宿主細(xì)胞進(jìn)化出了許多非特異性防御機(jī)制,其在受到外界病原體攻擊后會立刻啟動并發(fā)揮作用。病毒感染后,宿主防御系統(tǒng)被激活,轉(zhuǎn)錄激活一系列效應(yīng)因子參與細(xì)胞凋亡,炎癥反應(yīng),細(xì)胞增殖與DNA損傷修復(fù),抑制病毒復(fù)制同時維持自身遺傳穩(wěn)定性。最近十幾年研究中發(fā)現(xiàn),在病毒感染的真核宿主細(xì)胞中產(chǎn)生了許多病毒來源的小RNA分子,這些RNA分子與宿主內(nèi)源的小干擾RNA(siRNAs)、微小RNA (miRNAs)以及Piwi結(jié)合RNAs (piRNAs)具有相似的特性,因此能夠誘導(dǎo)RNA沉默途徑從而降解病毒相關(guān)mRNA產(chǎn)生特異的抗病毒免疫。為了對抗宿主的防御系統(tǒng),病毒也進(jìn)化出多種機(jī)制來抑制這些抗病毒信號事件,從而維持自身的穩(wěn)定感染。病毒的基因組較小,一般編碼能力有限,特別是RNA病毒和較小的DNA病毒如乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus, HBV)。病毒編碼的蛋白分為結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白,病毒結(jié)構(gòu)蛋白存在于病毒粒體之中,參與病毒粒體裝配、成熟、入侵以及病毒復(fù)制過程,而非結(jié)構(gòu)蛋白一般參與病毒基因組復(fù)制的調(diào)控以及免疫致病過程,常常被稱為調(diào)控蛋白(regulatory proteins)。過去對病毒對抗宿主細(xì)胞防御反應(yīng)的研究多數(shù)圍繞病毒編碼的調(diào)控蛋白,而對病毒結(jié)構(gòu)蛋白關(guān)注較少。病毒衣殼蛋白(capsid)為病毒基因組結(jié)合蛋白,是所有病毒共有的結(jié)構(gòu)蛋白。本研究選擇兩種主要醫(yī)學(xué)病毒的衣殼蛋白作為研究對象,即HBV的核心蛋白(core)和嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒(SARS coronavirus, SARS-CoV)的N蛋白,分別發(fā)現(xiàn)HBV核心蛋白的前蛋白(precore)及其剪切體能夠抑制病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和細(xì)胞內(nèi)p53穩(wěn)定性,SARS-CoV的N蛋白能夠抑制宿主細(xì)胞的RNA沉默途徑,保護(hù)病毒RNA不被降解。這些機(jī)制的發(fā)現(xiàn)揭示了病毒結(jié)構(gòu)蛋白或其前體分子在病毒對抗宿主細(xì)胞抗病毒反應(yīng)和致病過程中的重要性,為深入了解相關(guān)病毒復(fù)制與致病機(jī)制提供了新的知識。1.HBV病毒編碼的precore蛋白及其剪切體抑制細(xì)胞凋亡與p53穩(wěn)定性HBV感染能夠引起急性或慢性肝炎,并逐步肝硬化,是肝癌發(fā)生的重要誘因。p53功能失活是肝癌發(fā)生過程中主要的事件,在本研究中,我們擬研究HBV核心蛋白與其前蛋白precore在HBV抵御細(xì)胞抗病毒反應(yīng)與致病中的作用。利用酵母雙雜交系統(tǒng)和多種生化和細(xì)胞生物學(xué)方法證明HBV precore與Numb相互作用,其相互作用能夠影響p53的轉(zhuǎn)錄活性,促進(jìn)細(xì)胞增長,抑制p53依賴的細(xì)胞凋亡。另外,穩(wěn)定表達(dá)precore及其剪切體的HepG2細(xì)胞系中p53蛋白的穩(wěn)定性被下調(diào)。最后,我們揭示了precore調(diào)控p53活性與肝細(xì)胞生長的機(jī)制：precore蛋白通過與Numb相互作用,增強(qiáng)MDM2與p53結(jié)合并將其泛素化,促進(jìn)p53進(jìn)入蛋白酶體降解途徑,從而下調(diào)了p53在細(xì)胞中的穩(wěn)定性。2.SARS冠狀病毒編碼的核衣殼蛋白N抑制RNA沉默途徑植物病毒與無脊椎動物病毒通常需要編碼一種蛋白來抵御宿主的基于RNA沉默的抗病毒機(jī)制,許多植物病毒編碼的RNA沉默抑制因子已經(jīng)被報道,但是哺乳動物病毒編碼的該功能蛋白卻研究的很少。本研究中發(fā)現(xiàn)SARS冠狀病毒編碼的核衣殼蛋白N可能是一種潛在的RNA沉默抑制因子。N蛋白能夠抑制shRNA誘導(dǎo)的RNA沉默,同時對siRNA誘導(dǎo)的RNA沉默也有抑制作用,N蛋白很可能是通過與雙鏈RNA結(jié)合阻止Dicer對雙鏈RNA的剪切,進(jìn)而抑制siRNA形成發(fā)揮沉默抑制子的功能。對于擁有30 Kb基因組的SARS冠狀病毒而言,這種抵抗宿主RNA沉默途徑的策略很可能對于其復(fù)制轉(zhuǎn)錄以及保護(hù)基因組RONA是至關(guān)重要的。
【學(xué)位單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2014
【中圖分類】：R373
【部分圖文】：

逑（二）在體內(nèi)研究ｐｒｅｃｏｒｅ蛋白對Ｎｕｍｂ，ｐ５３，邋ＭＤＭ２相互作用的影響。逡逑如圖４．６圖Ａ巧示，在ＷＣＬ檢測Ｉｎｐｕｔ樣品的實(shí)驗(yàn)中，隨著ｐｒｅｃｏｒｅ蛋白表逡逑達(dá)量增加，ｐ５３蛋白表達(dá)水平減少，Ｎｕｍｂ與ＭＤＭ２蛋白表達(dá)量沒有變化，這與逡逑結(jié)果４．３穩(wěn)定表達(dá)ｐｒｅｃｏｒｅ及其剪切體的細(xì)胞系中得到的結(jié)果一敢即ｐｒｅｃｏｒｅ蛋逡逑白下調(diào)ｐ５３的蛋白表達(dá)水平，但不影響Ｎｕｍｂ的蛋白表達(dá)水平。在免疫共沉淀的逡逑實(shí)驗(yàn)中，隨著ｐｒｅｃｏｒｅ蛋白水平X椉櫻危酰恚庥耄星珊停穡潁澹悖錚潁宓南嗷プ饔眉躒�，辶x險庥脛霸諤逋庀嗷プ饔梅治鮒械玫降慕峁恢?jǐn)n牽穡擔(dān)秤耄停模停駁南嗷プ饔緬義弦渤氏種鸞ゼ躒醯那魘疲飧黿峁此樸胩逋獾慕峁�，晤U欠治觶捎冢穡潁澹悖錚潁邋義系鞍啄芄揮跋歟穡擔(dān)車鞍椎謀澩鎪劍庠謔笛櫓幸駁牡攪頌逑鄭虼嗽誆患擁鞍族義廈柑逡種萍戀那榭魷卵芯肯赴冢穡擔(dān)秤耄停模停駁南嗷プ饔貌⒉豢煽�，因此晤U羌渝義先氳鞍酌柑逡種萍烈種疲穡擔(dān)吃諳赴械姆核鼗到饌綺

本文編號：2826599