腫瘤壞死因子家族在維持免疫平衡,控制細(xì)胞死亡和炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著重要的作用。這些細(xì)胞因子被腫瘤壞死因子受體家族的蛋白識(shí)別,激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,形成死亡誘導(dǎo)的信號(hào)復(fù)合體（death inducing signalling complex, DISK）,促進(jìn)細(xì)胞死亡。研究最為廣泛的腫瘤壞死因子受體包括TNFR1/2, FAS和DR4/DR5,它們分別識(shí)別TNFa, FAS配體和TRAIL。死亡結(jié)構(gòu)域所介導(dǎo)的自體或異體寡聚化對(duì)死亡誘導(dǎo)信號(hào)復(fù)合體的形成至關(guān)重要。它包括死亡受體自身或與其下游的接頭蛋白TRADD或FADD之間的死亡結(jié)構(gòu)域相互作用而形成寡聚復(fù)合體。NleB是腸致病性大腸桿菌（enteropathogenic Escherichia coli, EPEC）三型分泌系統(tǒng)的效應(yīng)蛋白,在前人的研究中被認(rèn)為具有抑制NF-κB信號(hào)通路的作用。本論文從此生物學(xué)現(xiàn)象入手,發(fā)現(xiàn)無(wú)論在細(xì)胞轉(zhuǎn)染還是細(xì)菌感染水平,NleB都能非常有效地抑制腫瘤壞死因子（TNFa）激活的NF-κB炎癥反應(yīng),而對(duì)白細(xì)胞介素（IL-1p）激活的NF-κB信號(hào)通路毫無(wú)影響。我們綜合利用酵母雙雜交,免疫共沉淀等生化手段,找到了NleB... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：109 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
第一章 引言
    1.1 腸致病性大腸桿菌和腸出血性大腸桿菌的研究進(jìn)展
        1.1.1 病原性大腸桿菌概述
        1.1.2 腸致病性大腸桿菌和腸出血性大腸桿菌的研究進(jìn)展
    1.2 三型分泌系統(tǒng)和效應(yīng)蛋白
    1.3 腸致病性大腸桿菌的非LEE效應(yīng)蛋白
    1.4 病原菌和宿主細(xì)胞之間的相互作用
        1.4.1 細(xì)菌效應(yīng)蛋白對(duì)宿主細(xì)胞骨架系統(tǒng)的影響
        1.4.2 細(xì)菌效應(yīng)蛋白對(duì)宿主泛素化系統(tǒng)的影響
        1.4.3 細(xì)菌效應(yīng)蛋白對(duì)宿主NF-κB和MAPK信號(hào)通路的影響
    1.5 死亡受體信號(hào)通路
        1.5.1 死亡受體家族的成員
        1.5.2 死亡受體信號(hào)的傳導(dǎo)
第二章 材料方法
    2.1 分子生物學(xué)操作
        2.1.1 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
        2.1.2 限制性內(nèi)切酶酶切反應(yīng)
        2.1.3 瓊脂糖凝膠電泳
        2.1.4 連接和轉(zhuǎn)化
        2.1.5 定點(diǎn)突變
        2.1.6 質(zhì)粒大提
        2.1.7 本論文中構(gòu)建的基因和質(zhì)�？偨Y(jié)
    2.2 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染
        2.2.1 細(xì)胞來(lái)源以及培養(yǎng)條件
        2.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.2.3 穩(wěn)定細(xì)胞系的建立
        2.2.4 SiRNA轉(zhuǎn)染
    2.3 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)
    2.4 免疫印跡、免疫共沉淀
        2.4.1 常用試劑配方
        2.4.2 免疫印跡
        2.4.3 免疫共沉淀
        2.4.4 本論文中使用的抗體總結(jié)
    2.5 p65蛋白的免疫熒光染色
    2.6 原核表達(dá)純化重組蛋白
        2.6.1 常用試劑配方
        2.6.2 重組蛋白His-Sumo-NleB及其突變體的純化
        2.6.3 重組蛋白GST-TRADD DD以及GST-FADD的純化
    2.7 酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)
        2.7.1 實(shí)驗(yàn)中用到的培養(yǎng)基
        2.7.2 LiAc-介導(dǎo)的酵母轉(zhuǎn)化
        2.7.3 酵母雙雜交
        2.7.4 酵母DNA的提取
    2.8 腸致病性大腸桿菌的實(shí)驗(yàn)操作
        2.8.1 腸致病性大腸桿菌的培養(yǎng)
        2.8.2 腸致病性大腸桿菌的活化和感染
    2.9 細(xì)胞死亡的檢測(cè)
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
    3.1 NleB抑制宿主細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路的激活具有選擇性
    3.2 NleB抑制多種TNF受體復(fù)合物下游的信號(hào)通路
    3.3 TRADD是NleB的結(jié)合蛋白
    3.4 NleB抑制TRADD DD寡聚進(jìn)而抑制TNF受體復(fù)合物的組裝
        3.4.1 NleB抑制TRADD過(guò)表達(dá)所激活的NF-κB和細(xì)胞死亡信號(hào)通路
        3.4.2 NleB抑制TRADD過(guò)表達(dá)所引起的自體或異體寡聚
        3.4.3 NleB抑制刺激條件下TNF受體復(fù)合物的組裝
    3.5 極少量NleB即可以抑制TRADD DD自身寡聚以及與其他死亡受體結(jié)構(gòu)域之間的結(jié)合
    3.6 NleB是一個(gè)細(xì)菌效應(yīng)蛋白家族的成員
    3.7 NleB在體外是一個(gè)N-乙酰葡萄糖胺單糖轉(zhuǎn)移酶
    3.8 NleB在體內(nèi)是一個(gè)N-乙酰葡萄糖胺單糖轉(zhuǎn)移酶
    3.9 NleB不是一個(gè)O-連接的N-乙酰葡萄糖胺單糖轉(zhuǎn)移酶
    3.10 TRADD DD中第235位的精氨酸是NleB的修飾位點(diǎn)
    3.11 TRADD DD中第235位的精氨酸對(duì)TRADD功能很重要
    3.12 NleB能修飾多個(gè)含保守修飾位點(diǎn)的死亡受體或其接頭蛋白
    3.13 NleB抑制多種死亡受體介導(dǎo)的細(xì)胞死亡
    3.14 細(xì)菌感染條件下NleB對(duì)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白糖基化的分析
    3.15 細(xì)菌感染條件下NleB對(duì)死亡受體信號(hào)通路的抑制作用
        3.15.1 細(xì)菌感染條件下NleB對(duì)TNF受體信號(hào)通路的抑制作用
        3.15.2 細(xì)菌感染條件下NleB對(duì)其他受體信號(hào)通路的抑制作用
    3.16 NleB糖基轉(zhuǎn)移酶活性在動(dòng)物感染模型中的研究
        3.16.1 鼠類檸檬酸桿菌中NleBc的生物學(xué)活性
        3.16.2 小鼠感染腸道定殖模型中NleB家族酶活功能的研究
第四章 討論與展望
    4.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)論
    4.2 討論和展望
        4.2.1 關(guān)于精氨酸修飾的討論
        4.2.2 關(guān)于課題意義的討論和展望
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3036140