發(fā)布時間：2019-11-29 15:51

【摘要】：腦源性神經營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)是腦內廣泛存在的一種蛋白質,由腦組織合成,主要存在于中樞神經系統(tǒng),尤以上丘腦、海馬、大腦皮層和紋狀體部位含量最高。BDNF在中樞神經系統(tǒng)發(fā)育中起重要作用,能夠維持多種神經元的存活、分化及生長發(fā)育,并促進受損神經元的恢復與再生對突觸間經典遞質的釋放有增強作用,影響神經元的可塑性。研究發(fā)現,BDNF含量和分布的變化與很多神經退行性疾病的發(fā)病機制有很大關系,且向腦內補充外源性BDNF對神經退行性疾病有治療作用。血腦屏障(Blood-brain barrier, BBB)主要由腦毛細血管內皮細胞(Brain Micro vascular Endothilial Cells, BMECs)及其之間的緊密連接組成,若外源性物質要通過BBB必須滿足兩個條件：1)分子量必須小于500Da；2)脂溶性高。由于BDNF屬于大分子陽離子蛋白質,外源性BDNF很難通過血腦屏障而發(fā)揮作用,因此,如何將外源性BDNF蛋白轉運入腦仍是一項挑戰(zhàn)。迄今為止,克服BBB的中樞系統(tǒng)給藥方法包括兩類：其一是侵入性給藥方法；包括腦內定位注射、腦室內或海馬穿刺給藥、腦部移植工程化細胞等,然而該類方法因其缺點：藥物很快被組織清除、不易擴散、濃度梯度大、技術要求高、風險大等而不能應用于臨床。其二是非侵入性給藥方法；該類方法通過載體的介導將生物大分子轉運入腦,其具有高效、低毒、安全、方便等優(yōu)點。 將蛋白質或多肽載體與外源性大分子物質通過基因工程的方法連接,在工程菌中表達融合蛋白,可以實現載體協助大分子物質進行入腦轉運�？袢《咎堑鞍�(rabies virus glycoprotein, RVG)具有嗜神經性,能夠攜帶其他物質向中樞神經系統(tǒng)轉運。序列分析顯示, RVG上的189-214和330-357氨基酸序列是病毒與神經元連接的關鍵部位,我們將330-357這段序列與含九個精氨酸的膜轉導肽(cell penetrating peptides, CPPs)通過3個甘氨酸連接后形成RVG衍生肽(RVG-derived peptide, RDP (KSVRTWNEIIPSKGCLRVGGRCHPHVNGGGRRRRRRRRR)). RDP能夠攜帶多種大分子蛋白質穿過血腦屏障并發(fā)揮生物學作用。本文試圖通過基因工程的方法將RDP基因與BDNF基因融合并在大腸桿菌中誘導表達,將融合蛋白經尾靜脈注射入小鼠體內,通過ELISA法檢測RDP介導的BDNF蛋白在小鼠體內的分布,采用Morris水迷宮的方法探究RDP-BDNF對東莨菪堿所致認知障礙模型小鼠的作用,并研究其作用機理。實驗結果表明,重組的RDP-BDNF能夠跨血腦屏障并發(fā)揮其神經營養(yǎng)活性,能改善東莨菪堿誘導的認知功能障礙小鼠的學習記憶能力,其作用機制可能與提高認知障礙模型小鼠腦內BDNF水平,從而增強膽堿能神經系統(tǒng)的功能及維持氧化應激狀態(tài)平衡有關。
【學位授予單位】：西南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R965

【參考文獻】

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本文編號：2567525