本文關(guān)鍵詞：表沒(méi)食子兒茶素-3-沒(méi)食子酸酯對(duì)脂多糖刺激小鼠巨噬細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子和趨化因子的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：炎癥是臨床常見(jiàn)的一種病理生理過(guò)程，與多種疾病的發(fā)生和惡化有關(guān)。在炎癥反應(yīng)期間，由組織內(nèi)的細(xì)胞表達(dá)分泌的細(xì)胞因子、趨化因子等進(jìn)一步地募集嗜中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞等免疫反應(yīng)細(xì)胞進(jìn)入創(chuàng)傷部位參與炎癥反應(yīng)，它們對(duì)炎癥反應(yīng)的發(fā)生、發(fā)展起到了重要的調(diào)節(jié)作用。 表沒(méi)食子兒茶素-3-沒(méi)食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate, EGCG)是綠茶多酚重要的有效活性成分，具有抗炎癥、抗氧化、抗輻射、抗衰老、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞周期停滯和啟動(dòng)腫瘤細(xì)胞凋亡等多種生物學(xué)作用。本實(shí)驗(yàn)室先前的研究表明，EGCG能夠抑制皮膚傷口愈合期間白細(xì)胞介素-1(interleukin-1，IL-1)、腫瘤壞死因子-(tumor necrosis factor-TNF-)、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶-1(metalloproteinase-1, MMP-1)和巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-2(macrophage inflammatoryprotein-2, MIP-2)的基因表達(dá)，降低組織IL-1、TNF-、MCP-1、MIP-2和MMP-1的水平，促進(jìn)基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1, TIMP-1)基因的表達(dá)。 本論文以小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7為實(shí)驗(yàn)材料，利用MTT法檢測(cè)EGCG對(duì)RAW264.7細(xì)胞增殖的影響，實(shí)時(shí)熒光定量PCR和ELISA法研究EGCG對(duì)脂多糖(Lipopolysaccharides，LPS)刺激小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7促炎癥細(xì)胞因子TNF-、IL-1和趨化因子MCP-1、MIP-2基因表達(dá)及其生成的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，1μg/mL LPS處理24h對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7增殖沒(méi)有影響，0~100μmol/L EGCG處理24h對(duì)RAW264.7細(xì)胞的增殖也沒(méi)有影響。1μg/mL LPS可刺激RAW264.7細(xì)胞TNF-、IL-1、MCP-1、MIP-2的基因表達(dá)與分泌，而EGCG對(duì)LPS刺激的RAW264.7細(xì)胞TNF-、IL-1、MCP-1、MIP-2基因水平和蛋白水平均有抑制效應(yīng)，并呈劑量依賴性，50μmol/L EGCG的抑制作用最強(qiáng)，，提示EGCG能顯著抑制LPS刺激巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：炎癥反應(yīng) 表沒(méi)食子兒茶素-3-沒(méi)食子酸酯 腫瘤壞死因子- 白細(xì)胞介素-1 單核細(xì)胞趨化蛋白-1 巨噬細(xì)胞炎性蛋白-2 巨噬細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：河南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R363
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-6
• 縮略詞表6-10
• 文獻(xiàn)綜述10-22
• 1 炎癥反應(yīng)10-15
• 1.1 炎癥反應(yīng)的發(fā)生過(guò)程10-11
• 1.2 與炎癥反應(yīng)有關(guān)的細(xì)胞因子、趨化因子11-14
• 1.3 脂多糖誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的機(jī)理和過(guò)程14-15
• 2 巨噬細(xì)胞在炎癥反應(yīng)過(guò)程中的作用15-16
• 3 表沒(méi)食子兒茶素-3-沒(méi)食子酸酯16-22
• 3.1 表沒(méi)食子兒茶素-3-沒(méi)食子酸酯簡(jiǎn)介16-17
• 3.2 表沒(méi)食子兒茶素-3-沒(méi)食子酸酯抗炎機(jī)理的研究17-22
• 第一章 引言22-24
• 第二章 材料和方法24-38
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料24-28
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞24
• 2.1.2 主要試劑24-25
• 2.1.3 主要儀器設(shè)備25-26
• 2.1.4 試劑的配制26-28
• 2.2 RAW264.7 細(xì)胞的培養(yǎng)28
• 2.2.1 RAW264.7 細(xì)胞的培養(yǎng)與傳代28
• 2.2.2 RAW264.7 細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇28
• 2.3 MTT 法檢測(cè)細(xì)胞增殖28-29
• 2.3.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)28-29
• 2.3.2 EGCG 和 LPS 對(duì) RAW264.7 細(xì)胞增值影響的測(cè)定29
• 2.4 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR29-34
• 2.4.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)29
• 2.4.2 實(shí)驗(yàn)用品的 RNase-free 處理29-30
• 2.4.3 RNA 提取30-31
• 2.4.4 RNA 完整性檢測(cè)31
• 2.4.5 RNA 濃度和純度檢測(cè)31-32
• 2.4.6 RNA 的保存32
• 2.4.7 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)32
• 2.4.8 試劑的分裝32-33
• 2.4.9 實(shí)驗(yàn)所用引物33
• 2.4.10 PCR 操作步驟33-34
• 2.5 ELISA 法檢測(cè)34-38
• 2.5.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)34-35
• 2.5.2 ELISA 檢測(cè)前準(zhǔn)備工作35
• 2.5.3 ELISA 檢測(cè)操作步驟35-36
• 2.5.4 結(jié)果計(jì)算36-38
• 第三章 結(jié)果38-50
• 3.1 MTT 法實(shí)驗(yàn)結(jié)果38-40
• 3.1.1 LPS 對(duì) RAW264.7 細(xì)胞增殖的影響38-39
• 3.1.2 EGCG 對(duì) RAW264.7 細(xì)胞增殖的影響39-40
• 3.2 RNA 質(zhì)量檢測(cè)40-41
• 3.3 EGCG 對(duì) LPS 刺激 RAW264.7 細(xì)胞 TNF- 基因表達(dá)的影響41-42
• 3.4 EGCG 對(duì) LPS 刺激 RAW264.7 細(xì)胞 TNF- 生成的影響42-43
• 3.5 EGCG 對(duì) LPS 刺激 RAW264.7 細(xì)胞 IL-1 基因表達(dá)的影響43-44
• 3.6 EGCG 對(duì) LPS 刺激 RAW264.7 細(xì)胞 IL-1 生成的影響44-45
• 3.7 EGCG 對(duì) LPS 刺激 RAW264.7 細(xì)胞 MCP-1 基因表達(dá)的影響45-46
• 3.8 EGCG 對(duì) LPS 刺激 RAW264.7 細(xì)胞 MCP-1 生成的影響46-47
• 3.9 EGCG 對(duì) LPS 刺激 RAW264.7 細(xì)胞 MIP-2 基因表達(dá)的影響47-48
• 3.10 EGCG 對(duì) LPS 刺激 RAW264.7 細(xì)胞 MIP-2 生成的影響48-50
• 第四章 討論50-54
• 4.1 發(fā)生炎癥反應(yīng)過(guò)程中 TNF- 、IL-1 、MCP-1 和 MIP-2 基因的表達(dá)分析50-51
• 4.2 EGCG 對(duì) TNF- 、IL-1 、MCP-1、MIP-2 分泌和基因表達(dá)的影響51-54
• 第五章 結(jié)論54-56
• 參考文獻(xiàn)56-62
• 致謝62-64
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄64-65

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：表沒(méi)食子兒茶素-3-沒(méi)食子酸酯對(duì)脂多糖刺激小鼠巨噬細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子和趨化因子的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：372362