【摘要】：致病菌對人類社會生活造成的困擾不容忽視,在對抗致病菌的過程中,抗菌藥物發(fā)揮了重大的作用,但同時也帶來了困擾。在醫(yī)院及各個社區(qū)抗菌藥物的濫用現(xiàn)象很普遍,由此導(dǎo)致的耐藥菌株對人類公共衛(wèi)生安全造成了很大的威脅。細菌受到的強烈生存壓力是耐藥菌株產(chǎn)生的主要原因,故尋求既可以降低致病性又對病原體生長不影響的新型抗菌藥物迫在眉睫。Ⅲ型分泌系統(tǒng)(T3SS)是存在于革蘭氏陰性致病菌中高度保守的毒力因子,是一種注射器狀的毒性蛋白運輸系統(tǒng),分泌效應(yīng)蛋白到宿主細胞促進侵襲。本論文選用具有感染致病性的鼠傷寒沙門氏菌菌株,進行T3SS的具體探討。首先對提取分離的20個異戊烯基取代化合物采用SDS-PAGE進行初步的篩選,并對有抑制作用的化合物進行復(fù)篩確認及Western Blotting驗證,并對其構(gòu)效關(guān)系進行簡單的探討,未發(fā)現(xiàn)顯著的共同結(jié)構(gòu)特征。其中,作用最強的是Licoflavonol(LCF),對毒性蛋白SipA、SipB、SipC和SipD均有明顯的抑制作用,且對鞭毛蛋白FliC幾乎沒有影響。同時,LCF對T3SS毒性蛋白的抑制呈現(xiàn)明顯的濃度梯度依賴,且對沙門氏菌的正常生長幾乎沒有影響。故選取LCF進行作用機制的深入探討。隨后對LCF作用機制研究,沙門氏菌侵襲HeLa細胞的同時加藥檢測SipC含量,發(fā)現(xiàn)LCF抑制SipC的轉(zhuǎn)運;通過RT-PCR檢驗LCF對T3SS相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄影響,發(fā)現(xiàn)LCF通過抑制SicA/InvF基因的轉(zhuǎn)錄而抑制SipC毒性蛋白的分泌。另外檢測LCF對針尖蛋白的影響,發(fā)現(xiàn)LCF對針尖復(fù)合物NC中PrgH的組裝影響不大。同時,對課題組前期篩選得到的活性較好的抑制劑Csn-B進行合成,以尋找Csn-B與相關(guān)蛋白的結(jié)合位點。本論文的合成途徑為將原料3,5-二甲氧基苯乙酸進行�；磻�(yīng),然后脫甲基反應(yīng),最后酯化形成目標(biāo)產(chǎn)物Csn-B。最后,本論文針對鼠傷寒沙門氏菌T3SS中分子伴侶SicA及轉(zhuǎn)錄因子InvF基因進行克隆、異源表達與蛋白質(zhì)的結(jié)晶及與小分子化合物的共晶。經(jīng)過不斷的嘗試及不同constructs的構(gòu)建,SicA蛋白得到柱狀棱型晶體;而InvF蛋白從最初的包涵體終于可溶。綜上,本論文主要進行T3SS抑制劑的篩選,發(fā)現(xiàn)新型天然化合物L(fēng)CF,并對其作用機制進行探索,對于開發(fā)新型抗耐藥型抗生素具有積極的意義。
[Abstract]:The trouble caused by pathogenic bacteria to human social life can not be ignored. In the process of anti-pathogenic bacteria, antibacterial drugs play an important role, but at the same time, they also bring trouble. The abuse of antibiotics is widespread in hospitals and communities, and the drug-resistant strains pose a great threat to human health and safety. The strong pressure on bacteria to survive is the main cause of drug-resistant strains. Therefore, it is urgent to seek new antimicrobial agents that can reduce pathogenicity without affecting the growth of pathogens. Type 鈪，

本文編號：2465889