本文關鍵詞：口服心肌細胞培養(yǎng)液凍干物對人鼻咽癌裸鼠移植瘤生長抑制的實驗研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:比較不同濃度的心肌細胞培養(yǎng)液(cardicac muscle cell culture medium,CMCM)對鼻咽癌CNE-2細胞的增殖活性的影響,初步確定CMCM體外抑瘤效應的有效濃度。通過初步研究CMCM對鼻咽癌CNE-2細胞的體外遷移能力的影響,為其對腫瘤細胞體內遷移能力影響的后期實驗研究提供實驗基礎。初步觀察口服CMCM凍干物對人鼻咽癌裸鼠移植瘤的生長、凋亡以及對裸鼠體重的影響,分析口服給藥方式的可行性和有效性,以及可能的不良反應,為將來CMCM凍干物的口服給藥途徑在惡性腫瘤治療的臨床應用中提供科學的理論依據。方法:1、采用雙酶消化法原代培養(yǎng)Wistar乳鼠的心肌細胞,并收集對數生長期的細胞上清液,即Wistar乳鼠的CMCM。用截留分子量為10KD的超濾離心管以4000轉/分超低溫離心10min,收集分子量小于10KD的濾液。用直徑為0.22μm的濾菌器過濾除菌后冷凍干燥成干粉,-20℃保存?zhèn)溆谩?、采用MTT法觀察不同濃度的CMCM對鼻咽癌CNE-2細胞的增殖活性的影響,找出其有效的抑瘤濃度;然后利用MTT法確定的有效抑瘤濃度進行劃痕實驗,24h后觀察CMCM對鼻咽癌CNE-2細胞的體外遷移能力的影響。3、采用細胞懸液接種法建立人鼻咽癌CNE-2細胞的BALB/C裸鼠移植瘤模型。當瘤體積平均值達100mm3左右時,將42只荷瘤裸鼠隨機分為7組:腹腔陰性對照組(25ml/kg生理鹽水;normal saline,NS)、腹腔CMCM組(15mg/kg的CMCM溶于25ml/kg的NS中)、腹腔陽性對照組(2mg/kg的順鉑溶于25ml/kg的NS中;cisplatin,DDP)、灌胃陰性對照組(25ml/kg的NS)、灌胃CMCM低劑量組(30mg/kg的CMCM凍干物溶于25ml/kg的NS中)、灌胃CMCM中劑量組(60mg/kg的CMCM凍干物溶于25ml/kg的NS中)和灌胃CMCM高劑量組(120mg/kg的CMCM凍干物溶于25ml/kg的NS中),每組6只,同時根據分組要求開始給藥。各組裸鼠采用每天灌胃給藥的方式給予一次相應濃度的CMCM或NS,共14天。給藥期間每3天測一次裸鼠體重和腫瘤體積。停藥24小時后處死裸鼠,迅速將鼻咽癌CNE-2細胞的移植瘤分離并稱瘤重,計算抑瘤率。采用脫氧核糖核苷酸末端轉移酶介導的缺口末端標記法(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated d UTP nick end labeling,TUNEL)檢測移植瘤組織中的細胞凋亡情況,Ki67免疫組化染色法檢測瘤組織中腫瘤細胞的增殖情況。結果:1、MTT結果顯示:作用鼻咽癌CNE-2細胞48h后,1:4稀釋的心肌細胞培養(yǎng)液(1/4CMCM)、1:8稀釋的心肌細胞培養(yǎng)液(1/8CMCM)和1:16稀釋的心肌細胞培養(yǎng)液(1/16CMCM)對鼻咽癌CNE-2細胞的存活率與陰性對照組比較有增加的趨勢(P0.05),而1:2稀釋的心肌細胞培養(yǎng)液(1/2CMCM)組和心肌細胞培養(yǎng)液原液(1/1CMCM)組中鼻咽癌CNE-2細胞的存活率與陰性對照組比較有降低的趨勢(P0.05),表明一定濃度的CMCM可以在體外抑制鼻咽癌CNE-2細胞的增殖。2、劃痕實驗結果顯示:作用鼻咽癌CNE-2細胞24h后,1/1CMCM和1/2CMCM組與陰性組相比,細胞遷移距離更短,遷移速度更緩慢(P0.05)。但是,這兩組間的細胞遷移距離比較無明顯統(tǒng)計學差異(P0.05),表明一定濃度的CMCM可以體外抑制鼻咽癌CNE-2細胞的遷移。3、雖然在給藥后的實驗觀察期間,各組人鼻咽癌CNE-2細胞的裸鼠移植瘤的腫瘤體積均出現(xiàn)逐漸增加的趨勢,但是在給藥后的第3天開始,腹腔CMCM組(15mg/kg)、腹腔陽性對照組(DDP 2mg/kg)、灌胃CMCM低劑量組(30mg/kg)、灌胃CMCM中劑量組(60mg/kg和灌胃CMCM高劑量組(120mg/kg)中的瘤體積與腹腔陰性對照組或灌胃陰性對照組相比,腫瘤體積增長速度就已經明顯減慢(P0.05),而對等同劑量下的腹腔CMCM組(15mg/kg)與灌胃CMCM中劑量組(60mg/kg)的瘤體積進行比較發(fā)現(xiàn),在第3天、12天和15天存在統(tǒng)計學差異(P0.05)。4、停藥后,處死裸鼠,稱取各組移植瘤的瘤重,發(fā)現(xiàn)與腹腔陰性對照組或灌胃陰性對照組的瘤重相比,腹腔CMCM組(15mg/kg)、腹腔陽性對照組(DDP 2mg/kg)、灌胃CMCM低劑量組(30mg/kg)、灌胃CMCM中劑量組(60mg/kg)和灌胃CMCM高劑量組(120mg/kg)的瘤重較輕。且對等同劑量下的腹腔CMCM組(15mg/kg)與灌胃CMCM中劑量組(60mg/kg)的瘤重進行比較發(fā)現(xiàn),灌胃CMCM中劑量組(60mg/kg)的腫瘤組織重量明顯減輕(P0.05),但抑瘤率無明顯的統(tǒng)計學差異(P0.05)。這些結果表明,口服CMCM凍干物可以抑制人鼻咽癌CNE-2裸鼠移植瘤的生長。5、在實驗觀察期間,各組裸鼠的體重均有所增加,只有腹腔陽性對照組(DDP2mg/kg)的體重增加不明顯,與腹腔陰性對照組相比,存在統(tǒng)計學差異(P0.05),其余各小組之間的裸鼠體重之間無統(tǒng)計學差異(P0.05),表明口服CMCM各劑量組的凍干物對移植了人鼻咽癌CNE-2細胞的裸鼠體重增長無影響,其可能是一種具有生物安全性的抗腫瘤物質。6、Ki67免疫組化的結果顯示:腹腔陰性對照組的Ki67陽性細胞百分率為71.38±1.21%,腹腔CMCM組(15mg/kg)和腹腔陽性對照組(DDP 2mg/kg)的Ki67陽性細胞百分率分別為48.86±2.13%、25.55±3.2%。與腹腔陰性對照組相比,其余腹腔各組的Ki67表達率均降低(P0.05)。而灌胃陰性對照組的Ki67陽性細胞百分率為75.70±7.17%,灌胃CMCM低劑量組(30mg/kg)、灌胃CMCM中劑量組(60mg/kg)和灌胃CMCM高劑量組(120mg/kg)的Ki67陽性細胞百分率分別為60.65±4.23%、51.04±4.58%、41.42±8.24%。與灌胃陰性對照組相比,灌胃CMCM各劑量組的Ki67表達率均降低(P0.05),且將CMCM各劑量組之間進行差異比較,發(fā)現(xiàn)Ki67陽性細胞百分率有隨劑量的增加而降低的趨勢(P0.05)。表明口服心肌細胞培養(yǎng)液凍干物可以在體內抑制人鼻咽癌CNE-2細胞的增殖作用。但是,對等同劑量下的腹腔CMCM組(15mg/kg)與灌胃CMCM中劑量組(60mg/kg)的Ki67陽性細胞百分率進行比較發(fā)現(xiàn),兩者之間沒有明顯的統(tǒng)計學差異(P0.05)。7、TUNEL結果顯示:腹腔陰性對照組的細胞凋亡百分率為17.67±6.22%,腹腔CMCM組(15mg/kg)和腹腔陽性對照組(DDP 2mg/kg)的細胞凋亡百分率分別為42.01±6.74%、70.7±6.32%,與腹腔陰性對照組相比,其余各組的凋亡細胞數均增加(P0.05)。而灌胃陰性對照組的細胞凋亡百分率為18.63±3.59%,灌胃CMCM低劑量組(30mg/kg)、灌胃CMCM中劑量組(60mg/kg)和灌胃CMCM高劑量組(120mg/kg)的細胞凋亡百分率分別為30.23±6.02%、51.63±11.09%、60.61±8.71%,與灌胃陰性對照組相比,灌胃CMCM各劑量組的凋亡細胞數均增加(P0.05)。表明口服CMCM凍干物可以促進人鼻咽癌CNE-2裸鼠移植瘤的細胞凋亡作用。但是,對等同劑量下的腹腔CMCM組(15mg/kg)與灌胃CMCM中劑量組(60mg/kg)的細胞凋亡百分率進行比較發(fā)現(xiàn),兩者之間沒有明顯的統(tǒng)計學差異(P0.05)。結論:1、心肌細胞培養(yǎng)液可以體外抑制鼻咽癌CNE-2細胞的增殖和遷移。2、心肌細胞培養(yǎng)液可能是一種安全有效的天然抑瘤物,通過口服其凍干物可表現(xiàn)出良好的抗腫瘤作用。3、口服心肌細胞培養(yǎng)液凍干物可以抑制人鼻咽癌CNE-2細胞的裸鼠移植瘤的生長,其抗腫瘤機制可能與抑制腫瘤細胞增殖和促進腫瘤細胞凋亡相關。
【關鍵詞】：心肌細胞培養(yǎng)液 鼻咽癌細胞 裸鼠 細胞遷移 細胞增殖 細胞凋亡
【學位授予單位】：四川醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.63
【目錄】：

• 中文摘要4-9
• 英文摘要9-15
• 前言15-18
• 材料與方法18-31
• 結果31-48
• 討論48-55
• 結論55-56
• 參考文獻56-67
• 英漢縮略詞對照表67-68
• 致謝68-69
• 心房利鈉肽原的不同肽段的抗腫瘤機制（綜述）69-81
• 參考文獻77-81

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前2條

1 姜凱,黃志強;細胞間的相互作用與腫瘤的浸潤轉移研究進展[J];腫瘤防治雜志;2003年05期

2 ;Suppression of matrix metalloproteinase-2 via RNA interference inhibits pancreatic carcinoma cell invasiveness and adhesion[J];World Journal of Gastroenterology;2009年09期

  本文關鍵詞：口服心肌細胞培養(yǎng)液凍干物對人鼻咽癌裸鼠移植瘤生長抑制的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：326386