目的:為了制備抗體效價高、特異性好,可有效滿足RERG基因（Ras-related and estrogen-regulated growth inhibitor）上蛋白的相關(guān)測定,填補(bǔ)RERG多克隆抗體的研究空白。方法:試驗使用已經(jīng)在實(shí)驗室中克隆的RERG基因序列用于原核表達(dá)載體,構(gòu)建原核表達(dá)載體pET32a-RERG;隨后進(jìn)行RERG蛋白的原核表達(dá);完成RERG蛋白的純化以及大白兔RERG多克隆抗體的制備與純化。結(jié)果:通過Western-blot鑒定發(fā)現(xiàn)RERG的目的條帶單一;使用ELISA檢測純化后的抗體效價,說明其效價達(dá)到合格抗體標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)論:試驗制作的RERG抗體效價高、特異性好,可有效滿足RERG蛋白的相關(guān)測定,填補(bǔ)了RERG的多克隆抗體的研究空白。 

【文章來源】：黑龍江醫(yī)藥科學(xué). 2019,42(05)

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

HIs－ＲEＲG蛋白純化結(jié)果1．誘導(dǎo)前樣品;2．誘導(dǎo)后的樣品;3．超聲后上清;4．超聲后沉淀;M．marker

時，添加異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)對重組肌抑素表達(dá)進(jìn)行誘導(dǎo)，同時做陰性對照:pEGX－T4－1和未加IPTG的BL21－pEGX－ＲEＲG。收集細(xì)胞，離心，SDS－PAGE檢測。3．2融合蛋白ＲEＲG表達(dá)及純化將各組份樣品進(jìn)行SDS－PAGE分析，10%SDS－PAGE150V70min電泳顯示在預(yù)期大小位置出現(xiàn)明顯誘生條帶，與預(yù)期大小48ku一致，初步表明融合蛋白ＲEＲG得到了表達(dá)，表達(dá)形式為包涵體，見圖2。采用鎳瓊脂糖親和層析方法對目的蛋白進(jìn)行純化后，得到單一的目的條帶，大小為48ku，見圖3，與目的蛋白大小一致，表明目的蛋白成功得到純化。圖3融合蛋白ＲEＲG的表達(dá)M．蛋白Marker;1．XGBNWXＲHis－ＲEＲG蛋白質(zhì)圖4融合蛋白ＲEＲG的Western－blot鑒定M．蛋白Marker;1．融合蛋白ＲEＲG·2·黑龍江醫(yī)藥科學(xué)2019年10月第42卷第5期

離心，SDS－PAGE檢測。3．2融合蛋白ＲEＲG表達(dá)及純化將各組份樣品進(jìn)行SDS－PAGE分析，10%SDS－PAGE150V70min電泳顯示在預(yù)期大小位置出現(xiàn)明顯誘生條帶，與預(yù)期大小48ku一致，初步表明融合蛋白ＲEＲG得到了表達(dá)，表達(dá)形式為包涵體，見圖2。采用鎳瓊脂糖親和層析方法對目的蛋白進(jìn)行純化后，得到單一的目的條帶，大小為48ku，見圖3，與目的蛋白大小一致，表明目的蛋白成功得到純化。圖3融合蛋白ＲEＲG的表達(dá)M．蛋白Marker;1．XGBNWXＲHis－ＲEＲG蛋白質(zhì)圖4融合蛋白ＲEＲG的Western－blot鑒定M．蛋白Marker;1．融合蛋白ＲEＲG·2·黑龍江醫(yī)藥科學(xué)2019年10月第42卷第5期

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]沙門氏菌絲氨酸蛋白酶YihE的原核表達(dá)及多克隆抗體制備[J]. 張志強(qiáng),吳同壘,李永慧,王志仙,李蘊(yùn)玉,張召興,賈青輝,李佩國.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2017(19)
[2]GST-CBX2-1融合蛋白表達(dá)載體的構(gòu)建及其在原核細(xì)胞中的表達(dá)[J]. 劉婷雋,洪澤輝,胡安康.  黑龍江醫(yī)藥科學(xué). 2017(03)



本文編號：3137133