【摘要】： 腸功能障礙可使整個(gè)機(jī)體處于較為嚴(yán)重的營(yíng)養(yǎng)不良狀態(tài)。而在目前的治療方案中,腸外營(yíng)養(yǎng)支持可改善患者的營(yíng)養(yǎng)狀況,維護(hù)腸屏障功能,但長(zhǎng)期腸外營(yíng)養(yǎng)可出現(xiàn)肝功能損害和骨質(zhì)疏松癥等并發(fā)癥。腸移植可從根本上治愈腸功能障礙,但其的較高的總體的失敗率和高費(fèi)用又限制了其在臨床中的廣泛開展。 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells BMSCs)是來(lái)源于中胚層的多能祖細(xì)胞,具有自我更新和向中胚層其它細(xì)胞分化的能力。在機(jī)體組織受損傷時(shí),經(jīng)骨髓動(dòng)員到達(dá)損傷部位,可在局部微環(huán)境誘導(dǎo)下分化為特異的組織細(xì)胞,參與自身修復(fù)。加之骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞具有的低免疫原性、取材方便,易培養(yǎng),增殖快的特點(diǎn),已使之成為組織工程中理想的種子細(xì)胞。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞作為細(xì)胞治療和基因治療的種子細(xì)胞,已經(jīng)廣泛應(yīng)用于心血管、神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸和創(chuàng)傷等方面的基礎(chǔ)研究,部分成果已用于臨床。而在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療腸道方面,國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究較少,本課題將骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療應(yīng)用于腸功能障礙的大鼠模型,并觀察其在腸道內(nèi)的定植和療效。 研究目的 1、完成雄性大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離、培養(yǎng)、鑒定、染色工作。 2、制備腹部開放傷合并海水浸泡的大鼠模型,并完善相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè),證實(shí)其存在腸功能障礙,為后續(xù)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞回輸治療和檢測(cè)奠定基礎(chǔ)。 3、采用熒光標(biāo)記和基因標(biāo)記雙示蹤的方法來(lái)觀察回輸?shù)男坌源笫蟮墓撬栝g充質(zhì)干細(xì)胞在雌性大鼠致傷腸道內(nèi)的定植,并檢測(cè)空腸組織中的丙二醛(malondialdehydeMDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase SOD)含量。 研究方法 1、分離、培養(yǎng)、鑒定、染色雄性大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。 2、制備腹部開放傷合并海水浸泡致腸功能障礙的雌性大鼠模型,檢測(cè)不同時(shí)間段空腸組織中的MDA和SOD的含量,制作HE染色病理切片。 3、致傷模型建立后即通過(guò)鼠尾靜脈將以CM-DiI染色標(biāo)記的雄性大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞輸入治療組的雌性大鼠體內(nèi),對(duì)照組僅輸入生理鹽水。 4、治療結(jié)束后分別于3天、7天、14天、28天、56天分批取空腸組織,制備冰凍切片在熒光顯微鏡觀察供體細(xì)胞在腸道的定植,組織勻漿后行RT-PCR檢測(cè)雄性大鼠的性別決定基因(sex determination region Y gene SRY)和MDA和SOD含量。 結(jié)果 1、與正常對(duì)照組比較,腹部開放傷合并海水浸泡結(jié)束后1小時(shí)至第3天的腸組織中MDA含量呈進(jìn)行性上升,而SOD含量則出現(xiàn)進(jìn)行性下降,隨后二者與對(duì)照組的差異呈逐漸減小的趨勢(shì),14天后與對(duì)照組比較已無(wú)明顯差異。 2、雌性大鼠腸組織中SRY的RT-PCR檢測(cè)結(jié)果為：3天陽(yáng)性率為50%,7天陽(yáng)性率66.6%,14天陽(yáng)性率33.3%,28天和56天陽(yáng)性率為16.6%。 3、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療組第3天和第7天的空腸組織中的MDA、SOD含量較之對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論 1、腹部開放傷合并海水浸泡可導(dǎo)致大鼠腸功能障礙。MDA和SOD是反映腸組織氧自由基損傷和抗氧化修復(fù)能力較好的指標(biāo). 2、移植的雄性大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可在雌性大鼠致傷腸組織內(nèi)定植,但隨著時(shí)間延長(zhǎng),存活細(xì)胞數(shù)量逐漸下降。 3、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療可加速腸道損傷的恢復(fù),其發(fā)揮療效主要是通旁分泌的形式促進(jìn)機(jī)體內(nèi)源性修復(fù),而不是直接分化受損組織細(xì)胞。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R574;R457.7
【圖文】：

CM一DII染色后BMSCS(懸浮)義40

CM一Dll染色J而BMSCS(夕!，I}壁)K4OO

1、腸粘膜病理組織學(xué)改變:海水浸泡后腸粘膜損傷明顯，HE染色觀察到粘膜厚度和絨毛高度較之正常對(duì)照組均有顯著減少，可見較多的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，絨毛內(nèi)淋巴管和毛細(xì)血管擴(kuò)張。(圖1、2)圖1、正常對(duì)照組腸絨毛HEX40可見少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，未見小血管擴(kuò)張。圖2、BZ組模型建立3d后 HEX40腸絨毛水腫，上皮細(xì)胞萎縮，淋巴管和毛細(xì)血.管擴(kuò)張，紅細(xì)胞聚集。2、C組大鼠空腸組織中MDA和SOD檢測(cè)結(jié)果(表l)表l、MDA和SOD含量t匕較萬(wàn)士，實(shí)驗(yàn)組檢測(cè)項(xiàng)目對(duì)照組 llhh33hh1122hh2244hh33dd77dd1144dd MDA(nmol/mgPro) SOD(U/mgPro) 1.99均 23236卻41#4.8牡0.49*6.09士0.42*6.78士0一20*7.6肚0.56*2.2肚0.11#2.04均.45 4.32土 0.463.8肚 0.46#2.07士0.18*1.90切.23*1.47士0.13*1.01士0.22*3.91士0.19#4.36士0.43#:與正常對(duì)照組比較尸<0.05*:與正常對(duì)照組比較尸<0.01從表中可看出，打撈出水后lh被測(cè)指標(biāo)即出現(xiàn)明顯變化，隨著時(shí)間推移與對(duì)照組的差異進(jìn)一步明顯，MDA在3d達(dá)到變化的峰值

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2776229