【摘要】：近年來(lái),基于腫瘤微環(huán)境與正常組織微環(huán)境之間的差異來(lái)設(shè)計(jì)抗腫瘤藥物遞送系統(tǒng),在腫瘤治療過(guò)程中占據(jù)著越來(lái)越重要的地位。由于納米抗腫瘤藥物遞送系統(tǒng)能改善目前所用化療藥物的安全性及提高治療效果,因此納米抗腫瘤藥物遞送系統(tǒng)的研究和應(yīng)用引起了廣泛的關(guān)注。此外,為了進(jìn)一步增強(qiáng)治療效果,這些納米抗腫瘤藥物遞送系統(tǒng)被設(shè)計(jì)為基于內(nèi)部刺激的納米藥物遞送系統(tǒng),即pH敏感藥物遞送系統(tǒng),還原敏感納米藥物遞送系統(tǒng),及基于外部刺激的納米藥物遞送系統(tǒng),例如光輻射納米藥物遞送系統(tǒng)�；诖�,為了改善化療藥物的安全性及提高治療效果,本論文基于不同的材料(譬如天然聚電解質(zhì)、可控合成的嵌段共聚物及氧化石墨烯)構(gòu)建具有不同結(jié)構(gòu)的抗腫瘤藥物遞送系統(tǒng),而且不同的相互作用(譬如靜電相互作用、疏水相互作用及π-π相互作用)被用來(lái)有效地負(fù)載抗腫瘤藥物阿霉素。此外,這些抗腫瘤藥物遞送系統(tǒng)具有如pH、還原及光響應(yīng)特性,而且集靶向性、低細(xì)胞毒性、可降解性及分子成像特性與一身。本論文主要包括以下幾個(gè)部分。首先,我們通過(guò)層層自組裝方法將FITC功能化殼聚糖及透明質(zhì)酸鈉(分別作為聚陽(yáng)離子及聚陰離子)包覆在磺化聚苯乙烯微球模板上,最后一層控制為乳糖酸功能化殼聚糖,再刻蝕去除磺化聚苯乙烯模板從而制備了該具有pH敏感熒光肝靶向功能的聚電解質(zhì)空心微球(CSFITC/HA)4/GC。其粒徑約為260 nm,且動(dòng)態(tài)光散射分析表明其具有pH及離子強(qiáng)度雙重響應(yīng)特性。經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明,該聚電解質(zhì)空心微球具有pH敏感熒光、肝靶向功能及低細(xì)胞毒性。在此基礎(chǔ)上,為了簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)步驟,縮短實(shí)驗(yàn)周期,通過(guò)聚電解質(zhì)共沉淀法將乳糖酸功能化殼聚糖與透明質(zhì)酸鈉構(gòu)建成具有離子交換海綿結(jié)構(gòu)的聚電解質(zhì)納米微球GC/HA NPs。其粒徑約為80 nm。該聚電解質(zhì)納米微球表面電荷可在中性條件或堿性條件下的負(fù)電荷翻轉(zhuǎn)成在酸性條件下的正電荷,揭示了其在響應(yīng)腫瘤組織外環(huán)境pH遞送抗腫瘤藥物方面的潛在應(yīng)用。此外,該具有獨(dú)特離子交換海綿結(jié)構(gòu)的聚電解質(zhì)納米微球具有高的抗腫瘤藥物阿霉素的藥物負(fù)載容量及封裝效率,及pH觸發(fā)的藥物釋放。MTT實(shí)驗(yàn)及熒光顯微鏡分析揭示了阿霉素負(fù)載GC/HA NPs不僅擁有良好的生物相容特性,且具有高效的肝靶向功能。同時(shí),我們還通過(guò)簡(jiǎn)單的離子(pH敏感),共價(jià)(還原敏感)雙交聯(lián)FA及Rh 6G功能化透明質(zhì)酸(FA-HA-Rh 6G)制備了一種具有ph/還原響應(yīng)性熒光標(biāo)記葉酸靶向的藥物遞送系統(tǒng)(dclfa-ha-rh6gnps)。該藥物遞送系統(tǒng)能有效地負(fù)載抗腫瘤藥物阿霉素(dlc及dee分別為0.7161±0.0341mg/mg及71.60%±3.4%)),且擁有在模擬腫瘤組織微環(huán)境條件下理想的釋放行為。mtt實(shí)驗(yàn)及clsm分析揭示了該雙交聯(lián)的透明質(zhì)酸藥物遞送系統(tǒng)不僅具有良好的生物相容特性,而且能有效地實(shí)現(xiàn)對(duì)hela細(xì)胞的葉酸受體介導(dǎo)的靶向。其次,通過(guò)在殼聚糖骨架上引入peg構(gòu)建了該具有生物相容特性的peg功能化殼聚糖基共聚物,該共聚物能在ph6.8的pbs中分子組裝成膠束�；谠搩捎H性殼聚糖基膠束,通過(guò)調(diào)節(jié)殼聚糖的粘均分子量及peg2000-cho的接入量,構(gòu)建了一系列可控形貌及粒徑的dox/cs-peg膠束。此外,在pbs(ph7.4)下的dox的累計(jì)釋放量?jī)H為2.68wt%,而在pbs(ph5.0)下可達(dá)到72.76wt%的累計(jì)釋放量。該在正常生理?xiàng)l件下的穩(wěn)定性及在弱酸性條件(ph5.0)下的暴釋行為使得該dox/cs100k-peg2具有腫瘤微環(huán)境響應(yīng)的“開(kāi)關(guān)”阿霉素釋放特性。mtt實(shí)驗(yàn)及clsm分析表明,該抗腫瘤藥物遞送系統(tǒng)可以有效地將抗腫瘤藥物阿霉素遞送進(jìn)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞核,進(jìn)而顯著地抑制該腫瘤細(xì)胞。再次,我們聯(lián)合原子轉(zhuǎn)移自由基聚合,開(kāi)環(huán)聚合,點(diǎn)擊化學(xué)及酯基水解反應(yīng)制備了一種能自組裝成核-殼-冕型膠束的三嵌段共聚物(peg43-b-p(aa30-co-tba18)-b-pcl53)。該三嵌段共聚物通過(guò)二硫鍵交聯(lián)后能有效的調(diào)控其藥物釋放行為,其粒徑約為52nm。該藥物遞送系統(tǒng)具有在正常生理?xiàng)l件下慢的阿霉素釋放能力,而在模擬腫瘤組織條件下其具有快速的抗腫瘤藥物釋放能力。另外,生物毒性實(shí)驗(yàn)及hepg2細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)共同揭示了該藥物遞送系統(tǒng)具有良好的生物相容特性,且阿霉素負(fù)載的該膠束具有與純藥阿霉素相媲美的抗腫瘤活性。同時(shí),clsm分析也證明了該結(jié)論。此外,通過(guò)原子轉(zhuǎn)移自由基聚合、水解反應(yīng)及酯化反應(yīng)制備了一種具有光敏感性的兩親性共聚物peg43-b-p(aa76-co-nbac35-co-tba9)。在紫外輻照下該膠束的形貌轉(zhuǎn)變賦予其良好的釋放行為及其能通過(guò)觸發(fā)進(jìn)而增強(qiáng)阿霉素的遞送效率。該共聚物膠束在365nm紫外光下具有快速紫外響應(yīng)特性,其光斷裂反應(yīng)可在二十分鐘內(nèi)完成。最后,氧化石墨烯二維納米材料具有大的比表面積,大的苯環(huán)共軛體系及低細(xì)胞毒性,可以有效地通過(guò)π-π堆積作用負(fù)載具有苯環(huán)結(jié)構(gòu)的抗癌藥物小分子dox。本工作中通過(guò)將葉酸端基化peg共價(jià)修飾氧化石墨烯,使其具有葉酸靶向性,及進(jìn)一步改善的低細(xì)胞毒性。實(shí)驗(yàn)證明,該藥物遞送系統(tǒng)具有高的阿霉素負(fù)載效率,且具有精確的腫瘤細(xì)胞靶向性。在此工作的基礎(chǔ)上,發(fā)展了一種具有理想尺寸及形貌的氧化石墨烯納米微球基藥物遞送系統(tǒng),其通過(guò)二硫鍵將低細(xì)胞毒性的peg功能化海藻酸鈉共價(jià)耦聯(lián)至氧化石墨烯基納米微球表面,且其具有高效的藥物遞送能力。此外,該藥物遞送系統(tǒng)在血液循環(huán)中能防止其所負(fù)載的抗腫瘤藥物的漏釋,且其能在腫瘤微環(huán)境高濃度GSH下剝離脫落海藻酸層。同時(shí),通過(guò)在PEG功能化氧化石墨烯納米微球表面鈰引發(fā)自由基聚合甲基丙烯酸,再通過(guò)胱胺交聯(lián),首次報(bào)道了具有理想尺寸及分布的還原觸發(fā)功能的氧化石墨烯納米微球基藥物遞送系統(tǒng)。且該藥物遞送系統(tǒng)通過(guò)引入交聯(lián)聚甲基丙烯酸殼層,從而減少了其在模擬正常組織條件下所負(fù)載的抗腫瘤藥物阿霉素的漏釋,且其能在模擬腫瘤組織還原劑存在下高效地釋放所負(fù)載的抗腫瘤藥物阿霉素。體外釋放實(shí)驗(yàn)表明,該藥物遞送系統(tǒng)在pH 5.0及10 m M GSH下的藥物的累計(jì)釋放量是在pH 7.4及10μM GSH時(shí)的6倍。
【圖文】：

送系統(tǒng)藥物遞送機(jī)理：(i) 腫瘤組織增強(qiáng)滲透及滯留效向);(ii) 腫瘤細(xì)胞通過(guò)受體介導(dǎo)靶向（主動(dòng)靶向）[3]通常，一些腫瘤組織表達(dá)一些特異性受體，而這少表達(dá)。因而相對(duì)于納米藥物遞送系統(tǒng)的被動(dòng)靶主動(dòng)靶向引起了越來(lái)越廣泛的研究(圖 1-1)。譬常在諸多腫瘤細(xì)胞表面過(guò)表達(dá)[5]。為了進(jìn)一步利特征，諸多的具有靶向特性的片段（例如，葉[8]、親和體[9]及抗體[10]均被耦聯(lián)至納米微球表面(圖 1-1)。更有趣的是，腫瘤組織微環(huán)境與正常。通常，其 pH 較低，且擁有較高的還原電勢(shì)水境中，一些酶是過(guò)度表達(dá)的，例如基質(zhì)金屬蛋白被刻意地設(shè)計(jì)和構(gòu)建使其具有刺激控制的腫瘤部刺激，智能藥物遞送系統(tǒng)也能響應(yīng)此類刺激進(jìn)化學(xué)特性的改變，譬如，，光輻射[14]，溫度[15]，超

過(guò)納米藥物遞送系統(tǒng)細(xì)胞靶向性傳遞抗腫瘤化療藥物包括以下體與配體之間的相互作用將納米藥物遞送系統(tǒng)結(jié)合至靶向細(xì)胞導(dǎo)的內(nèi)吞實(shí)現(xiàn)納米藥物遞送系統(tǒng)的細(xì)胞攝��；（iii）胞內(nèi)藥物釋納米微球基抗腫瘤藥物遞送系統(tǒng)的發(fā)展中，其已取得諸米抗腫瘤藥物遞送系統(tǒng)擁有豐富的幾何形狀，譬如球狀此類多樣的納米藥物遞送平臺(tái)能提供多功能特性。其在究。目前，存在著多種此類納米抗腫瘤藥物遞送系統(tǒng)，、聚合物膠束、碳基材料、氧化鐵納米微球及金納米微有著獨(dú)特的物理化學(xué)性質(zhì)，譬如表面功能化、核殼結(jié)構(gòu)瘤治療領(lǐng)域深度理解上述材料的物理化學(xué)性質(zhì)與生物重要的，因?yàn)樯鲜黾{米材料在應(yīng)用過(guò)程中由于其原始的性[19]會(huì)引起諸多有害的不良反應(yīng)[20,21]或炎癥[22]。例如，烯亞胺載體或聚酰胺胺型樹(shù)狀物這些聚陽(yáng)離子納米材不良的毒性反應(yīng)[23-25]。然而，此類材料毒性可以在其表[26]
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R943


本文編號(hào)：2537213