【摘要】：化療是一種重要的腫瘤治療方法，但腫瘤細胞多藥耐藥（multidrug resistance,MDR）的出現(xiàn)使化療面臨嚴峻的挑戰(zhàn)，甚至引起化療的失敗。腫瘤MDR是指腫瘤細胞對一種抗腫瘤藥物產生耐藥性時會對其他未接觸過的，結構及作用機制不同的藥物產生交叉耐藥性。腫瘤MDR產生機制有很多種，其中研究最深入的包括為ABC（ATP-binding-cassette）轉運蛋白家族，與MDR相關的ABC跨膜轉運蛋白即藥物外排泵主要有三種：乳腺癌耐藥蛋白（BCRP）、多藥耐藥相關蛋白（MRP）和P糖蛋白（P-gp）。P-gp，BCRP和MRP三者結構相似，但外排的藥物不同。其中又以P-gp在三中轉運蛋白中作用機制研究最深入。P-gp抑制劑根據(jù)藥物選擇性、發(fā)展時間和活性大小可分為三代：以維拉帕米為代表的Ca2+通道抑制劑等為第一代P-gp抑制劑，其缺點主要是選擇性差，毒副作用大；第二代為第一代的衍生物，包括PSC833，右維拉帕米等，第二代較第一代P-gp結合能力強，但第二代P-gp抑制劑作用于P-450，干擾藥物代謝，限制了其應用；第三代P-gp抑制劑主要包括Zosuquidar（LY335979），Tariquidar（XR9576）等，選擇性較好，毒副作用低，具有良好的開發(fā)前景，目前已有多種進入臨床試驗。 高效、高特異性MDR逆轉劑已經(jīng)成為人們研究的熱點，雖然第三代P-gp抑制劑選擇性較好，但是也存在體內試驗結果不夠理想等一系列問題，所以高特異性、高效、低代謝酶影響、低藥代動力學影響的P-gp抑制劑仍急待研發(fā)。本課題組多年來致力于腫瘤MDR的研究，已取得一定成果，設計合成了一系列海洋生物堿Ningalin B、槲皮素以及EGCG（表沒食子兒茶素沒食子酸酯）的甲基化類似物，并對所合成的化合物進行了MDR逆轉活性評價。 EGCG為茶多酚的主要活性成分，本課題組前期對EGCG進行了甲基化修飾，其MDR逆轉活性顯著增強，并以此為基礎設計合成了一系列EGCG的全甲基化結構類似物，其中多種化合物可逆轉人體乳腺癌耐藥細胞株LCC6MDR對紫杉醇（paclitaxel）的耐藥，甚至RF可達48.2，并且沒有發(fā)現(xiàn)毒副作用，而陽性對照藥維拉帕米的RF僅為3.8。本論文在實驗室已有研究成果的基礎上，依據(jù)P-gp介導的MDR機制，以EGCG及兒茶素（C）為原料，通過改變全甲基化EGCG的C-3位側鏈基團、C-3立體構型、C-2位立體構型以及B環(huán)上甲氧基數(shù)目，采用半合成的方法合成了22個全新的甲基化EGCG類似物，所合成的化合物進行了結構確證和以P-gp為靶點的MDR逆轉活性測試，其中15個化合物已完成P-gp介導的MDR逆轉活性測試，其中14個化合物的MDR逆轉活性高于陽性對照藥維拉帕米（RF=3.8），1μM化合物34可逆轉人體乳腺癌細胞株LCC6對paclitaxel的耐藥，其RF可達53.6。其中已經(jīng)完成細胞毒測試的6個化合物結果表明所合成的化合物均無明顯細胞毒性，4個化合物已經(jīng)完成EC50測試，最低可達140nmol，Therapeutic index高于714，顯示所合成的化合物為低毒高效的腫瘤MDR逆轉劑，并在此基礎上總結了甲基化EGCG類似物的初步構效關系，希望為腫瘤MDR的研究提供參考。
【圖文】：

圖 1-1NBD 結構域的結構示意圖ller[21]等解析出了小鼠 P-gp 分子的 X 射線衍射晶體結構 分子結構同源性可達 93%，這為同源模建提供了良好種能量依賴性的跨膜藥物外排泵，可通過將藥物外排濃度，是產生 MDR 的主要原因之一。泵 P-gp 具有 ATP 依賴性，P-gp 通過 ATP 的水解獲得能，這樣就導致了胞內藥物濃度的下降，，是產生 MDR 的 外排作用的機制有很多假說，目前得到較多認可的為”理論[22,23]。該理論認為 P-gp 將底物泵出細胞的分子機入細胞雙分子層后，P-gp 識別并通過其底物結合位 結合并水解 ATP 釋放能量使 P-gp 的構象發(fā)生，從而至胞外，將底物排出[24]。ATP 水解產生的 ADP 解離，，使 P-gp 恢復原來的構想，這樣 P-gp 的藥物外排功能

圖 1-2 P-gp 外排泵的工作模式首先，通過競爭性或者非競爭性的抑制 P-gp 的底物結合位點以及阻滯 ATP的結合、水解等方式抑制 P-gp 的功能；其次，通過反義 RNA、RNA 干擾等技術，從基因水平上逆轉 P-gp 的過表達[30]；第三，甲基蓮心堿等物質可以同時抑制 P-gp 的功能和表達量；第四，一氧化氮（NO）對 P-gp 的表達具有調節(jié)作用調節(jié)。研究表明 NO 可以改變核因子κB（NF-κB）的蛋白結合，核因子κB 水平提高可以增加 MDR1 基因轉錄，從而提高 P-gp 在腸道的表達。NO 合酶抑制劑 L-NIL 可顯著降低 NF-κB 的蛋白結合從而對 P-gp 的過表達產生抑制作用而逆轉 MDR[31]。依據(jù)選擇性、逆轉強度大小以及年代學的發(fā)展，P-gp 為靶點的逆轉劑已發(fā)展有三代[32]。研究表明第一代 P-gp 抑制劑多數(shù)是作為 P-gp 的底物，能競爭性結合 P-gp的底物結合位點，從而達到抑制 P-gp 以減少抗癌藥物的外排[33]。第一代 P-gp 抑制劑主要是作為鈣離子通道阻滯劑和鈣調素抑制劑等起作用。維拉帕米
【學位授予單位】：中國海洋大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R914

【參考文獻】

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本文編號：2567521