目的探討肺炎支原體（Mycoplasma pneumoniae,Mp）脂質相關膜蛋白（lipid-associated membrane protein,LAMPs）對人單核細胞表達血紅素氧合酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）的影響,并探討可能的調控機制。方法體外培養(yǎng)THP-1細胞,用不同濃度的LAMPs作用后,分別采用realtime-PCR和Western blot檢測HO-1mRNA和蛋白的表達。同時采用不同濃度的放線菌素D（ActD）和放線菌酮（CHX）預處理細胞,觀察其對HO-1表達的影響,以證實HO-1的表達是否通過轉錄和翻譯水平;提取LAMPs作用前后的核蛋白,凝膠遷移率實驗檢測Nrf2的核轉位、Western blot檢測Akt的磷酸化情況;同時采用PI3K抑制劑LY294002處理細胞,觀察其對LAMPs誘導Nrf2核轉位及HO-1表達的影響;最后采用siRNA干擾Nrf2表達,以證實Nrf2是否參與調控HO-1表達。結果 （1）0⁵μg/mL LAMPs能以劑量依賴性方式誘導THP-1表達HO-1mRNA和蛋白;（2）5μg/... 

【文章來源】：中國人獸共患病學報. 2015,31(04)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

圖１不同濃度ＬＡＭＰｓ對ＬＤＨ漏出的影響Ｆｉｇ．１ＥｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｒｅｌｅａｓｅｏｆＬＤＨｂｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ

ＴＨＰ－１細胞ＨＯ－１ｍＲＮＡ表達的影響Ｆｉｇ．２ＥｆｆｅｃｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｉｍｅｓａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｎＨＯ－１ｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＴＨＰ－１ｃｅｌｌｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＬＡＭＰｓ２．３ＬＡＭＰｓ誘導ＴＨＰ－１細胞表達ＨＯ－１蛋白Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ顯示，不同濃度ＬＡＭＰｓ作用ＴＨＰ－１細胞１６ｈ后，可明顯誘導ＨＯ－１蛋白表達，其含量與ＬＡＭＰｓ的濃度呈一定的劑量依賴性（圖３）。圖３不同濃度ＬＡＭＰｓ對ＨＯ－１蛋白表達的影響Ｆｉｇ．３ＩｍｐａｃｔｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＯ－１ｐｒｏｔｅｉｎｂｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＬＡＭＰｓ２．４ＬＡＭＰｓ經持續(xù)的轉錄和翻譯誘導ＨＯ－１表達ＴＨＰ－１細胞經不同濃度的放線菌素（ＡｃｔＤ，轉錄抑制劑）和放線菌酮（ＣＨＸ，翻譯水平抑制劑）作用后，可顯著抑制ＬＡＭＰｓ誘導ＴＨＰ－１細胞表達ＨＯ－１（圖４Ａ、Ｂ）。２．５ＬＡＭＰｓ誘導ＴＨＰ－１細胞表達與ＰＩ３Ｋ有關ＬＡＭＰｓ作用１５ｍｉｎ后Ａｋｔ磷酸化到達高峰，隨后隨之降低。而總Ａｋｔ在所有處理組中保持恒定（圖５Ａ）。此外，采用ＰＩ３Ｋ抑制劑ＬＹ２９４００２預處理ＴＨＰ－１細胞后，可顯著降低ＬＡＭＰｓ誘導ＨＯ－１的表達（圖５Ｂ）。圖４放線菌素Ｄ和放線菌酮對ＴＨＰ－１細胞ＨＯ－１表達的影響Ｆｉｇ．４ＥｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＯ－１ｐｒｏｔｅｉｎｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＡｃ

４期劉艷等：肺炎支原體ＬＡＭＰｓ經ＰＩ３Ｋ／Ｎｒｆ２誘導人單核細胞表達ＨＯ－１圖５ＬＡＭＰｓ對ＴＨＰ－１細胞Ａｋｔ磷酸化的影響Ｆｉｇ．５ＥｆｆｅｃｔｏｆＡｋｔｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｉｎＴＨＰ－１ｃｅｌｌｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＬＡＭＰｓ２．６ＬＡＭＰｓ增強ＴＨＰ－１細胞Ｎｒｆ２ＤＮＡ結合活性ＬＡＭＰｓ處理３０ｍｉｎ尚不能檢測出Ｎｒｆ２ＤＮＡ結合活性的變化，６０ｍｉｎ后開始增強，１２０ｍｉｎ后達到高峰。未標記Ｎｒｆ２探針可使ＤＮＡ－蛋白結合形成的滯后條帶消失，而ＮＦ－κＢ探針對其無明顯影響。此外，采用ＰＩ３Ｋ抑制劑ＬＹ２９４００２處理后，Ｎｒｆ２ＤＮＡ結合活性顯著降低。見圖６。２．７干擾Ｎｒｆ２表達抑制ＬＡＭＰｓ誘導ＴＨＰ－１細胞表達ＨＯ－１采用ｓｉＲＮＡ干擾Ｎｒｆ２表達后，再用ＬＡＭＰｓ刺激ＴＨＰ－１細胞１６ｈ，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ結果顯示，ＨＯ－１的表達顯著降低（圖７）。圖６ＬＡＭＰｓ經ＰＩ３Ｋ增強Ｎｒｆ２ＤＮＡ結合活性Ｆｉｇ．６ＬＡＭＰｓｃｏｕｌｄｒａｉｓｅｔｈｅＤＮＡ－ｂｉｎｄｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＮｒｆ２ｖｉａＰＩ３Ｋｐａｔｈｗａｙｓ圖７ｓｉＲＮＡ干擾Ｎｒｆ２表達后對ＨＯ－１表達的影響Ｆｉｇ．７ＥｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＯ－１ｐｒｏｔｅｉｎａｆｔｅｒｓｉｌｅｎｃｉｎｇｏｆＮｒｆ２ｂｙｓｉＲＮＡ３討論機體感染支原體后，單核巨噬細胞通過其表面的ＴＬＲ識別，并經ＭｙＤ８８／ＴＲＡＦ６／ＮＦ－κＢ信號通路誘

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3450241