發(fā)布時(shí)間：2020-07-31 08:13

【摘要】： 目的: 分離培養(yǎng)胃粘膜幽門(mén)螺桿菌(Helicobacter pyroli,H.pylori),鑒定并進(jìn)行左氧氟沙星耐藥性分析;分析左氧氟沙星耐藥菌株與敏感菌株之間gyrA基因的DNA序列差異,探索gyrA基因突變?cè)贖.pylori左氧氟沙星耐藥產(chǎn)生過(guò)程中的作用,并制備gyrA基因突變檢測(cè)芯片。 方法: 將胃鏡活檢粘膜標(biāo)本,接種于H.pylori選擇性培養(yǎng)基,37℃微需氧環(huán)境培養(yǎng)3～5天,分離H.pylori菌株,采用傳統(tǒng)方法和UreA基因PCR擴(kuò)增鑒定。左氧氟沙星藥敏試驗(yàn)采用E-test法,篩選出耐藥菌株和敏感菌株。提取H.pylori菌株基因組DNA,PCR擴(kuò)增gyrA全基因并進(jìn)行測(cè)序并分析。設(shè)計(jì)并合成寡核苷酸探針并熒光標(biāo)記引物,制備gyrA基因突變芯片,檢測(cè)臨床分離H.pylori菌株。 結(jié)果: 38例H.pylori菌株藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)耐藥菌12例,結(jié)占31.58%。gyrA全基因測(cè)序結(jié)果顯示10例耐藥菌株存在261、271和272位點(diǎn)突變;C261A突變2例,C261G突變1例,G271A突變2例,A272G突變2例,C261A與G271T、A272G突變2例,G271A與A272G突變1例,而在26株敏感菌株未發(fā)現(xiàn)突變�；蛐酒瑱z測(cè)結(jié)果與PCR產(chǎn)物直接測(cè)序結(jié)果一致。 結(jié)論: 本地區(qū)分離H.pylori的臨床菌株左氧氟沙星耐藥率較高,其耐藥與gyrA基因261、271和272位點(diǎn)有關(guān);構(gòu)建的H.pylori gyrA基因突變檢測(cè)芯片能準(zhǔn)確、快速鑒定gyrA基因突變,為臨床個(gè)體化醫(yī)療提供完整的數(shù)據(jù),為進(jìn)一步深入研究H.pylori左氧氟沙星耐藥機(jī)制與gyrA基因突變關(guān)系提供了技術(shù)支持,而且對(duì)臨床H.pylori的左氧氟沙星治療具有一定指導(dǎo)意義。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R573;R450
【圖文】：

HPyfori平皿培養(yǎng)結(jié)果

HPylori革蘭染色鏡檢(1000x

圖3.3部分HPylori菌株UreA基因PcR擴(kuò)增結(jié)果3.2左氧氟沙星藥敏試驗(yàn)38例臨床分離 HPyzori菌株通過(guò)左氧氟沙星E一test藥敏試驗(yàn)，見(jiàn)圖3.4，結(jié)果12例Mlc大于1，ou留ml，耐藥菌株占 31.58%，敏感菌株占68.42%;見(jiàn)表3.1及圖3.5。圖3.4左氧氟沙星E一test藥敏試驗(yàn)

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 胡伏蓮;;中國(guó)幽門(mén)螺桿菌耐藥研究現(xiàn)狀[J];胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志;2008年07期

2 高文;胡伏蓮;;幽門(mén)螺桿菌感染與胃腸道外疾病[J];中國(guó)醫(yī)刊;2007年02期

本文編號(hào)：2776211