本文選題：人胚胎干細(xì)胞分化的心肌細(xì)胞 + 心臟毒性��； 參考：《中國(guó)新藥雜志》2017年07期

【摘要】：目的:建立適合于藥物心臟毒性評(píng)價(jià)的人胚胎干細(xì)胞分化的心肌細(xì)胞(hESC-CM)模型,并采用此模型評(píng)價(jià)化合物潛在的心臟毒性。方法:研究選用不同種類的心臟毒性藥物:蒽環(huán)類抗癌藥阿霉素(0.2,1,5,10和20μmol·L~(-1))、酪氨酸激酶抑制劑伊馬替尼(0.2,1,5,10和20μmol·L~(-1))、β受體激動(dòng)劑異丙腎上腺素(0.001,0.01,0.1,1和10μmol·L~(-1))、鈣離子通道阻滯劑維拉帕米(0.1,0.3,1,3和10μmol·L~(-1)),分別與hESC-CM孵育,采用實(shí)時(shí)細(xì)胞分析法和高內(nèi)涵細(xì)胞成像技術(shù)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)心肌細(xì)胞搏動(dòng)的頻率、振幅、規(guī)則性及線粒體膜電位等指標(biāo)在給藥前后的變化,建立人胚胎干細(xì)胞分化的心肌細(xì)胞體外心臟毒性評(píng)價(jià)模型。應(yīng)用此模型評(píng)價(jià)化合物A的心臟毒性。結(jié)果:阿霉素各濃度與hESC-CM共同孵育時(shí),細(xì)胞的搏動(dòng)振幅、搏動(dòng)頻率、搏動(dòng)規(guī)則指數(shù)以及線粒體膜電位均降低;20μmol·L~(-1)的伊馬替尼抑制hESC-CM的搏動(dòng)振幅、搏動(dòng)頻率、搏動(dòng)規(guī)則指數(shù)和線粒體膜電位;異丙腎上腺素降低hESC-CM的搏動(dòng)振幅、升高其搏動(dòng)頻率,但此作用具可逆性,對(duì)搏動(dòng)規(guī)則指數(shù)、線粒體膜電位無(wú)明顯影響;維拉帕米迅速降低hESC-CM的搏動(dòng)振幅、搏動(dòng)頻率,但此作用具可逆性,細(xì)胞的搏動(dòng)規(guī)則指數(shù)、線粒體膜電位無(wú)明顯變化。測(cè)試化合物A和其陽(yáng)性對(duì)照藥托法替尼對(duì)hESC-CM的影響類似,對(duì)搏動(dòng)振幅的抑制作用成濃度時(shí)間相關(guān)性,對(duì)搏動(dòng)頻率、搏動(dòng)頻率規(guī)則指數(shù)也有明顯的作用,對(duì)線粒體膜電位的影響不顯著。結(jié)論:利用人胚胎干細(xì)胞分化的心肌細(xì)胞可以建立一種可行的體外心臟毒性評(píng)價(jià)模型,結(jié)合實(shí)時(shí)細(xì)胞分析法以及高內(nèi)涵細(xì)胞成像技術(shù)可快速、靈敏、準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)藥物的心臟毒性。
[Abstract]:Aim: to establish a cardiomyocyte model (hESC-CM) suitable for evaluating the cardiotoxicity of human embryonic stem cells and to evaluate the potential cardiac toxicity of the compounds. Methods: different kinds of cardiotoxic drugs were selected: adriamycin (0.2 mol L-1) and imatinib (0.2 渭 mol L ~ (-1), tyrosine kinase inhibitor) and isoprenaline (0.0010.010.1kan1 and 10 渭 mol L-1), calcium channel blockers), 20 渭 mol L ~ (-1), 尾 agonist (0.0010.01) and 10 渭 mol L ~ (-1), calcium channel blockers, respectively. Parmi (0.1 ~ 0.3L ~ (-1),) and 10 渭 mol / L ~ (-1), were incubated with hESC-CM, respectively. The changes of cardiomyocyte pulsation frequency, amplitude, regularity and mitochondrial membrane potential before and after administration were monitored by real-time cell analysis and high intension cell imaging. To establish a cardiotoxicity evaluation model of human embryonic stem cell differentiation in vitro. The cardiac toxicity of compound A was evaluated by this model. Results: when incubated with hESC-CM at various concentrations of doxorubicin, the pulsatile amplitude, pulsatile frequency, pulsatile regular index and mitochondrial membrane potential of hESC-CM were decreased by imatinib at 20 渭 mol L ~ (-1). The pulsatile regular index and mitochondrial membrane potential, isoproterenol decreased the pulsatile amplitude of hESC-CM and increased its pulsatile frequency, but the reversibility of this instrument had no significant effect on the pulsatile regular index and mitochondrial membrane potential. Verapamil decreased the pulsatile amplitude and frequency of hESC-CM rapidly, but the reversibility of the apparatus, the regular index of cell pulsation, and the mitochondrial membrane potential did not change significantly. The effect of Tofatinib on hESC-CM was similar to that of the positive control compound A, the inhibitory effect on the amplitude of pulsation was time-dependent, and it also had a significant effect on pulsatile frequency and regular index of pulsatile frequency. There was no significant effect on mitochondrial membrane potential. Conclusion: a feasible model for evaluating cardiac toxicity in vitro can be established by using human embryonic stem cell differentiation cardiomyocytes. The combination of real-time cell analysis and high intension cell imaging can be rapid and sensitive. Accurately evaluate the cardiac toxicity of the drug.
【作者單位】： 中國(guó)食品藥品檢定研究院國(guó)家藥物安全評(píng)價(jià)監(jiān)測(cè)中心;中國(guó)科學(xué)院生物物理研究所;康龍化成(北京)新藥技術(shù)股份有限公司;
【基金】：北京市科技計(jì)劃課題資助項(xiàng)目(Z141100000214001)
【分類號(hào)】：R96

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本文編號(hào)：2093145