本文關鍵詞：MSCs的標記跟蹤及其移植后對大鼠失神經(jīng)骨折病理性骨痂塑形影響的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：研究大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)的體外分離培養(yǎng)；觀察Brdu、 DAPI以及Hoechst33342體外染色的合適時間和最佳劑量,比較三種方法的優(yōu)缺點,同時利用細胞標記技術探討大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞移植對失神經(jīng)骨折愈合中骨痂改變的影響。 方法：骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)取自SD雄性大鼠(重量80g)的股骨和脛骨,然后采用貼壁分離培養(yǎng)法對BMSCs進行分離培養(yǎng),當BMSCs培養(yǎng)至第三代時,采用流式細胞儀對其表面抗原(CD34, CD44, CD45)進行測定；同時分別用Brdu、 DAPI以及Hoechst33342對BMSCs進行染色標記,Brdu標記效果用免疫細胞化學方法檢測,DAPI和Hoechst33342的標記率用熒光顯微鏡觀測,最后用MTT檢測BMSCs的細胞增值率,觀察三種不同方法體外染色的合適時間和最佳劑量,同時比較其優(yōu)缺點。上述實驗完成后,選取3月齡雄性SD大鼠48只隨機分為6組(n=8),A組為左脛骨骨折組,B組為T10脊髓橫斷+左脛骨骨折組,C組為T10脊髓橫斷+左脛骨骨折+自體骨髓間充質(zhì)干細胞移植組,D組為左脛骨骨折+DMEM組,E組為T10脊髓橫斷+左脛骨骨折(?)DMEM組,F組為左脛骨骨折+自體骨髓間充質(zhì)干細胞移植組。術前15天取大鼠MSCS,采用Brdu標記,C、F組模型建立2天后將標記好的細胞以局部注射的方法移植到骨折斷端。術后對B、C、E組動物進行TARLOR評分；各組動物于術后1、2、3、4周拍攝左脛骨DR并檢測、計算骨痂最大橫截面。 結(jié)果：流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)BMSCs表達CD44陽性,CD34和CD45陰性；BMSCs染色前后其表面標志物表達無明顯統(tǒng)計學差異(p0.05)；Brdu染色標記的BMSCs最佳濃度和時間是10μmol/L48hours; DAPI染色標記BMSCs的最佳濃度和時間是20μg/ml、30min; Hoechst33342染色標記BMSCs的最佳濃度和時間是5μg/ml、1h。動物實驗：術后B、C、E組TARLOR評分均達到實驗要求；Brdu標記的BMSCs在移植后第3周仍然可見熒光標記。術后1、2、3、4周各脛骨骨痂寬度：術后第1、2、3周,B、C、E組骨痂寬度較其余組有統(tǒng)計學意義(P0.05),術后第4周,C組骨痂寬度較B、E組下降,但B、C、E組較其他組仍有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 結(jié)論：采用粘附貼壁分離培養(yǎng)法能夠有效的獲取高純度的BMSCs;運用Brdu、 DAPI以及Hoechst33342三種方法標記BMSCs效果良好,方法可靠、合理,為研究BMSCs體內(nèi)追蹤打下了基礎；大鼠脊髓橫斷合并脛骨干骨折后,骨折愈合速度加快,但骨痂的體積和其生物力學成負相關,是一種病理性骨痂；大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞移植(BMSCs)改變了成骨潛能,促進了病理性骨痂向正常骨痂的轉(zhuǎn)變,對失神經(jīng)骨折愈合有積極正向作用。
【關鍵詞】：流式細胞儀 表面標志物 細胞分離 骨髓間充質(zhì)干細胞 失神經(jīng) 骨折愈合
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R683;R329
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-7
• 中英文~.寫對照7-9
• 第一部分 大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)及其體外標記跟蹤的實驗研究9-26
• 引言9-10
• 材料與方法10-15
• 1.1 實驗材料10-11
• 1.2 實驗方法11-15
• 結(jié)果15-20
• 討論20-23
• 參考文獻23-26
• 第二部分 骨髓間充質(zhì)干細胞移植對大鼠失神經(jīng)骨折病理性骨痂塑形影響的實驗研究26-44
• 引言26-27
• 實驗材料與方法27-31
• 1.1 實驗材料27-29
• 1.2 實驗方法29-31
• 結(jié)果31-36
• 討論36-40
• 參考文獻40-44
• 結(jié)論44-45
• 文獻綜述45-54
• 參考文獻51-54
• 讀研期間主要學術成果54-55
• 致謝55

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 法憲恩,王利霞,侯劍峰,張瑞成,王海永,楊辰垣;人骨髓間充質(zhì)干細胞體外培養(yǎng)及生物學特性觀察[J];鄭州大學學報(醫(yī)學版);2005年03期

2 曾建春;樊粵光;劉建仁;曾意榮;易春智;閻亮;;肉蓯蓉含藥血清誘導骨髓間充質(zhì)干細胞向成骨細胞分化的實驗研究[J];中國骨傷;2010年08期

3 段智霞;鄭啟新;郭曉東;袁泉;陳順廣;;骨形成蛋白2活性多肽體外定向誘導骨髓間充質(zhì)干細胞向成骨方向分化的劑量依賴性研究[J];中國修復重建外科雜志;2007年10期

4 牛增志;王樂禹;胡曉芳;汪海儀;歐陽鈞;黃文華;余磊;邱小忠;;NF-κB p65介導的前列腺素E2分泌及DNA結(jié)合抑制因子2蛋白表達在促進大鼠橈骨骨折早期愈合的作用[J];中國修復重建外科雜志;2011年05期

  本文關鍵詞：MSCs的標記跟蹤及其移植后對大鼠失神經(jīng)骨折病理性骨痂塑形影響的實驗研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：343704