒體跨膜電位的變化45
• 2.4 Western blot檢測凋亡相關(guān)蛋白的表達45
• 2.5 統(tǒng)計分析45-46
• 3 實驗結(jié)果46-50
• 3.1 LTW02對耐藥細胞K562/ADM形態(tài)學的影響46
• 3.2 LTW02對耐藥細胞K562/ADM細胞周期的影響46-47
• 3.3 LTW02對耐藥細胞線粒體跨膜電位的影響47-48
• 3.4 LTW02對耐藥細胞凋亡相關(guān)蛋白的影響48-50
• 4 討論50-51
• 5 小結(jié)51-52
• 第三節(jié) LTW02誘導耐藥細胞K562/ADM自噬的研究52-58
• 1 實驗材料52
• 1.1 腫瘤細胞株52
• 1.2 試劑及主要溶液的配制52
• 1.3 主要儀器52
• 2 實驗方法52-53
• 2.1 MDC染色法檢測細胞的自噬情況52-53
• 2.2 Lyso-Tracker Red染色法檢測細胞的自噬情況53
• 2.3 Western blot檢測凋亡相關(guān)蛋白的表達53
• 2.4 統(tǒng)計分析53
• 3 實驗結(jié)果53-56
• 3.1 LTW02對耐藥細胞K562/ADM的自噬誘導作用53-54
• 3.2 LTW02對耐藥細胞K562/ADM溶酶體的影響54-55
• 3.3 LTW02對耐藥細胞自噬相關(guān)蛋白的影響55-56
• 4 討論56-57
• 5 小結(jié)57-58
• 參考文獻58-62
• 附錄62-64
• 英文縮略表62-64
• 致謝64-65

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1 郎許亮;欒旭東;高春梅;蔣宇揚;;吖啶類化合物在抗腫瘤方面的研究進展[J];化學進展;2012年08期

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6 張葆s

本文編號：266853