乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）是一種閉合環(huán)狀DNA，能夠引起以淋巴單核細(xì)胞浸潤和枯否細(xì)胞過度增生為主要特征的急慢性肝炎。具有免疫功能的成年人的HBV感染常常導(dǎo)致自限性的、短暫的肝損傷和病毒清除。只有很少比例的感染者（5％～10％）形成與病毒持續(xù)感染相關(guān)的慢性肝炎。然而，當(dāng)新生兒感染時，超過90％的感染者將轉(zhuǎn)成持續(xù)感染者，并形成不同程度的肝臟損傷。 DNA免疫是指將含有編碼某種特異抗原的外源基因及其必要表達調(diào)控元件的真核表達質(zhì)粒直接導(dǎo)入機體內(nèi)，以誘導(dǎo)機體表達編碼序列的蛋白，并經(jīng)體內(nèi)抗原呈遞細(xì)胞（APC）處理，刺激機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生保護性免疫應(yīng)答，包括特異性CTL應(yīng)答及特異抗體的產(chǎn)生等等。因此DNA疫苗被認(rèn)為是一種極具發(fā)展?jié)摿Φ牡谌呙�，在許多疾病的治療和預(yù)防方面顯示出廣泛的應(yīng)用前景。 HBV形成慢性感染的主要機制在于感染者不能產(chǎn)生強有力的細(xì)胞免疫應(yīng)答以清除病毒。慢性HBV感染者體內(nèi)雖然存在HBV抗原特異性T淋巴細(xì)胞，但對HBV抗原的反應(yīng)性較低。與亞單位重組疫苗相比，DNA介導(dǎo)的免疫反應(yīng)更能有效地激發(fā)機體對乙型肝炎表面抗原的免疫反應(yīng)，有效誘導(dǎo)細(xì)胞免疫... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：143 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

PreSZ一S目的基因片段的擴增Figure4AmPlificationofPreSZ一5tetgene

3.3重組質(zhì)粒pOD八兄占?心的DNA序列測定結(jié)果真核表達質(zhì)粒pcD入%S2一S的D入只序列測定以T7引物及SP6引物雙向測序，測序結(jié)果表明，其序列與質(zhì)粒圖譜(pBR322HBV/adr)一致，圖7示T7引物部

3.4.2重組RBsAg基因在培養(yǎng)細(xì)胞中的定量表達為了確定重組刀&月g基因在培養(yǎng)細(xì)胞中的傳代表達情況，將該載體電穿孔法轉(zhuǎn)染7721細(xì)胞并用以18篩選，然后進行免疫組化及認(rèn)范sternblotting檢測其表達情況。結(jié)果見圖9，圖10l:7721eellh，犯strans丘ctedwithPcl〕蒯i貸一S2:7721transfeetedwlthPcl)蒯3.0圖91丸注〕刪52.5在7721細(xì)胞系中的表達FlgtiregTheexPressionofPcD入月S2一Sm772leelline33KDl:7721eellllneZ:7721trans眾冷tedwlthPcl〕漢刁3刀3:7721eelllinestransfeetedwithPcl〕州心一S4:10pgHBS刁g圖10兩邵叮e」。TheeXPreSSIwestemblot檢測月男3月g的表達onofP‘J〕刪月嘆2目S山tectedbyusingwesternblot結(jié)果顯示月百占月g蛋白在篩選后的7721細(xì)胞株傳代過程中可高效表達。分泌的顆粒用抗甲HBS抗體來確認(rèn)(圖10)，以上結(jié)果都表明:構(gòu)建的這種載體適合于作刀瓦」免疫。4正常BALB’/c小鼠的刀況刁免疫及抗.nBs的測定結(jié)果

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3450215