發(fā)布時(shí)間：2018-02-14 11:57

  本文關(guān)鍵詞： 膽固醇-半乳糖苷 放大合成 制劑 穩(wěn)定性 配伍　出處：《廣州中醫(yī)藥大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:膽固醇-半乳糖苷是本實(shí)驗(yàn)室利用非水相酶促合成法研制的新型配體,可以與磷脂制成配體脂質(zhì)體納米粒,研究發(fā)現(xiàn),其脂質(zhì)體的肝細(xì)胞攝取率相較于普通脂質(zhì)體增加了 2-5倍。目前實(shí)驗(yàn)室已成功制成了膽固醇-半乳糖苷介導(dǎo)的藥物脂質(zhì)體。但是目前對(duì)膽固醇-半乳糖苷的合成還處于小試試驗(yàn)階段,很多參數(shù)都不完善,因此本文對(duì)膽固醇-半乳糖苷的酶促合成工藝技術(shù)進(jìn)行了放大,通過(guò)放大試驗(yàn)完善了其合成純化的工藝路線。并將放大后的膽固醇-半乳糖苷用于制備紫杉醇配體脂質(zhì)體;之后對(duì)膽固醇-半乳糖苷介導(dǎo)的紫杉醇配體脂質(zhì)體制劑進(jìn)行了穩(wěn)定性試驗(yàn)、制劑配伍試驗(yàn)以及急性毒性研究。方法:1.在對(duì)膽固醇-半乳糖苷進(jìn)行中試放大的過(guò)程中,使用逐步放大的方法,先將其放大至小試時(shí)的5倍,在5倍條件下以產(chǎn)率及純度作為評(píng)判指標(biāo),對(duì)膽固醇-半乳糖苷合成及純化過(guò)程中的處方工藝流程進(jìn)行優(yōu)化,使最終產(chǎn)物的產(chǎn)率90%,純度95%,然后使用優(yōu)化后的處方工藝將反應(yīng)放大至小試時(shí)的50倍,方法同上。2.以紫杉醇標(biāo)準(zhǔn)品作為外標(biāo),在HPLC條件下,建立紫杉醇配體脂質(zhì)體含量測(cè)定的方法學(xué)。3.以紫杉醇脂質(zhì)體的凍干粉作為研究對(duì)象,分別進(jìn)行高溫(40℃)、高濕(25℃,RH70%±5%)、強(qiáng)光(4500±5001x)穩(wěn)定性試驗(yàn),試驗(yàn)時(shí)長(zhǎng)設(shè)置為10天,于第0、5、10天取樣,測(cè)包封率、Zeta電位、粒徑、pH值、氧化指數(shù)等指標(biāo);并考察其加速(30±2℃,RH65%±5%)穩(wěn)定性,試驗(yàn)時(shí)長(zhǎng)設(shè)置為6個(gè)月,于第0、1、2、3、6個(gè)月取樣,測(cè)定粒徑、電位、包封率、pH值、氧化指數(shù)等指標(biāo)。4.以紫杉醇脂質(zhì)體的凍干粉作為研究對(duì)象,使用0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液、10%氯化鈉注射液、50%葡萄糖注射液四種輸液分別與其配伍,試驗(yàn)時(shí)長(zhǎng)設(shè)置為24h,于0、4、8、12、24h取樣測(cè)定粒徑、電位、包封率、pH值、氧化指數(shù)等指標(biāo)。5.使用單次給藥注射,以紫杉醇配體脂質(zhì)體凍干粉作為研究對(duì)象,普通紫杉醇脂質(zhì)體凍干粉作為對(duì)照,使用0.9%氯化鈉注射液溶解藥物,試驗(yàn)動(dòng)物選用SPF級(jí)小鼠,首先通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定兩種脂質(zhì)體的最大安全劑量和最小致死劑量,然后根據(jù)公示(r為兩劑量組時(shí)間的比值,n為預(yù)分組數(shù),a最小致死劑量,b為最大安全劑量)確定最終實(shí)驗(yàn)分組以及每組注射劑量,注射后放置14天,觀察小鼠死亡情況并記錄,計(jì)算兩種脂質(zhì)體的LD50,并進(jìn)行比較。結(jié)果:1.在將膽固醇-半乳糖苷放大至50倍后,通過(guò)對(duì)乳糖醇和膽固醇-單乙烯酯的摩爾比、酶的種類及用量、混合溶劑的比例等因素單因素考察以及正交試驗(yàn),最終得到的產(chǎn)物產(chǎn)率約為96%,純度約為95%。2.在對(duì)HPLC法測(cè)定紫杉醇配體脂質(zhì)體內(nèi)藥物含量進(jìn)行方法學(xué)考察時(shí),結(jié)果顯示,脂質(zhì)體內(nèi)的其他物質(zhì)不影響紫杉醇的含量測(cè)定,精密度、回收率等顯示結(jié)果良好。3.穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明,脂質(zhì)體在高溫、高濕、強(qiáng)光照射條件下包封率、粒徑、電位等指標(biāo)均未產(chǎn)生顯著變化;加速穩(wěn)定性試驗(yàn)中脂質(zhì)體在3個(gè)月之內(nèi),包封率、粒徑、電位等指標(biāo)均未產(chǎn)生顯著變化,至6個(gè)月時(shí)包封率等出現(xiàn)較大下降。4.配伍穩(wěn)定性顯示,脂質(zhì)體凍干粉在于0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液、10%氯化鈉注射液、50%葡萄糖注射液四種輸液分別配伍后,在24h內(nèi)包封率、粒徑、電位等指標(biāo)均未產(chǎn)生顯著變化。5.急性毒性預(yù)試驗(yàn)中,得到了兩種脂質(zhì)體對(duì)小鼠的近似100%死亡的最小致死量和0%死亡的最大耐受量,普通脂質(zhì)體的為30mg/ml和20mg/ml,紫杉醇配體脂質(zhì)體的為80mg/ml和40mg/ml,正式試驗(yàn)階段,通過(guò)觀察和記錄小鼠的死亡情況,最終計(jì)算得兩種脂質(zhì)體的LD50,普通紫杉醇脂質(zhì)體LD5為23.454mg/ml,其95%可信度區(qū)間范圍在22.109-24.788mg/ml;紫杉醇配體脂質(zhì)體的LD50為63.455 mg/ml,其 95%可信度區(qū)間范圍在 57.544-71.872mg/ml。結(jié)論:1.膽固醇-半乳糖苷在放大到50倍后產(chǎn)率高,純度好,穩(wěn)定性優(yōu)良,可以用于批量試制。2.用于測(cè)定紫杉醇配體脂質(zhì)體的藥物含量的HPLC法,準(zhǔn)確性高,專屬性強(qiáng),靈敏度好,可以在接下來(lái)的試驗(yàn)中用于檢測(cè)紫杉醇配體脂質(zhì)體中紫杉醇藥物的含量。3.穩(wěn)定性試驗(yàn)表明,在各種極端條件下,短時(shí)間內(nèi)脂質(zhì)體都可以保持良好的穩(wěn)定性,但是正常情況下不宜貯存超過(guò)3個(gè)月,而且作為注射劑時(shí),可以很好地與多種輸液配伍,是臨床上理想的新型制劑。4.配伍穩(wěn)定性表明,紫杉醇配體脂質(zhì)體作為注射劑時(shí),可以很好地與多種輸液配伍,是臨床上理想的新型制劑。5.急性毒性試驗(yàn)表明,相比于普通脂質(zhì)體,膽固醇-半乳糖苷介導(dǎo)的紫杉醇配體脂質(zhì)體具有更好的安全性和更大的安全劑量范圍,這種特性可能與其肝靶向相性有關(guān)。
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【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R943;R965
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本文編號(hào)：1510652