畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)是目前最為成功的外源蛋白表達(dá)系統(tǒng)之一。該系統(tǒng)操控簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì),表達(dá)量高,具有翻譯后修飾的能力,不存在原核表達(dá)系統(tǒng)內(nèi)毒素難以去除的問(wèn)題,也不存在哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的病毒和支原體污染問(wèn)題。目前已有多種外源蛋白在該系統(tǒng)中成功表達(dá)。我們利用該系統(tǒng)表達(dá)了幾種重組蛋白。 1.復(fù)合干擾素突變體 根據(jù)畢赤酵母密碼子偏性合成了復(fù)合干擾素突變體基因,構(gòu)建了分泌型酵母表達(dá)載體,線性化后轉(zhuǎn)化GS115。在發(fā)酵罐中進(jìn)行了高密度發(fā)酵,表達(dá)量為112mg/L,發(fā)酵上清經(jīng)超濾、三步層析純化獲得純度大于98%的重組蛋白,比活性大于6×10⁸IU/mg。 2.人干擾素-β1a 合成了人IFN-β1a基因,構(gòu)建了酵母表達(dá)載體,線性化后轉(zhuǎn)化GS115。甲醇誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化子,細(xì)胞病變抑制法測(cè)定誘導(dǎo)上清的抗病毒活性,培養(yǎng)上清中的表達(dá)量為2×10⁵IU/mL。 3.組織型纖溶酶原激活劑衍生物rPAm 構(gòu)建了rPAm的酵母表達(dá)載體,并在畢赤酵母分泌表達(dá),培養(yǎng)上清中的表達(dá)量為1.6mg/L。 4.Thr6-PDGF-BB 構(gòu)建了Thr... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍軍事科學(xué)院北京市

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發(fā)酵上清的SDS一APGE結(jié)果

圖1.8發(fā)酵上清的SDS一APGE結(jié)果1誘導(dǎo)前的培養(yǎng)上清2，3誘導(dǎo)后的培養(yǎng)上清M低分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白圖1.9三步層析純化的SDS~PAGE結(jié)果1.SPXL洗脫峰經(jīng)DTT處理PhenylS‘SuPerdexPeharoes洗脫峰經(jīng)DTT處理75洗脫峰經(jīng)DTI，處理4.低分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白5.PhenvlSPehoares洗脫峰經(jīng)DTT處理6.SPuedrex75洗脫峰經(jīng)DTT處理.25純化產(chǎn)物的理化性質(zhì)分析利用PE公司的491蛋白序列分析儀，采用自動(dòng)Edmna降解法對(duì)畢赤酵母分泌表達(dá)的復(fù)合干擾素突變體的N端巧個(gè)氨基酸進(jìn)行序列測(cè)定的結(jié)果為:CDLPQ一THLsG-NRRAL，與理論一致(圖1.10)。說(shuō)明酵母細(xì)胞對(duì)重組蛋白的N端剪切正確，該重組蛋白可用于臨床用藥。

復(fù)合干擾素突變體質(zhì)譜測(cè)定圖譜

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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