本文關鍵詞：重組人IFNα-2b融合表達及純化工藝研究　出處：《黑龍江畜牧獸醫(yī)》2016年23期 　論文類型：期刊論文

  更多相關文章： IFNα-b 表達 純化 P-TrxA-SUMO載體 層析

【摘要】：為了利用多分子伴侶表達載體在大腸埃希氏菌中融合表達人干擾素(IFNα)-2b,并進行IFNα-2b純化工藝研究,試驗采用人工設計并合成Smt3-IFNα-2b克隆至自行構建的P32-TrxA載體中,將重組表達質粒P32-TrxA-Smt3-IFNα-2b轉化至大腸埃希氏菌(E.coil)BL21(DE3),經IPTG誘導表達、SDS-PAGE分析,在此基礎上利用金屬螯合層析、SUMO蛋白酶酶切、陰離子交換層析以及凝膠層析建立了IFNα-2b的純化工藝。結果表明:重組質粒經酶切鑒定及測序證明構建正確;融合蛋白分子質量約為40 ku,主要以可溶形式表達,表達量占菌體總蛋白的30%以上;純化的IFNα-2b分子質量約為17 ku,蛋白純度達到95%以上,利用細胞病變抑制法測得干擾素的效價為1.0×10~8IU/mg。說明成功在大腸埃希氏菌中表達并經過簡易工藝純化了重組蛋白IFNα-2b。
[Abstract]:In order to use the expression of molecular chaperones vector in Escherichia coli fusion expression of human interferon alpha (IFN alpha) -2b, and purification of IFN alpha -2b test with artificial design and synthesis of Smt3-IFN alpha -2b was cloned into P32-TrxA vector to construct the recombinant expression plasmid P32-TrxA-Smt3-IFN, alpha -2b was transformed into Escherichia coli (E.coil) BL21 (DE3), the expression of SDS-PAGE induced by IPTG analysis, on the basis of the use of metal chelating chromatography, SUMO protease digestion, anion exchange chromatography and gel chromatography to establish the purification process of IFN alpha -2b. The results showed that the recombinant plasmid was verified by enzyme digestion and sequencing showed that the fusion protein was constructed correctly; molecular mass of about 40 Ku, mainly expressed in soluble form, the expression of the total protein of the bacteria accounted for more than 30%; the IFN alpha -2b molecular weight of the purified protein was about 17 Ku, the purity reached more than 95%, using cytopathic inhibition test The potency of interferon was 1 * 10~8IU/mg. indicating that the recombinant protein IFN alpha -2b. was successfully expressed in Escherichia coli and purified by a simple process.

【作者單位】： 吉林農業(yè)大學生命科學學院;軍事醫(yī)學科學院軍事獸醫(yī)研究所;
【分類號】：R94;TQ920.1
【正文快照】： 人干擾素(IFN)α-2b是由白細胞產生的Ⅰ型干擾素[1],是一種抗腫瘤、抗病毒并且可以調節(jié)機體免疫功能的廣譜類藥物,其作用是在免疫系統(tǒng)發(fā)揮作用前使細胞形成抗病毒狀態(tài),并具有抑制病毒增殖、防止病毒擴增、使病毒失活的作用,同時通過誘導機體細胞產生多種細胞因子發(fā)揮協(xié)同抗病

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本文編號：1358853