發(fā)布時間：2017-05-23 22:15

  本文關(guān)鍵詞：線栓法與電凝法制備局灶性腦缺血模型比較及梓醇的干預(yù)作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：腦血管疾病(又叫腦中風(fēng),腦卒中)是一種嚴重影響人類健康的常見病,缺血性腦血管疾病(ICVD, Ischemic Cerebrovascular Disease)約占85%。腦缺血損傷造成不同程度神經(jīng)功能障礙,嚴重影響患者生活質(zhì)量,給患者家庭和社會帶來沉重的經(jīng)濟和心理負擔(dān)。 因此,尋找與開發(fā)防治缺血性腦血管病的藥物,成為當(dāng)前醫(yī)藥學(xué)界工作者特別關(guān)注的研究課題。動物腦缺血模型為腦缺血藥物篩選提供了有力的手段。模擬人類腦缺血特點,制備局灶腦缺血模型,研究腦缺血病理病生變化規(guī)律,對于尋找腦缺血治療靶點,藥物篩選評價都具有重要意義。 目的：通過線栓法與電凝法制備局灶性腦缺血模型比較和梓醇對兩種腦缺血模型干預(yù)效應(yīng)研究,以期找出兩種方法制備的局灶性腦缺血模型的特點,為正確選擇動物實驗?zāi)Ｐ脱芯磕X缺血病理病生機制和新藥研發(fā)提供實驗依據(jù)。 第一部分：線栓法與電凝法制備局灶性腦缺血模型比較 方法：采用線栓法與電凝法制備局灶永久性腦缺血模型(Permanent Middle Cerebral Artery Occlusion, pMCAO),采用神經(jīng)行為學(xué)評分(神經(jīng)肌肉功能評分、肌力測試、Bederson神經(jīng)功能評分、平衡木行走試驗)和腦梗死面積測定(TTC染色)以及死亡率觀測比較兩種方法制備腦缺血模型的特點。 結(jié)果：線栓法制備局灶永久性腦缺血模型,缺血區(qū)梗死面積隨時間增加而增大,24h、48h缺血面積分別占全腦面積的25.6%和44.9%,72h大腦缺血區(qū)域已達全腦的45.7%。實驗中,模型小鼠死亡率高達28.57%,神經(jīng)行為學(xué)測試選用神經(jīng)肌肉功能評分和肌力測試兩種方法,小鼠各時間點神經(jīng)行為學(xué)功能缺陷隨缺血時間延長有加重趨勢,但各組之間行為學(xué)測試結(jié)果無顯著性差異。 電凝法制備局灶永久性腦缺血模型,凝閉大鼠大腦中動脈不同部位梗塞面積有明顯不同,表現(xiàn)為皮層梗死、皮層下梗死,梗死范圍因凝閉部位不同而有差異。模型大鼠成功率可達100%,死亡率極低。實驗選取凝閉大腦中動脈第2分支點的近心端,大鼠大腦缺血梗死面積隨時間推移有所增加,6h、12h、24h、48h和72h大鼠大腦缺血區(qū)域分別占全腦的2.61%、7.76%、19.26%、20.16%和25.05%,死亡率為零。神經(jīng)行為學(xué)評分選用Bederson神經(jīng)功能評分,肌力測試和平衡木行走試驗三種方法進行測試。結(jié)果顯示,隨著缺血時間的延長,Bederson神經(jīng)功能評分和肌力測試評分有增加趨勢,平衡木行走評分有降低趨勢,統(tǒng)計結(jié)果各組間無顯著性差異。 第二部分：梓醇對線栓法與電凝法制備局灶性腦缺血模型的干預(yù)研究 方法：采用線栓法與電凝法制備動物局灶永久性腦缺血模型,采用神經(jīng)行為學(xué)測試(神經(jīng)肌肉功能評分、肌力測試、Bederson神經(jīng)功能評分、平衡木行走試驗)和腦梗死面積測定(TTC染色)研究梓醇對兩種方法制備的局灶永久性腦缺血模型的干預(yù)效應(yīng)：(1)治療時間窗研究；(2)量效關(guān)系研究。Western Blot檢測大鼠局灶永久性腦缺血后JAK2/STAT3/VEGF信號蛋白隨時間變化規(guī)律以及梓醇的影響。 結(jié)果：短期治療研究顯示,神經(jīng)行為學(xué)測試各組間無顯著性差異,梓醇中劑量(7mg/kg)和高劑量(14.2mg/kg)顯著減小動物缺血區(qū)梗死面積,提示梓醇具有減小腦缺血動物缺血區(qū)梗死面積作用,呈現(xiàn)出一定量效關(guān)系。神經(jīng)行為學(xué)測試與TTC染色結(jié)果不一致。治療時間窗結(jié)果顯示,選擇術(shù)前0.5h、術(shù)后1h和24h首次給藥,神經(jīng)行為學(xué)測試各組間無顯著性差異,梗死面積研究表明術(shù)前0.5h、術(shù)后1h首次給藥梓醇治療顯著減小梗死面積,雖然缺血24h后首次給藥仍然有效,但術(shù)前0.5h,術(shù)后1h首次給藥效果最佳,缺血面積分別減小了33.65%和33.9%。神經(jīng)行為學(xué)測試沒有顯示出明顯差異。 長期治療效應(yīng)結(jié)果顯示,梓醇高劑量(10mg/kg)在缺血后7d和15d能顯著減輕神經(jīng)行為缺陷,改善缺血大鼠神經(jīng)行為功能,減小缺血區(qū)梗死面積。神經(jīng)行為學(xué)測試(Bederson神經(jīng)功能評分、肌力測試、平衡木行走試驗)在缺血后28d也能夠反映出梓醇給藥組與模型組神經(jīng)行為功能恢復(fù)之間的差異,提示梓醇對腦缺血神經(jīng)缺損有一定修復(fù)作用,Bederson神經(jīng)功能評分、肌力測試、平衡木行走試驗評價大鼠感覺運動整合功能,能夠較好的評價缺血大鼠一周后的神經(jīng)行為功能恢復(fù)情況,有效地反映藥物的治療效應(yīng)。 本研究觀察了大鼠局灶永久性腦缺血后JAK2/STAT3/VEGF信號通路蛋白表達隨時間變化規(guī)律,發(fā)現(xiàn)腦缺血后1d到7d期間,缺血區(qū)VEGF蛋白表達持續(xù)增高,提示缺血后早期(1-7d)腦水腫可能與VEGF表達上調(diào)有關(guān),而后期VEGF的下調(diào)作用顯示其血管新生效應(yīng)的保護效應(yīng)不足,15d之后開始下降,并一直延續(xù)至28d。梓醇治療后,在缺血15d上調(diào)VEGF蛋白表達,至21d蛋白表達維持一定水平。結(jié)合課題組前期研究結(jié)果,提示梓醇在早期下調(diào)VEGF蛋白,后期上調(diào)VEGF蛋白,這種調(diào)節(jié)與JAK2/STAT3信號通路有關(guān)。 結(jié)論： (1)線栓法制備腦缺血模型受影響因素多,梗死面積大,死亡率高,適合于腦缺血急性期腦保護研究。 (2)電凝法局灶永久性腦缺血模型具有可視缺血面積可控,死亡率極低,可用于腦缺血后神經(jīng)修復(fù)研究,皮質(zhì)、皮質(zhì)下、皮層梗死病理病生機制及藥物篩選研究。 (3)TTC染色反映腦梗死面積,能夠較好反映出缺血后急性期各時間變化差異,但所選方法(神經(jīng)肌肉功能評分、肌力測試、Bederson神經(jīng)功能評分、平衡木行走試驗)不能較好顯示出急性期所觀察時點之間神經(jīng)行為學(xué)差異。 (4)梓醇中劑量(7mg/kg)和高劑量(14.2mg/kg)治療腦缺血有效,治療時間窗研究表明術(shù)前0.5h、術(shù)后1h首次給藥治療顯著減小梗死面積。 (5)梓醇治療腦缺血可能與調(diào)節(jié)JAK2/STAT3/VEGF蛋白信號有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：局灶永久性腦缺血(線栓法 電凝法) 梓醇 神經(jīng)功能恢復(fù) 梗死面積(TTC) JAK2/STAT3/VEGF
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R-332;R743.3
【目錄】：

• 英語縮略語名詞對照5-6
• 摘要6-9
• Abstract9-13
• 引言13-15
• 第一部分：不同方法制備局灶永久性腦缺血模型比較研究15-25
• 1 材料與方法15-19
• 1.1 實驗動物與分組15
• 1.2 儀器與試劑15
• 1.3 線栓法制備局灶永久性腦缺血模型15-16
• 1.4 電凝法制備局灶永久性腦缺血模型16
• 1.5 模型納入及排除標準16
• 1.6 神經(jīng)行為學(xué)評價方法16-18
• 1.7 TTC染色18-19
• 1.8 統(tǒng)計學(xué)方法19
• 2 結(jié)果19-23
• 2.1 實驗一：線栓法制備局灶永久性腦缺血模型研究19-20
• 2.2 實驗二：電凝法制備局灶永久性腦缺血模型研究20-23
• 3 討論23-24
• 4 小結(jié)24-25
• 第二部分 梓醇對線栓法與電凝法制備局灶性腦缺血模型的干預(yù)作用研究25-37
• 1 材料與方法25-29
• 1.1 實驗動物與分組25-26
• 1.2 儀器與試劑26
• 1.3 藥物配制與干預(yù)26-27
• 1.4 線栓法制備局灶永久性腦缺血模型27
• 1.5 電凝法制備局灶永久性腦缺血模型27
• 1.6 神經(jīng)行為學(xué)評價方法27-28
• 1.7 TTC染色28
• 1.8 Western Blot檢測及分析28
• 1.9 統(tǒng)計學(xué)方法28-29
• 2 結(jié)果29-34
• 2.1 梓醇樣品純度鑒定29
• 2.2 實驗一 梓醇治療腦缺血短期效應(yīng)研究29-31
• 2.3 實驗二 梓醇治療腦缺血長期效應(yīng)研究31-33
• 2.4 實驗三 腦缺血后JAK2/STAT3信號通路蛋白隨時間變化規(guī)律及梓醇的影響33-34
• 3 討論34-36
• 4 小結(jié)36-37
• 全文總結(jié)37-39
• 創(chuàng)新點及其意義39-41
• 思考與展望41-43
• 文獻綜述43-47
• 參考文獻47-51
• 致謝51-53
• 攻讀碩士學(xué)位期間科研工作匯報53

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 王橋生;符暉;曾紅科;;線栓法大鼠局灶腦缺血模型的改進與評價[J];中南醫(yī)學(xué)科學(xué)雜志;2012年03期

2 趙帥;樊小農(nóng);孟智宏;張俊清;韓科;牟蛟;張超;焦洋;;線栓法制備大鼠中動脈缺血閉塞模型研究進展[J];江西中醫(yī)藥;2012年03期

3 �；埒P;萬東;羅勇;謝鵬;徐曉玉;;梓醇上調(diào)GAP-43表達伴隨局灶腦缺血大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)[J];中國藥理學(xué)通報;2007年09期

4 王擁軍;;腦卒中神經(jīng)保護劑治療的研究進展[J];中國醫(yī)療前沿;2007年05期

5 萬東;�；埒P;羅勇;謝鵬;徐曉玉;;梓醇促大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元軸突生長的離體研究[J];中國中藥雜志;2007年17期

6 葉建鋒,李濤平,舒斯云,高寧;大鼠腦缺血模型的改進和腦缺血再灌流損傷誘發(fā)細胞凋亡的研究[J];中國急救醫(yī)學(xué);1999年04期

  本文關(guān)鍵詞：線栓法與電凝法制備局灶性腦缺血模型比較及梓醇的干預(yù)作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：389242