本文關鍵詞：基于P-gp靶點天然小分子化合物DHA和SM抗腫瘤多藥耐藥作用及其機制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目前,人類生存環(huán)境改變,在一些不利的外部環(huán)境作用下,腫瘤的發(fā)病率正在逐步上升,成為嚴重威脅人類健康、高死亡率的常見疾病�；瘜W治療是臨床上治療腫瘤的最常見和有效的策略。然而,腫瘤多藥耐藥(MDR)已成為臨床化療失敗的重要原因,故抗耐藥研究和發(fā)現(xiàn)耐藥逆轉劑成為抗腫瘤研究的重要方面。來源于自然界的動植物、微生物以及海洋生物的天然藥物是新藥研發(fā)的重要源泉。多酚化合物是存在于自然界的最為普遍的天然化合物,雙聯(lián)芐(Bisbibenzyl)是苔鮮植物中特有的一類天然多酚類化合物,具有昆蟲拒食、抗微生物、抗氧化、抗真菌、細胞毒、植物生長調節(jié)和抗血小板凝集等顯著而廣泛的生物學活性。近期研究報道表明,雙聯(lián)芐化合物可以作用于P-糖蛋白、環(huán)氧合酶等靶點產(chǎn)生生物學活性。目前,已從苔鮮植物中分離得到了許多具有耐腫瘤多藥耐藥的活性化合物。本論文的研究對象之一Dihydroptychantol A (DHA)是山東大學天然藥物研究所從苔蘚植物狹葉花萼苔中得到的新型聯(lián)芐化合物。該化合物已經(jīng)被全合成,同時也證實了其抗真菌活性。為了研究該化合物的其他生物活性,我們首先利用多種多藥耐藥細胞株和其親本的敏感細胞株,用MTT法篩選了包括雙聯(lián)芐在內的多個多酚化合物的逆轉腫瘤多藥耐藥作用,結果發(fā)現(xiàn)DHA的細胞毒性較低(對K562/A02、K562細胞株的IC50均大于40μM),卻能明顯逆轉多藥耐藥腫瘤細胞株對阿霉素的耐藥性。隨后,我們進一步展開了DHA在體外逆轉MDR作用機制的研究。以多藥耐藥的阿霉素抗性的K562/A02細胞為試驗對象,研究了DHA及其衍生物(化合物1-3)的抗腫瘤活性。MTT試驗結果表明,DHA在四種化合物中的抗腫瘤活性是最強的；流式細胞儀檢測結果表明,不同濃度的DHA處理K562/A02細胞后,阿霉素和羅丹明123在K562/A02細胞中的累積明顯增加。同時還減少了羅丹明123的泵出量,說明DHA抑制了P-gp的外排泵功能。用流式細胞儀和RT-PCR對P-gp的表達進行分析。結果發(fā)現(xiàn)DHA處理K562/A02細胞24小時,P-gp蛋白表達和MDR1 mRNA的表達均減少,具有濃度依賴性。但DHA對其親本細胞K562細胞無明顯影響。以上試驗結果證實,DHA能夠有效地逆轉腫瘤多藥耐藥,該作用與其抑制P-gp的功能、蛋白表達和降低MDR1 mRNA水平有關。本論文的另一部分內容是研究從中藥茄屬類植物龍葵中分離得到的甾體生物堿類化合物龍葵堿Solamargine(SM)單體對多藥耐藥細胞生長的抑制作用及機制探討,結果發(fā)現(xiàn)該化合物具有高效低毒的特點。這一部分實驗觀察了化合物SM對三種耐藥細胞K562/A02, KB/VCR和H460/paclitaxel (Taxol)的細胞毒性和相關機制。MTT結果顯示,SM能明顯抑制三種耐藥細胞株的增殖,與對應的敏感細胞株K562,KB和H460相比具有相同甚至更敏感的生長抑制作用。DAPI核染色和流式細胞術實驗結果發(fā)現(xiàn),SM可顯著促進耐藥K562/A02細胞凋亡。RT-PCR結果顯示SM能夠下調MDR1的mRNA水平,同時采用流式細胞術檢測發(fā)現(xiàn)SM能夠抑制P-gp的表達水平。此外,蛋白印記實驗結果顯示SM處理的耐藥細胞中bcl-2和actin蛋白表達降低,bax蛋白表達升高。以上結果提示SM能夠明顯誘導MDR腫瘤細胞的凋亡,這與肌動蛋白裂解和MDR1表達下調有關。這種化合物值得作為一種可以繞過MDR機制的用于治療MDR腫瘤的潛在藥物進行深入的研究。天然藥物在癌癥的化療中扮演著非常重要的角色。本論文的兩種天然產(chǎn)物DHA和SM都具有抗腫瘤多藥耐藥作用,但機制不同,都是具有潛在開發(fā)價值的抗癌先導物,值得更進一步的研究。
【關鍵詞】：雙聯(lián)芐化合物 龍葵堿 多藥耐藥 p-糖蛋白 凋亡
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 中文摘要11-13
• ABSTRACT13-16
• 縮略詞說明16-18
• 第一章 前言18-28
• 1 研究背景18-19
• 1.1 腫瘤耐藥是臨床化療失敗的最主要原因18
• 1.2 腫瘤耐藥的主要發(fā)生機制18-19
• 2 腫瘤細胞產(chǎn)生多藥耐藥的主要靶點機制及途徑19-24
• 2.1 P-gp是腫瘤細胞產(chǎn)生多藥耐藥的主要靶點機制19-21
• 2.2 基于P-gp為靶點的抑制劑是逆轉腫瘤多藥耐藥的有效途徑之一21-22
• 2.3 多酚類中的雙聯(lián)芐化合物以P-gp為靶點發(fā)揮逆轉腫瘤多藥耐藥的作用22-24
• 3 天然產(chǎn)物庫是發(fā)現(xiàn)腫瘤耐藥逆轉劑的寶庫24-28
• 3.1 雙聯(lián)芐化合物25-27
• 3.2 龍葵堿27-28
• 第二章 雙聯(lián)芐類化合物DHA逆轉腫瘤多藥耐藥及其機制的研究28-43
• 1 實驗材料28-30
• 1.1 細胞株28
• 1.2 藥品及試劑28-29
• 1.3 主要儀器設備29-30
• 2 實驗方法30-32
• 2.1 細胞毒性和多藥耐藥逆轉試驗30-31
• 2.2 細胞內阿霉素蓄積實驗31
• 2.3 RT-PCR方法檢測MDR1的mRNA表達31
• 2.4 流式細胞儀檢測細胞P-gp蛋白表達31
• 2.5 細胞內羅丹明123的蓄積與泵出試驗31-32
• 2.6 細胞松弛素B預處理后DHA對細胞內羅丹明123蓄積的影響32
• 2.7 數(shù)據(jù)分析32
• 3 實驗結果32-40
• 3.1 DHA及其衍生物對阿霉素細胞毒性的影響以及細胞耐藥逆轉效應32-35
• 3.2 DHA增加細胞內阿霉素的蓄積濃度35-36
• 3.3 DHA降低P-gp的表達36-38
• 3.4 DHA對細胞內羅丹明123蓄積和泵出的影響38-39
• 3.5 細胞松弛素B預處理后DHA對細胞內羅丹明123蓄積的影響39-40
• 4 討論40-43
• 第三章 龍葵堿SM對多藥耐藥腫瘤細胞生長的抑制作用及機制研究43-56
• 1 實驗材料43-44
• 1.1 細胞株43
• 1.2 化學試劑43-44
• 1.3 試劑配制44
• 1.4 實驗儀器44
• 2 實驗方法44-49
• 2.1 細胞毒性實驗44-45
• 2.2 DAPI染色檢測細胞凋亡45
• 2.3 流式細胞儀檢測細胞調亡45
• 2.4 蛋白印跡法檢測蛋白表達水平45-48
• 2.5 流式細胞儀檢測P-gp蛋白表達48
• 2.6 RT-PCR法檢測MDR1的mRNA表達水平48-49
• 2.7 免疫熒光染色檢測細胞骨架蛋白actin表達水平49
• 2.8 統(tǒng)計分析49
• 3 實驗結果49-54
• 3.1 SM抑制多藥耐藥腫瘤細胞增殖49-50
• 3.2 SM誘導耐阿霉素的K562/A02細胞發(fā)生凋亡50-51
• 3.3 SM抑制K562/A02細胞P-gp的表達51-53
• 3.4 SM抑制K562/A02和KB/VCR細胞中actin的表達53-54
• 4 討論54-56
• 第四章 全文結論56-57
• 參考文獻57-65
• 致謝65-66
• 攻讀學位期間發(fā)表的論文66-67
• 附件67

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 蘆穎;李慶華;龐天翔;;腫瘤細胞內pH值改變與腫瘤多藥耐藥的關系[J];中國藥理學通報;2007年09期

  本文關鍵詞：基于P-gp靶點天然小分子化合物DHA和SM抗腫瘤多藥耐藥作用及其機制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：258913