本文關(guān)鍵詞：基于一測多評的中藥多成分定量研究進(jìn)展，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

中草藥 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第43卷 第12期 2012年12月

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基于一測多評的中藥多成分定量研究進(jìn)展

陸兔林1，石上梅2，蔡寶昌1，劉會珍1，池玉梅1，周 淵1

1. 南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇 南京 210046 2. 國家藥典委員會，北京 100061

摘 要：中藥成分的復(fù)雜多樣決定了中藥質(zhì)量控制模式必須采用多成分定量和多指標(biāo)質(zhì)量控制，但中藥化學(xué)對照品性質(zhì)不穩(wěn)定、貨源嚴(yán)重緊缺和檢測成本昂貴等，嚴(yán)重阻礙了這一模式的發(fā)展，成為中藥現(xiàn)代化的瓶頸問題之一�！耙粶y多評”分析方法通過測定一個對照品易得的成分實現(xiàn)中藥多成分定量，是適合中藥特點的多指標(biāo)質(zhì)量控制和評價模式。系統(tǒng)闡述了“一測多評”法的基本原理及其在中藥多成分定量中的研究進(jìn)展，總結(jié)了“一測多評”法在中藥材、中藥飲片及中藥復(fù)方制劑中的應(yīng)用，探討其優(yōu)勢及其在實際應(yīng)用中存在的關(guān)鍵問題。提出“一測多評”法的研究思路在20多種中藥材、中藥飲片及中藥復(fù)方制劑中得到了驗證，有望成為中藥質(zhì)量控制的未來發(fā)展趨勢。 關(guān)鍵詞：一測多評；中藥；質(zhì)量控制；質(zhì)量評價；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

中圖分類號：R286.02 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：0253 - 2670(2012)12 - 2525 - 05

Advances in studies on multi-component determination of Chinese materia medica by QAMS

LU Tu-lin1, SHI Shang-mei2, CAI Bao-chang1, LIU Hui-zhen1, CHI Yu-mei1, ZHOU Yuan1

1. Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210046, China 2. Chinese Pharmacopoeia Commission, Beijing 100061, China

Key words: quantitative analysis of multi-components by single-marker (QAMS); Chinese materia medica (CMM); quality control; quality evaluation; quality standard

中藥是中華民族的瑰寶，中藥的質(zhì)量是否符合標(biāo)準(zhǔn)，直接影響到中醫(yī)臨床辨證施治的效果。提高中藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，是保證廣大患者用藥安全有效的前提。中藥成分的多樣性、復(fù)雜性和作用機制的模糊性，使其質(zhì)量控制仍然存在許多問題，一定程度上阻礙了中藥現(xiàn)代化、國際化的進(jìn)程，是中藥現(xiàn)代化的瓶頸之一。中藥的整體作用及多成分、多靶點的特點，決定了任何一個單一成分作為指標(biāo)都不能準(zhǔn)確反映中藥材、中藥飲片和中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量。建立中藥的質(zhì)量保證體系應(yīng)立足于中藥的特色，建立多成分、多指標(biāo)的質(zhì)量控制模式，對中藥及其制劑的整體藥效進(jìn)行控制，以《中國藥典》2010年版為代表的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)確立了“從單指標(biāo)向多指標(biāo)、從指標(biāo)性成分向藥效成分控制”的發(fā)展方向。針對目前中藥多成分定量和多指標(biāo)質(zhì)量控制中存在的對

收稿日期：2012-08-21

基金項目：國家科技部創(chuàng)新藥物“中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)平臺建設(shè)研究”項目（2009ZX09308）；國家科技部行業(yè)專項“全國中藥炮制技術(shù)規(guī)范研究”

（201207004）

作者簡介：陸兔林，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向為中藥質(zhì)量控制及炮制研究。Tel: 13951636763 E-mail: lutuling2005@126.com

照品缺乏的問題，提出了根據(jù)中藥有效成分內(nèi)在的函數(shù)關(guān)系和比例關(guān)系，只測定一個成分（對照品易得、價廉、有效者）實現(xiàn)多個成分（對照品難以得到或難供應(yīng)者）同步測定的一測多評（quantitative analysis of multi-components by single-marker，QAMS）該方法提出后得到了業(yè)內(nèi)學(xué)者們廣的分析方法[1-2]。

泛的認(rèn)可，許多研究者進(jìn)行了深入的研究，并在部分中藥材、中藥飲片及中藥復(fù)方制劑中得到了應(yīng)用。本文就一測多評法的原理及其研究進(jìn)展進(jìn)行概述，并就其存在的問題和發(fā)展前景進(jìn)行討論。 1 一測多評概述 1.1 一測多評的基本原理

在一定的線性范圍內(nèi)成分的量（質(zhì)量或濃度）與檢測器響應(yīng)成正比。在多指標(biāo)質(zhì)量評價時，以藥材中某一典型成分（對照品易得、價廉、有效者）

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為內(nèi)參物，根據(jù)中藥有效成分間存在的內(nèi)在函數(shù)關(guān)系和比例關(guān)系，建立該組分與其他組分之間的相對校正因子（relative correction factor），無需提供鑒別和定位用的對照品，通過校正因子計算其他組分的量。這種測定一個成分，實現(xiàn)對多個成分定量的方法命名為“一測多評”法。

假設(shè)某樣品中含有i個組分，fi＝W2，…，k，…，m），式中Ai為組分峰面積，

i/Ai（i＝1，

Wi為組分濃度。選取其中一組分k為內(nèi)參物，建立組分k與其他組分m之間的相對校正因子fkm＝fk/fm＝Wk/Wm×(Am/Ak)；由此可導(dǎo)出定量計算公式：Wm＝Wk×Am / (fkm×Ak)；式中Ak為內(nèi)參物峰面積，Wk為內(nèi)參物濃度，Am為其他組分m峰面積；Wm為其他組分m濃度[1]。

一測多評法原理與校正因子法原理基本一致，在方法學(xué)建立時，選定內(nèi)參物，求出內(nèi)參物與各待測成分間的相對校正因子，并把其作為一個常數(shù)用于定量測定中。在定量時，內(nèi)參物的濃度按常規(guī)方法（外標(biāo)一點法、二點法）進(jìn)行測定，根據(jù)保留時間差和/或相對保留時間值（分別考察相對保留值或保留時間差2種參數(shù)在不同品牌儀器和不同規(guī)格色譜柱中的重現(xiàn)性，選取RSD值較小的一種參數(shù)作為峰定位依據(jù)），結(jié)合化合物的紫外吸收特征、液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)給出的質(zhì)譜信息等確定目標(biāo)峰的峰位，相對校正因子結(jié)合內(nèi)參物實測濃度，計算待測成分的濃度。對于成分復(fù)雜的樣品，通過相對保留值或保留時間差等參數(shù)不能準(zhǔn)確定位時，可選用定性用的對照品或含有各待測組分的“中藥對照提取物”對待測組分色譜峰進(jìn)行定位。 1.2 一測多評的特點及優(yōu)勢

1.2.1 實現(xiàn)了中藥多成分定量，更加符合傳統(tǒng)中醫(yī)理論的整體觀 中藥及其制劑化學(xué)成分與有效成分的多樣性、復(fù)雜性以及相互間的協(xié)同作用，決定了單一成分和指標(biāo)難以準(zhǔn)確、全面地表達(dá)中藥的內(nèi)在質(zhì)量，傳統(tǒng)中醫(yī)的整體觀要求對中藥進(jìn)行多藥效成分的綜合評價，而多指標(biāo)的質(zhì)量評價模式又要求有足夠高質(zhì)量分?jǐn)?shù)的化學(xué)對照品作為保障，由于某些化學(xué)對照品分離難度大或單體不穩(wěn)定難以供應(yīng)、供應(yīng)價格高等造成了中藥多指標(biāo)質(zhì)量控制對照品匱乏的問題，限制了用常規(guī)的外標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法來實現(xiàn)對多成分的定量和多指標(biāo)的質(zhì)量控制。一測多評法利用有效成分間內(nèi)在的函數(shù)關(guān)系和比例關(guān)系，只測定一個成分，實現(xiàn)對多個成分的同步測控，很好地解

決了對照品缺乏的問題，實現(xiàn)了中藥多指標(biāo)質(zhì)量評價，符合傳統(tǒng)中醫(yī)理論的整體觀。

1.2.2 解決了中藥化學(xué)對照品匱乏的瓶頸問題 中藥多指標(biāo)質(zhì)量控制和評價模式需要有多種對照品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，但現(xiàn)有部分中藥化學(xué)對照品分離難度大、單體不穩(wěn)定、難以供應(yīng)或供應(yīng)價格高等，使其在品種和數(shù)量上不能滿足中藥質(zhì)量監(jiān)控和新藥研發(fā)等方面的需求，而只能采用逐個檢測單一有效成分來控制中藥及其制劑的質(zhì)量的方法，給藥品檢測帶來諸多不便，降低了檢測效率。一測多評法通過測定一個對照品易得成分（內(nèi)參物）的量，計算出其他藥效成分對應(yīng)于這一內(nèi)參物的相對校正因子，實現(xiàn)多個成分的同步測控，尤其是對照品匱乏成分的測定。該方法可實現(xiàn)在對照品短缺的情況下，進(jìn)行多指標(biāo)成分的測定，經(jīng)實踐驗證，具有技術(shù)適應(yīng)性和可行性。

1.2.3 彌補了中藥指紋圖譜技術(shù)模糊性的缺陷 在中藥多指標(biāo)質(zhì)量評價過程中，多采用指紋圖譜技術(shù)來體現(xiàn)中藥的整體性，目前色譜指紋圖譜分析方法已被國際公認(rèn)為可用于植物藥等復(fù)雜化學(xué)組成體系質(zhì)量控制的有效手段，許多外國植物藥生產(chǎn)廠家已將其用于藥品質(zhì)量控制中，但其模糊性的特點使其難以在實際生產(chǎn)中應(yīng)用，并造成了“難以說清楚”的局面。而一測多評的研究思路側(cè)重從量上闡明主要成分或藥效成分間的相互關(guān)系，是對指紋圖譜數(shù)據(jù)進(jìn)一步定量挖掘分析，在指紋圖譜整體控制基礎(chǔ)上，進(jìn)一步明確個別成分的量，為中藥多指標(biāo)質(zhì)量評價提供了新的研究思路。

1.2.4 方便、快捷、廉價 一測多評法借鑒經(jīng)典的內(nèi)標(biāo)法、校正因子法、主成分自身對照法和紫外百分吸收系數(shù)法的優(yōu)勢，在缺少對照品的情況下，利用成分間的相對校正因子實現(xiàn)多成分的測定，對中藥的質(zhì)量進(jìn)行控制，該方法方便、快速、廉價，大幅度降低了檢測成本和時間，提高了工作效率和方法的實用性，能夠更有效、更全面、更準(zhǔn)確地控制中藥質(zhì)量，將是中藥多組分同步定量的發(fā)展方向。2 一測多評法的應(yīng)用

2.1 一測多評在單味中藥中的應(yīng)用

一測多評法提出之后，已經(jīng)在丹參、黃連、金銀花、赤芍、人參和三七等20多種藥材的多成分定量和多指標(biāo)質(zhì)量控制中得到了探索和應(yīng)用（表1）。楊菲等[7]以丹參為研究對象，建立了丹參中多種酚酸類成分的一測多評分析方法，以丹參素鈉為

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表1 已開展一測多評研究的單味中藥及制劑 Table 1 Study on single CMM and preparation by QAMS

單味藥及成方制劑 淫羊藿 黃芩 黃芪 金銀花

化合物類型 黃酮類 黃酮類 異黃酮 有機酸

測定成分

淫羊藿苷，朝藿定A、B、C

內(nèi)參物 淫羊藿苷

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文獻(xiàn)3 4 5 6

黃芩苷、迷迭香酸、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素 黃芩苷 芒柄花素、毛蕊異黃酮苷、芒柄花苷、毛蕊異黃酮 芒柄花素 綠原酸、咖啡酸、新綠原酸、3, 4-二咖啡酸�？峋G原酸、咖啡酸 酸、3, 5-二咖啡酸�？崴�、4, 5-二咖啡酸�？崴�

丹參 關(guān)黃柏 黃連 吳茱萸 赤芍 杜仲 柴胡 人參、三七

酚酸類 生物堿 生物堿 生物堿 倍半萜、酚酸類 酚酸、苷類 皂苷 皂苷

丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B 丹參素鈉 小檗堿、巴馬汀、藥根堿 根堿

吳茱萸次堿、吳茱萸內(nèi)酯、吳茱萸堿 五沒食子�；咸烟� 沒食子酸甲酯、

綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷、京尼平苷 柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d

皂苷Rf、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rb3、人參皂苷Rd

綠原酸 柴胡皂苷a 吳茱萸次堿 小檗堿

小檗堿、巴馬汀、藥根堿、黃連堿、表小檗堿、藥小檗堿

7 8 9 10 11 12 13 14

芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、苯甲酰芍藥苷、沒食子酸、芍藥苷

人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參人參皂苷Rb1 人參皂苷Rb1、

連翹 黃酮、木脂素、苯乙醇苷 蘆丁、連翹酯苷A、連翹苷、連翹酯素

β-欖香烯

蘆丁 15 16

莪術(shù)油及其注射液 倍半萜類 預(yù)知子

三萜皂苷

牻牛兒酮、莪術(shù)二酮、莪術(shù)醇、莪術(shù)烯、呋喃二烯、牻牛兒酮

常春藤皂苷元3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→ 常春藤皂苷元3- 17 3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷、常春藤皂苷元3-O-β-D-吡喃木糖基- (1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷、常春藤皂苷元3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷

O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)- α-L-吡喃阿拉伯糖苷

內(nèi)參物，建立原兒茶醛、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B與丹參素鈉的相對校正因子，并進(jìn)行了方法學(xué)考察，結(jié)果表明一測多評法的計算結(jié)果與外標(biāo)法的實測值之間沒有顯著性差異，實驗所得校正因子可信�？锲G輝等[9]以黃連藥材為研究對象，以藥材中5個典型生物堿成分為指標(biāo)，建立小檗堿與巴馬汀、黃連堿、表小檗堿、藥根堿的相對校正因子，并利用該校正因子計算其他成分的量（計算值），實現(xiàn)一測多評。同時采用外標(biāo)法測定藥材中該5種生物堿的量（實測值），并進(jìn)行方法學(xué)考察，比較發(fā)現(xiàn)計算值與實測值無顯著性差異，說明該方法可行、準(zhǔn)確。李文龍等[6]為解決金銀花藥材分析中部分對照品價格高、不易獲得的問題，建立了一測多評的分析方

法，通過測定綠原酸、咖啡酸與其他有機酸的相對校正因子，計算出其他幾種有機酸的量。該方法在不同實驗室、不同型號的高效液相色譜儀以及不同色譜柱上進(jìn)行驗證，重復(fù)性滿意；與外標(biāo)法相比，所得結(jié)果均無顯著性差異。王瑞等[11]建立了赤芍中2種不同類型共6個化學(xué)成分的一測多評定量方法，以芍藥苷為內(nèi)參物，建立其與芍藥內(nèi)酯苷、苯甲酰芍藥苷、沒食子酸、沒食子酸甲酯和五沒食子�；咸烟堑南鄬πＵ蜃印Ｍ瑫r采用外標(biāo)法測定16批赤芍中6個成分的量，結(jié)果建立的相對校正因子重現(xiàn)性良好，計算值與外標(biāo)法實測值之間無顯著差異。 2.2 一測多評在中藥復(fù)方制劑中的應(yīng)用

近年來也有文獻(xiàn)報道將一測多評法應(yīng)用于中藥

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復(fù)方制劑的多成分測定和多指標(biāo)質(zhì)量控制和評價中。鄒桂欣等[18]首次將一測多評法應(yīng)用于中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制中，以葛根素為指標(biāo)，建立冠脈康膠囊中該成分與大豆苷元及丹酚酸B的相對校正因子，并用相對校正因子計算大豆苷元及丹酚酸B的量，同時對一測多評的計算值與外標(biāo)法實測值進(jìn)行比較，并對不同品牌填料及不同長度的色譜柱進(jìn)行考察，結(jié)果表明利用一測多評法在不同色譜柱的計算值與外標(biāo)實測值之間無顯著性差異，符合中藥的多指標(biāo)質(zhì)量評價模式的要求。林永強等[19]以綠原酸為指標(biāo)，建立了銀黃片中6種咖啡先奎寧酸的一測多評定量測定方法，同時對13批銀黃片一測多評的計算結(jié)果與外標(biāo)法實測值進(jìn)行比較，并對不同品牌儀器和不同廠家色譜柱進(jìn)行考察，結(jié)果表明，利用一測多評法在不同色譜柱的計算值與外標(biāo)實測值之間沒有顯著性差異。

3 一測多評在實際應(yīng)用中存在的問題 3.1 相對校正因子的耐用性

在一測多評法建立的過程中，所有能引起檢測器響應(yīng)值變化的因素均有可能引起相對校正因子的波動。不同實驗室、不同型號的高效液相色譜儀、不同色譜柱以及流動相的組成比例、pH值、柱溫、流速、檢測波長等微小改變均會引起相對校正因子的改變，在實測值與計算值之間引入誤差。因此，在一測多評研究階段，應(yīng)充分考察不同因素對相對校正因子值的影響，對影響較大的因素進(jìn)行限定，以保證其具有良好的重現(xiàn)性。

3.1.1 不同實驗室之間相對校正因子的耐用性 一測多評法建立之后，各成分與內(nèi)參物之間的相對校正因子作為常數(shù)，應(yīng)用于多成分測定中。但是不同實驗室、不同操作人員即使在同一色譜系統(tǒng)和檢測條件下，所測得的相對校正因子值也會有微小差異，故方法學(xué)建立時需考察不同實驗室、不同操作人員所引入的誤差是否在允許的范圍內(nèi)。

3.1.2 不同的色譜儀器系統(tǒng)之間相對校正因子的耐用性 計算值與實測值之間的誤差除了檢測過程中的人為誤差和系統(tǒng)誤差外，還應(yīng)考慮分析儀器硬件所引起的誤差。一測多評法建立時多使用不同的色譜儀器系統(tǒng)檢測，計算平均相對校正因子值，目前主要有Waters和Agilent公司生產(chǎn)的不同型號的高效液相色譜儀，少量有奧泰公司生產(chǎn)的色譜儀等。一測多評研究中，多使用紫外檢測器和二極管陣列檢測器，少數(shù)使用紫外-可見光檢測器、紫外-電噴

霧檢測器檢測器和通用型質(zhì)譜檢測器。對于紫外檢測器，根據(jù)待測成分的結(jié)構(gòu)特性選擇合適的檢測波長非常重要。為了兼顧多個成分的強吸收，并不能選擇各成分的最大吸收波長，因此測定誤差增大，且不同類型成分間的誤差比同類成分間的誤差大，不同儀器上表現(xiàn)也更明顯。

3.1.3 不同的色譜檢測條件之間相對校正因子的耐用性 色譜檢測條件包括不同的檢測器類型、固定相種類、流動相組成，是分析誤差來源需要考慮的主要

因素。色譜柱主要是來自不同生產(chǎn)廠家的C18鍵合硅膠柱，不同色譜柱固定相粒度不同，色譜柱的長短、內(nèi)徑不一，勢必會造成相對校正因子值的波動。流動相的組成、比例會影響色譜峰的分離度和峰參數(shù)，從而引起誤差，但可以通過改善色譜系統(tǒng)，優(yōu)化色譜條件將此偏差降至最低。另外，柱溫、體積流量的改變也會引起相對校正因子的微小波動。 3.2 目標(biāo)峰的定位

一測多評在實際應(yīng)用于定量測定時，由于只有內(nèi)參物用到了對照品，其他待測成分無對照品，無法準(zhǔn)確確定待測組分峰（即目標(biāo)峰）的位置，因此，如何對這些成分的色譜峰進(jìn)行定位是一測多評法需解決的關(guān)鍵問題之一。文獻(xiàn)研究中對目標(biāo)峰的定位方法主要有2種：一是采用待測組分與內(nèi)參物的保留時間差值定位；二是根據(jù)待測組分與內(nèi)參物的相對保留時間比值定位，并結(jié)合色譜峰的形狀、化合物的紫外吸收特征、液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)給出的質(zhì)譜信息等輔助確認(rèn)。也有對這兩種方法進(jìn)行考察，根據(jù)考察結(jié)果確定最合適的目標(biāo)峰定位方法，如果仍不能準(zhǔn)確定位可以使用含有上述待測成分中藥對照提取物進(jìn)行定位。 4 前景與展望

目前中藥化學(xué)對照品的種類和數(shù)量還不能滿足質(zhì)量檢測和新藥研發(fā)的需求，中藥及其制劑的質(zhì)量通常采用逐個檢測有效成分的方法來控制，檢測效率低。一測多評法實現(xiàn)了在對照品缺乏的情況下，進(jìn)行中藥多成分定量和多指標(biāo)質(zhì)量控制，顯著降低了檢測成本，提高了工作效率。另外，有文獻(xiàn)報道用“替代對照品”法對中藥有效成分進(jìn)行測定，其原理與一測多評法基本一致，用一種易得、價廉的對照品來代替制備困難、難以供應(yīng)、價格昂貴或者性質(zhì)不穩(wěn)定的對照品，這一方法和思路也在一定程度上解決了中藥對照品缺失的問題。

雖然一測多評法在中藥質(zhì)量控制中的應(yīng)用才剛

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剛開始，仍然存在許多不足之處，需要進(jìn)一步改善，但其利用成分間的相對校正因子同時定量中藥多個藥效成分的方法，具有快速、廉價的優(yōu)勢，適合中藥藥效成分復(fù)雜多樣的特點，有利于中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定，會越來越廣泛地應(yīng)用于中藥科研和生產(chǎn)實踐中，成為中藥質(zhì)量控制和評價模式新的發(fā)展趨勢，對于中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機制的闡明、中藥新藥研究和開發(fā)具有重要意義。

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