大鼠下丘腦腹外側(cè)視前區(qū)和結(jié)節(jié)乳頭體核的直接神經(jīng)纖維投射研究
本文關(guān)鍵詞:大鼠下丘腦腹外側(cè)視前區(qū)和結(jié)節(jié)乳頭體核的直接神經(jīng)纖維投射研究,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
【摘要】:目的 下丘腦腹外側(cè)視前區(qū)(ventrolateral preoptic nucleus,VLPO)與結(jié)節(jié)乳頭體核(tuberomammillary nucleus,TMN)分別是促睡眠中樞和促覺醒調(diào)節(jié)中樞之一。約80%的VLPO神經(jīng)元為γ-氨基丁酸(GABA)能神經(jīng)元和甘丙肽能神經(jīng)元,而TMN是腦中組胺能神經(jīng)元胞體集中聚集的區(qū)域。本實(shí)驗(yàn)采用腦立體定位技術(shù),核團(tuán)內(nèi)微量注射、冰凍切片等方法研究VLPO與TMN之間是否具有雙向調(diào)節(jié)的直接通路。 方法 1.模型建立清潔級成年SD大鼠,雌雄不拘,體重250300g。戊巴比妥鈉(50mg·kg 1)腹腔注射麻醉后,無菌手術(shù)操作暴露顱骨,將兩個不銹鋼引導(dǎo)管(22gauge)插入VLPO(AP:0.36mm;R:1.30mm;H:7.00mm)和TMN(AP:3.96mm;R:1.50mm;H:7.70mm)。注射熒光探針后,逐層縫合,送回動物室,自由飲水進(jìn)食。術(shù)后將大鼠置于記錄室中休息,待麻醉蘇醒后觀察動物行為活動。 2.動物分組將SD大鼠隨機(jī)分為對照組(TMN+ACSFVLPO+ACSF組)與實(shí)驗(yàn)組(TMN+ACSFVLPO+DiO組和TMN+DiOVLPO+ACSF組)。 3.藥物微量注射使用Hamilton微量注射器(針尖直徑26gauge)通過引導(dǎo)管向目的核團(tuán)注射ACSF(對照組)或含熒光探針Fast DiO(激發(fā)波長488nm;發(fā)射波長,499nm)(實(shí)驗(yàn)組)3l,注射速度為1l·min 1,注射完畢滯針3min防止藥液溢出。 4.組織學(xué)鑒定大鼠術(shù)后72h后,行戊巴比妥鈉(50mg·kg 1)腹腔注射麻醉并仰臥位固定于手術(shù)臺上,暴露心臟,從心尖處灌注250ml生理鹽水以及200ml4%多聚甲醛。灌注結(jié)束后完整取下腦組織并4%多聚甲醛固定24h,次日使用30%蔗糖PB溶液脫水至沉底。取各組大鼠的大腦的TMN和VLPO進(jìn)行冰凍切片,片厚2025m,光學(xué)顯微鏡下觀察引導(dǎo)管位置以及藥物注射位點(diǎn),僅對定位準(zhǔn)確的大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)。熒光顯微下觀察Fast DiO標(biāo)記的熒光效果并拍照。 結(jié)果 1.神經(jīng)損傷嚴(yán)重程度評分(neurological severityscore,NSS)采用雙盲法,在ACSF或熒光探針注入核團(tuán)后2h和24h對各組大鼠進(jìn)行NSS評分。麻醉良好的動物在注射過程中沒有發(fā)生抽搐、呼吸紊亂等異常情況。術(shù)后24h所有大鼠評分已基本正常。 2.熒光標(biāo)記結(jié)果 2.1TMN+ACSFVLPO+ACSF組在TMN和VLPO腦區(qū)皆未檢測到綠色熒光標(biāo)記神經(jīng)元。 2.2TMN+ACSFVLPO+DiO組TMN腦區(qū)可見明顯的綠色熒光標(biāo)記神經(jīng)元,熒光均勻存在于細(xì)胞質(zhì)膜中,成像清晰。TMN之外的區(qū)域鮮見綠色熒光標(biāo)記。 2.3TMN+DiOVLPO+ACSF組VLPO腦區(qū)可見明顯的綠色熒光神經(jīng)元,熒光均勻存在于細(xì)胞質(zhì)膜中,神經(jīng)元細(xì)胞的熒光對比度高,容易辨認(rèn),但成像的密度較低。VLPO之外腦區(qū)未見熒光。 結(jié)論 VLPO有神經(jīng)纖維投射至TMN,同時TMN有神經(jīng)纖維直接投射至VLPO腦區(qū),,VLPO核團(tuán)與TMN核團(tuán)存在雙向直接聯(lián)系。
【關(guān)鍵詞】:腹外側(cè)視前區(qū) 結(jié)節(jié)乳頭體核 大鼠 突觸
【學(xué)位授予單位】:安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2014
【分類號】:R338
【目錄】:
- 英文縮略詞5-6
- 中文摘要6-8
- Abstract8-11
- 前言11-15
- 材料與方法15-20
- 結(jié)果20-23
- 討論23-25
- 結(jié)論25-26
- 參考文獻(xiàn)26-30
- 附錄30-31
- 致謝31-32
- 綜述32-47
- 參考文獻(xiàn)40-47
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2 楊s
本文編號:319294
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