【摘要】：雷公藤臨床主要用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腎小球腎炎、腎病綜合征、紅斑狼瘡等疾病,療效確切。但其不良反應(yīng)不容忽視。雷公藤的不良反應(yīng)發(fā)生的主要原因有雷公藤化學(xué)成分復(fù)雜且其藥效、毒性物質(zhì)基礎(chǔ)尚不明確,缺乏科學(xué)、有效的質(zhì)量評(píng)價(jià)和控制方法,提取純化工藝多樣,導(dǎo)致不同廠家生產(chǎn)的雷公藤制劑療效及毒副作用差異大,臨床上缺乏使用指南。雷公藤中有效成分大多難溶于水,在很大程度上降低了雷公藤制劑的生物利用度。本課題在課題組前期研究基礎(chǔ)上優(yōu)化HPLC色譜條件,建立了 8批不同產(chǎn)地雷公藤藥材的指紋圖譜,得到35個(gè)共有峰。進(jìn)行了 HPLC-MS分析,對(duì)指紋圖譜中各色譜峰進(jìn)行鑒定,利用對(duì)照品以及文獻(xiàn)比對(duì),35個(gè)特征峰中鑒定了 19個(gè)化學(xué)成分,其中二萜類成分7個(gè),三萜類成分6個(gè),生物堿類成分5個(gè)。結(jié)合藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,采用偏最小二乘分析法構(gòu)建了譜效關(guān)系。以譜效分析的結(jié)果為指導(dǎo),按照保留"主要藥效成分"、控制"藥效兼毒性成分"、除去"主要毒性成分",利用大孔樹脂或硅膠色譜法,制備不同成分比例的組分,然后進(jìn)行HPLC分析,通過與譜效結(jié)果比對(duì)初步篩選出符合低毒高效要求的組分,最后進(jìn)行藥效和毒性驗(yàn)證對(duì)這些組分篩選并進(jìn)行藥效、安全性驗(yàn)證,篩選出低毒高效提取物組分T3-3組分,T3-3的制備工藝為:取粗浸膏適量,加入適量甲醇溶解,按1:1加入硅膠(100～200目)拌樣,用10倍量硅膠(100～200目)裝柱,用二氯甲烷-甲醇(80:1)展開劑洗脫(10倍柱床體積),收集洗脫液,減壓濃縮回收有機(jī)試劑,得浸膏,真空干燥,即得。將得到的雷公藤低毒高效提取物用β-環(huán)糊精進(jìn)行包合,對(duì)包合物的制備方法、包合物的投料比、包合時(shí)間、以及加水量進(jìn)行了單因素考察。初步確定了雷公藤低毒高效包合物的制備工藝為確以研磨法,加水量2倍(純化水:β-環(huán)糊精=2:1)投料比(β-環(huán)糊精:雷公藤低毒高效提取物)為10:1研磨lh后即得。選用SEM法、X射線衍射法、DSC法對(duì)雷公藤低毒高效包合物進(jìn)行物相鑒定,驗(yàn)證了包合物的形成。同時(shí)測(cè)定了包合物的平衡溶解度,結(jié)果表明將雷公藤提取物制成包合物后,其有效成分的的溶解度均顯著提高,在蒸餾水中:雷公藤甲素的溶解度提高約3倍,雷公藤內(nèi)酯酮的溶解度提高約46倍,雷公藤紅素的溶解度提高約3倍,雷公藤內(nèi)酯甲的溶解度提高約2倍,雷酚內(nèi)酯,雷公次堿的溶解度均顯著提高。測(cè)定了包合物的溶出度,與雷公藤提取物相比,將雷公藤提取物制成包合物后,提取物各有效成分的溶解度顯著提高。
【圖文】：

逑２．２．３流動(dòng)相的選擇由于雷公藤中化學(xué)成分較復(fù)雜，，成分結(jié)構(gòu)相似難以完全分離。逡逑流動(dòng)相為乙腈－水系統(tǒng)分離效果不理想，見圖１－２邋（Ａ）。通過查閱文獻(xiàn)［５２］，在流動(dòng)相中逡逑加入磷酸能夠改善分離效果，但是加入磷酸則后續(xù)無法進(jìn)行液質(zhì)分析。因此考察加入其逡逑他酸如甲酸或乙酸對(duì)分離效果的影響，在水相中分別加入０．１％的乙酸和甲酸，色譜圖逡逑見圖１－２邋（Ｂ）和圖１－２邋（Ｃ），水相加入０．１％的乙酸后基線向下漂移，且色譜峰數(shù)量較逡逑少；水相加入０．１％的甲酸后基線向上漂移，但色譜峰數(shù)量較大，基線漂移可能是由于逡逑甲酸存在末端吸收，甲酸含量隨著水相比例增加而增加引起的，故考慮在乙腈和水相中逡逑各加入０．０５％的甲酸，這樣甲酸保持相對(duì)穩(wěn)定，結(jié)果見圖１－２邋（Ｄ），基線漂移和分離效逡逑果得到顯著改善，故確定流動(dòng)相為乙腈（含０．０５％甲酸）－０．０５％甲酸水溶液。逡逑———邐

不同產(chǎn)地雷公藤供試品溶液，按“２．２．１”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，記錄１５０邋ｍｉｎ色譜圖。逡逑經(jīng)比較８?jìng)�(gè)不同產(chǎn)地雷公藤樣品測(cè)定的ＨＰＬＣ圖譜，從中選定了邋３５個(gè)色譜峰為雷公藤逡逑指紋圖譜的特征峰，結(jié)果見圖１－４。逡逑Ｉ—邋邋邐＾？’上」邐ｙ邋、邐？邋？？邋？逡逑：一二二：：｝二々一＾私逡逑ｆ邐Ｉ邐？邐．＇？？邐？邐？邐？邐？逡逑０＜？邐ｆｔ邋Ｍ邐？邋４１邐Ｗ邋＜■邐Ｍ邋？邐ａＫ邋９邐｜Ｍ邋４＊邐＊１逡逑ｔ／ｍｉｎ逡逑圖１－４八個(gè)雷公藤藥材產(chǎn)地的ＨＰＬＣ指紋圖譜逡逑Ｆｉｇ．邋１－４邋ＨＰＬＣ邋ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ邋ｏｆ邋ｅｉｇｈｔ邋Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ邋ｗｉｌｆｏｒｄｉｉ邋ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ邋ａｒｅａｓ逡逑ＳＩ：福建；Ｓ２：湖南；Ｓ３：云南；Ｓ４：安徽；Ｓ５：廣東；Ｓ６：廣西；Ｓ７：湖北；Ｓ８：江蘇逡逑１５逡逑
【學(xué)位授予單位】：福建中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R943

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本文編號(hào)：2576584