本文關(guān)鍵詞：miRNAlet-7c在anisomycin誘導(dǎo)JurkatT細(xì)胞凋亡中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景：有文獻(xiàn)報(bào)道anisomycin在體外能誘導(dǎo)多種細(xì)胞凋亡，本研究組之前的研究證實(shí)anisomycin能抑制多種不同組織學(xué)類型腫瘤細(xì)胞的增殖和誘導(dǎo)Jurkat T細(xì)胞的凋亡，并證實(shí)JNK （c-jun N-terminal or stress-activated protein kinases）信號(hào)通路介導(dǎo)Jurkat T細(xì)胞凋亡。目前為止，JNK信號(hào)通路下游作用于何種凋亡相關(guān)分子及其受哪些miRNA調(diào)控從而介導(dǎo)細(xì)胞凋亡尚未見報(bào)道。顯然，探明這一點(diǎn)具有重要的科學(xué)意義，將有助于揭示anisomycin誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機(jī)制以及豐富現(xiàn)有細(xì)胞凋亡理論。 目的：初步探討let-7c在anisomycin誘導(dǎo)Jurkat T細(xì)胞凋亡中的作用與可能機(jī)制。 方法：流式細(xì)胞術(shù)分析不同濃度anisomycin于6h和24h誘導(dǎo)Jurkat T細(xì)胞凋亡以及JNK通路特異性阻斷劑SP600125和ERK（extracellular-signal regulated kinase）通路特異性阻斷劑PD98059的逆轉(zhuǎn)作用；選擇40ng/ml anisomycin為有效劑量，Western Blot檢測(cè)anisomycin對(duì)凋亡相關(guān)蛋白P-BCL-XL和P-Bim表達(dá)水平的影響，并用SP600125和PD98059進(jìn)行干預(yù)；用報(bào)告基因array檢測(cè)anisomycin處理后Jurkat T細(xì)胞凋亡相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的活性；EMSA（electrophoretic mobility shift assay）檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子AP-1的DNA結(jié)合活性；利用miRNAarray從48種與細(xì)胞凋亡相關(guān)的miRNA中篩選anisomycin作用后差異表達(dá)的miRNA，再利用qPCR進(jìn)行驗(yàn)證。選擇差異表達(dá)穩(wěn)定的let-7c進(jìn)行功能鑒定，轉(zhuǎn)染let-7c-mimic和let-7c-inhibitor及其突變體，與anisomycin處理組比較，通過qPCR檢測(cè)其增減倍數(shù)，并利用流式細(xì)胞術(shù)及Western Blot分析其在細(xì)胞凋亡中的作用。 結(jié)果： anisomycin誘導(dǎo)的Jurkat T細(xì)胞凋亡呈現(xiàn)濃度依賴性，隨著anisomycin濃度的升高，雙染細(xì)胞數(shù)目明顯升高，SP600125可明顯逆轉(zhuǎn)這種變化，PD98059卻無此作用。與對(duì)照組相比，經(jīng)40ng/ml的anisomycin處理后，磷酸化的Bim （P-Bim）和磷酸化的BCL-XL（P-BCL-XL）的蛋白表達(dá)量明顯升高，SP600125可致這兩種蛋白的表達(dá)量明顯下調(diào)，PD98059卻不能逆轉(zhuǎn)此變化。轉(zhuǎn)錄因子AP-1、NF-κb及P53的活性隨anisomycin濃度升高而增強(qiáng)，而轉(zhuǎn)錄因子HIF、STAT-1及STAT-3的活性卻隨著anisomycin濃度的升高而降低，，轉(zhuǎn)錄因子ISRE的變化無規(guī)律性。EMSA結(jié)果顯示隨著anisomycin濃度的提高，AP-1的DNA結(jié)合活性依次增強(qiáng)，可被SP600125所逆轉(zhuǎn)，與報(bào)告基因array中檢測(cè)AP-1的結(jié)果呈現(xiàn)一致性。在檢測(cè)anisomycin誘導(dǎo)Jurkat T細(xì)胞的凋亡相關(guān)miRNA表達(dá)譜中，與對(duì)照組相比，16種miRNA表達(dá)上調(diào)，31種表達(dá)下調(diào)。選擇7種表達(dá)差異明顯的miRNAs，即let-7c、miR-26、 miR-133b、miR-144、miR-193a、miR-296和miR-337進(jìn)行qPCR驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)let-7c與miR-133b表達(dá)差異穩(wěn)定，并具有生物重復(fù)性。Let-7c-mimic和Let-7c-inhibitor的作用顯示，Let-7c可上調(diào)Jurkat T細(xì)胞的凋亡，與P-BCL-XL及P-Bim蛋白的上調(diào)密切關(guān)聯(lián)。結(jié)論：anisomycin能誘導(dǎo)Jurkat T細(xì)胞的let-7c、miR-26、 miR-144、miR-193a和miR-337上調(diào)，下調(diào)miR-296和miR-133b的表達(dá)；anisomycin可能通過let-7c調(diào)控P-BCL-XL和P-Bim的表達(dá)從而誘導(dǎo)Jurkat T細(xì)胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：anisomycin let-7c BCL-XL miRNAs 細(xì)胞凋亡 Jurkat T
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R363;Q255
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 前言10-17
• 1 miRNA 的特性和功能10-11
• 2 miRNA 在細(xì)胞凋亡中的作用11-13
• 3 anisomycin 的結(jié)構(gòu)和功能13-14
• 4 anisomycin 誘導(dǎo)凋亡的可能機(jī)制14-15
• 5 研究思路與目的15-17
• 材料和方法17-33
• 1 主要試劑17-18
• 2 主要儀器18
• 3 主要溶液的配制18-21
• 4 細(xì)胞與培養(yǎng)21
• 4.1 細(xì)胞株21
• 4.2 細(xì)胞培養(yǎng)21
• 4.3 細(xì)胞傳代21
• 5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡21-22
• 6 Western Blot22-23
• 6.1 細(xì)胞處理22
• 6.2 蛋白的提取與定量22
• 6.3 電泳22-23
• 6.4 轉(zhuǎn)膜23
• 6.5 抗體結(jié)合及顯色23
• 7 報(bào)告基因 array 檢測(cè)凋亡相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的活性23-25
• 7.1 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染及細(xì)胞處理23-24
• 7.2 RNA 的提取24
• 7.3 TF Reporter plate array24-25
• 8 EMSA 檢測(cè) AP-1 的 DNA 結(jié)合活性25-28
• 8.1 細(xì)胞處理25
• 8.2 核蛋白的提取25-26
• 8.3 EMSA 結(jié)合反應(yīng)26
• 8.4 電泳26-27
• 8.5 轉(zhuǎn)膜27
• 8.6 檢測(cè)27-28
• 9 miRNA array 檢測(cè)凋亡相關(guān) miRNA 表達(dá)譜28-29
• 9.1 細(xì)胞處理28
• 9.2 Apoptosis-associated miRNA Plate Array28-29
• 10 qPCR 確定差異表達(dá)的 miRNA29-32
• 10.1 逆轉(zhuǎn)錄29-30
• 10.2 q PCR30-32
• 11 let-7c-mimic 和 let-7c-inhibitor 的應(yīng)用32
• 11.1 細(xì)胞處理及轉(zhuǎn)染32
• 12 流式細(xì)胞術(shù)分析 let-7c 在凋亡中的作用32
• 13 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析32-33
• 結(jié)果33-43
• 1 anisomycin 誘導(dǎo) Jurkat T 細(xì)胞凋亡33-34
• 2 anisomycin 上調(diào) P-BCL-XL 和 P-Bim 蛋白的水平34-36
• 2.1 anisomycin 上調(diào) P-BCL-XL 蛋白表達(dá)34-35
• 2.2 anisomycin 上調(diào) P-Bim 蛋白表達(dá)35-36
• 3 anisomycin 對(duì) Jurkat T 細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子活性的影響36-37
• 4 anisomycin 對(duì) AP-1 表達(dá)的影響37-39
• 5 anisomycin 誘導(dǎo) Jurkat T 細(xì)胞 miRNA 差異表達(dá)的篩選39-40
• 6 anisomycin 誘導(dǎo) Jurkat T 細(xì)胞凋亡中差異表達(dá)的 miRNA 的確定40-41
• 7 let-7c-mimic 及其抑制劑對(duì) Jurkat T 細(xì)胞內(nèi) let-7c 含量的影響41
• 8 let-7c 在 anisomycin 誘導(dǎo) Jurkat T 細(xì)胞凋亡中的作用41-42
• 9 let-7c 上調(diào) P-BCL-XL 和 P-Bim 的表達(dá)42-43
• 討論43-49
• 1 BCL-XL 與 Bim 參與 anisomycin 誘導(dǎo)的 Jurkat T 細(xì)胞凋亡43-44
• 2 轉(zhuǎn)錄因子在 anisomycin 誘導(dǎo) Jurkat T 細(xì)胞凋亡中的作用44-46
• 3 let-7c 誘導(dǎo)凋亡的可能機(jī)制46-49
• 小結(jié)49-50
• 參考文獻(xiàn)50-54
• 發(fā)表論文54-55
• 致謝55-56
• 英文縮略詞表56-57

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 吳麗娟,康格非;鋅指蛋白A20及其對(duì)炎癥反應(yīng)的調(diào)控[J];生命的化學(xué);2004年03期

2 孫艷,蘭小鵬;DcR3與免疫系統(tǒng)關(guān)系的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2004年04期

3 ;[J];;年期

4 ;[J];;年期

5 ;[J];;年期

6 ;[J];;年期

7 ;[J];;年期

8 ;[J];;年期

9 ;[J];;年期

10 ;[J];;年期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 王艷紅;Intermedin對(duì)大鼠腎小管上皮細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷保護(hù)作用及機(jī)制的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2013年

2 蔡芳;泛素蛋白酶體介導(dǎo)的蛋白降解在海馬CA1區(qū)突觸可塑性中的作用研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 王進(jìn);miRNAlet-7c在anisomycin誘導(dǎo)JurkatT細(xì)胞凋亡中的作用[D];暨南大學(xué);2013年

2 傅海鋒;anisomycin體內(nèi)抗CT26小鼠結(jié)腸癌效果及其機(jī)制初探[D];暨南大學(xué);2013年

3 施資堅(jiān);HDAC抑制劑SAHA對(duì)JurkatT細(xì)胞和小鼠淋巴細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡的影響[D];暨南大學(xué);2012年

4 李璐;桂木凝集素對(duì)BmDC分化成熟及對(duì)EL-4、JurkatT細(xì)胞增殖的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

5 董永超;環(huán)孢素A對(duì)膀胱癌細(xì)胞系BIU-87FasL表達(dá)的調(diào)節(jié)及免疫學(xué)作用[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2002年

  本文關(guān)鍵詞：miRNAlet-7c在anisomycin誘導(dǎo)JurkatT細(xì)胞凋亡中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：367857