本文關鍵詞：芬太尼對海馬學習記憶相關信號通路影響及臨床應用實驗

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【摘要】：學習記憶過程是機體復雜的生理活動之一,大腦通過多種作用機制對其進行的調節(jié),在這些機制中,相應蛋白和信號通路起到重要作用。而麻醉鎮(zhèn)靜劑在某種程度上會引起機體記憶的喪失,甚至引發(fā)記憶障礙類疾病。芬太尼作為一種人工合成的麻醉性鎮(zhèn)痛藥,屬于μ阿片受體激動劑,因為其強效與速效,在臨床中被普遍使用。迄今為止,鎮(zhèn)靜劑量的鎮(zhèn)痛性麻醉藥對學習記憶相關信號轉導通路影響有何不同仍未有明確報道。本實驗擬研究芬太尼在鎮(zhèn)靜劑量時短時對記憶的影響,明確他的作用機理有助于為今后正確應用該藥提供依據(jù)。本實驗以Wistar雄鼠為實驗對象,將20只大鼠隨機選取5只作為生理鹽水(SL)對照組,其余為實驗組。先進行大鼠水迷宮定位航行實驗,歷時五天,前四天每天訓練4次,上下午各兩次,每次訓練90s。第五天,腹腔注射等劑量生理鹽水和鎮(zhèn)靜劑量芬太尼20μg/kg(0.4mL/kg),分別于給藥后10min、6h、24h操作上述過程,并記錄大鼠尋找并且爬上平臺的路線圖及所需時間(潛伏期)。但由于注射藥物后10min大鼠處于鎮(zhèn)靜狀態(tài),無法進行測試,故而注射藥物10min后直接取海馬備用,6h和24h進行上述操作,并記錄數(shù)據(jù)。每次時間點水迷宮實驗后立即取腦中海馬于-80℃?zhèn)溆?通過Western Blot檢測海馬內ARC、CREB、p-CREB、ERK和p-ERK蛋白表達變化,通過RT-PCR檢測海馬內ARC、CREB、ERK mRNA的變化,來推測藥物對ERK信號通路的影響。給藥10min后,Arc蛋白表達與對照組無顯著差異,CREB、p-CREB、ERK和p-ERK蛋白表達均有所升高;給藥6h后,蛋白表達均較10min組有明顯下降,且略低于對照組,但其中磷酸化ERK變化量小,且略高于對照組;給藥24h后,蛋白表達水平除Arc外均與生理鹽水(SL)對照組顯著降低。同時,通過Real Time PCR的結果顯示,CREB、ERK的mRNA在每個時段的變化趨勢,與Western Blot中蛋白表達量基本相符,從而印證了實驗結果。水迷宮實驗證明大鼠單次注射注鎮(zhèn)靜劑量(20μg/kg)的芬太尼可從行為學角度體現(xiàn)對學習記憶的影響。Real-time PCR和Western blot檢測相關蛋白水平,得出大鼠單次注射注鎮(zhèn)靜劑量的芬太尼,記憶相關基因表達降低,影響學習記憶。
【關鍵詞】：芬太尼 學習記憶 水迷宮 Wistar大鼠 ERK/CREB通路
【學位授予單位】：東北農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R965
【目錄】：

• 摘要8-9
• 英文摘要9-11
• 1 引言11-17
• 1.1 海馬與學習記憶相關通路11-13
• 1.1.1 海馬概述11
• 1.1.2 學習記憶相關通路概述11-12
• 1.1.3 ERK功能12
• 1.1.4 CREB功能與學習記憶12-13
• 1.1.5 Arc功能與學習記憶13
• 1.2 阿片類藥物13
• 1.3 芬太尼13-15
• 1.3.1 芬太尼概述13-14
• 1.3.2 芬太尼物化性質14
• 1.3.3 芬太尼的臨床應用14-15
• 1.3.4 芬太尼中樞作用機制15
• 1.4 行為學檢測常用方法15-16
• 1.5 試驗目的意義16-17
• 2 材料與方法17-26
• 2.1 實驗材料17-19
• 2.1.1 實驗動物17
• 2.1.2 實驗器械17-18
• 2.1.3 實驗藥品與試劑18-19
• 2.2 實驗方法19-24
• 2.2.1 大鼠水迷宮試驗19
• 2.2.2 大鼠海馬的提取19-20
• 2.2.3 RT-PCR檢測20-23
• 2.2.4 Western Blot檢測23-24
• 2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析方法24-26
• 3 結果26-35
• 3.1 大鼠水迷宮檢測結果26-27
• 3.2 Real-time PCR大鼠海馬內學習記憶相關信號轉導因子mRNA的表達水平27-30
• 3.2.1 大鼠海馬內ARC mRNA的表達水平27-28
• 3.2.2 大鼠海馬內ERK mRNA的表達水平28-29
• 3.2.3 大鼠海馬內CREB mRNA的表達水平29-30
• 3.3 Western blot大鼠海馬學內習內記憶相關信號轉導因子的蛋白表達水平30-35
• 3.3.1 大鼠海馬內ARC的表達水平30-31
• 3.3.2 大鼠海馬內ERK的表達水平31
• 3.3.3 大鼠海馬內CREB的表達水平31-32
• 3.3.4 大鼠海馬內P-ERK的表達水平32-33
• 3.3.5 大鼠海馬內P-CREB的表達水平33-35
• 4 討論35-38
• 4.1 海馬參與空間學習記憶35-36
• 4.2 芬太尼對大鼠海馬學習記憶相關信號轉導因子ARC表達水平的影響36-37
• 4.3 芬太尼對大鼠海馬學習記憶相關信號轉導通路ERK/CREB的影響37-38
• 5 結論38-39
• 致謝39-40
• 參考文獻40-43
• 附錄43-44
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文44

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本文編號：1072487