本文關(guān)鍵詞：肺炎鏈球菌組氨酸激酶（VicK）中藥單體抑制劑的抗菌作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 雙組份系統(tǒng)VicR/VicK是肺炎鏈球菌中唯一一個(gè)與細(xì)菌生存相關(guān)的TCS系統(tǒng),調(diào)控著維持細(xì)胞壁穩(wěn)態(tài)的基因表達(dá)，而且調(diào)節(jié)細(xì)菌對(duì)抗生素的耐藥性。其中VicK為含449個(gè)氨基酸的組氨酸激酶受體，負(fù)責(zé)接收外界信號(hào)刺激并將信號(hào)傳遞給VicR，被認(rèn)為是篩選抗菌藥物的良好作用靶點(diǎn)。 目前已有多篇以VicK為靶點(diǎn)篩選抗菌藥物的文章報(bào)道，本課題組以前也以該靶點(diǎn)篩選出6個(gè)具有抗肺炎鏈球菌作用的小分子化合物。而中藥單體作為我國(guó)傳統(tǒng)藥物，來(lái)源廣泛且副作用小，是很好的抗菌藥物篩選庫(kù)，實(shí)驗(yàn)室前期以肺炎鏈球菌VicK為靶點(diǎn)通過(guò)計(jì)算機(jī)虛擬篩選獲得96種中藥單體，本研究將對(duì)這些化合物的抗菌作用進(jìn)行體內(nèi)外驗(yàn)證，同時(shí)對(duì)其相關(guān)作用機(jī)制進(jìn)行初步研究。 方法 通過(guò)原核表達(dá)技術(shù)從大腸桿菌中表達(dá)S.pn VicK全長(zhǎng)蛋白，經(jīng)Western blot分析VicK在6種不同血清型肺炎鏈球菌中的保守性并通過(guò)試劑盒檢測(cè)其激酶活性。然后利用具有活性的VicK蛋白對(duì)化合物進(jìn)行體外篩選，，以抑制VicK蛋白激酶活性的化合物進(jìn)行隨后的抑菌實(shí)驗(yàn)。采用最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）評(píng)估化合物的體外抗菌，利用細(xì)胞毒性試驗(yàn)評(píng)價(jià)其細(xì)胞毒性，采用小鼠S.pn鼻咽部定植模型和敗血癥模型評(píng)估化合物體內(nèi)抗菌作用，分別以感染部位細(xì)菌載量和生存率為評(píng)價(jià)指標(biāo)。采用微量棋盤(pán)稀釋法檢測(cè)其與傳統(tǒng)抗菌藥是否具有協(xié)同效應(yīng)，并從細(xì)菌形態(tài)變化和生物膜形成的角度初步探索其抗菌的機(jī)制。 結(jié)果 試驗(yàn)中的5種中藥單體化合物為：甲硫腺苷、octanal2,4-dinitrophenylhydrazone、去氧紫草素、麻醉椒苦素、沒(méi)食子酸月桂酯，其對(duì)VicK的ATPase酶活性具有顯著的抑制效應(yīng)，抑制率均大于50%。體外抑菌作用結(jié)果顯示，這5中化合物對(duì)肺炎鏈球菌的MIC分別為37.1,38.5,17,68.5, and21μg/mL，而體內(nèi)抗菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，5種化合物均能顯著延長(zhǎng)感染小鼠的生存時(shí)間。同時(shí)這5種化合物對(duì)耐藥性肺炎鏈球菌、變形鏈球菌、緩癥鏈球菌、化膿鏈球菌假肺炎均具有抗菌作用，其中去氧紫草素和沒(méi)食子酸月桂酯對(duì)MRSA也有顯著抗菌作用�？咕鷻C(jī)制研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在sub-MIC下，5種化合物都能抑制細(xì)菌細(xì)胞分裂和生物膜的形成。傳統(tǒng)抗菌藥增效實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，去氧紫草素和沒(méi)食子酸月桂酯與青霉素、紅霉素和四環(huán)素都有協(xié)同作用，能夠降低耐藥型19F、19AS.pn在鼻咽部和肺部的定植。細(xì)胞毒性試驗(yàn)顯示5種化合物的細(xì)胞毒性較低。 結(jié)論 5種中藥單體化合物為VicK蛋白抑制劑，具有顯著的體內(nèi)外抗鏈球菌的活性，且對(duì)青霉素、紅霉素和四環(huán)素都有一定的增效作用，為新的具有一定廣譜性的抗菌先導(dǎo)化合物，在治療鏈球菌感染特別是耐藥性鏈球菌感染中有一定的應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：肺炎鏈球菌 中藥單體 抗菌作用 VicK組氨酸激酶
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R378.1
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-7
• 中文摘要7-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-15
• 第一部分 肺炎鏈球菌組氨酸激酶 VicK 蛋白的全長(zhǎng)表達(dá)及其保守性分析15-24
• 1 實(shí)驗(yàn)材料15-16
• 2 實(shí)驗(yàn)方法16-18
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果18-22
• 4 討論22-24
• 第二部分 中藥單體對(duì) VicK 蛋白激酶活性的抑制作用及抗菌作用驗(yàn)證24-32
• 1 實(shí)驗(yàn)材料24-25
• 2 實(shí)驗(yàn)方法25-26
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-30
• 4 討論30-32
• 第三部分 VicK 抑制劑的抗菌機(jī)制及對(duì)傳統(tǒng)抗菌藥的增效作用研究32-42
• 1 實(shí)驗(yàn)材料32-33
• 2 實(shí)驗(yàn)方法33-34
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果34-40
• 4 討論40-42
• 全文總結(jié)42-43
• 參考文獻(xiàn)43-46
• 文獻(xiàn)綜述46-54
• 參考文獻(xiàn)50-54
• 致謝54-55
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文題錄55-56

【參考文獻(xiàn)】

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

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  本文關(guān)鍵詞：肺炎鏈球菌組氨酸激酶（VicK）中藥單體抑制劑的抗菌作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：413234