【摘要】：背景與目的：多種病毒可以感染卵巢,影響卵巢功能。而且一些病毒如乙型肝炎病毒(HBV)、及艾滋病毒(HIV)等可能通過感染卵細胞和胚胎而直接傳播給后代。然而卵巢、卵細胞及胚胎的天然抗病毒機制,尚未研究。本論文旨在分析模式識別受體介導的卵巢及早期胚胎的天然抗病毒反應。 材料與方法：免疫組化和Western blotting方法用于蛋白的定位與定量分析。Real-time RT-PCR用于分析mRNA表達水平分析。ELISA方法用來分析細胞因子的濃度。分離小鼠顆粒細胞、卵細胞、卵黃囊細胞,通過轉染Poly(I:C)模擬病毒感染,分析細胞的天然抗病毒反應。 結果：病毒RNA模式識別受體TLR3、MDA5、RIG-1在卵巢顆粒細胞與間質細胞中表達。Poly(I:C)可以誘導顆粒細胞的天然抗病毒反應,包括上調TNF-α、IL-6、 IFN-α、IFN-β等炎癥因子,以及抗病毒蛋白ISG15、OAS1、Mx1的表達。抑制TLR3、MDA5、RIG-I中任一個受體表達顯著地降低了上述反應。顆粒細胞的抗病毒反應干擾雌激素的合成。而且MDA5、RIG-I表達于卵母細胞及成熟的卵細胞,Poly(I:C)誘導卵細胞抗病毒蛋白ISG15、OAS1表達上調。在胚胎發(fā)育早期,TLR3、MDA5、RIG-I受體特異表達于卵黃囊細胞,Poly(I:C)可誘導卵黃囊細胞產生天然抗病毒反應。Poly(I:C)誘導的天然抗病毒反應需要TLR3、MDA5、RIG-I受體介導的核轉錄因子κB(NF-κB)與干擾素調節(jié)因子3(IRF3)的活化。 結論：卵巢顆粒細胞與卵細胞表達TLR3、MDA5、RIG-I受體,并可介導天然抗病毒反應,卵巢的抗病毒反應干擾其自身的激素分泌功能。在早期胚胎發(fā)育過程,天然抗病毒機制主要存在于卵黃囊中。結果表明,卵巢顆粒細胞、卵細胞及胚胎卵黃囊中具有天然抗病毒活性。
【學位授予單位】：北京協和醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語表
前言
實驗材料
    1.實驗動物
    2.細胞培養(yǎng)相關試劑
    3.分子生物學相關試劑
    4.免疫組化和免疫突光實驗相關試劑
    5.其它試劑
    6.Real time PGR 引物
    7.分子量標準
    8.主要儀器設備及材料
    9.圭要軟件
    10.主要溶液配方
實驗方法
    1.基因敲除小鼠的繁殖及鑒定
    2.小鼠的繁殖、超排處理與交配
    3.組織形態(tài)學觀察
    4.細胞的分離和培養(yǎng)
    5.細胞免疫焚光染色
    6.免疫突光染色檢測NF-kB的轉位
    7.實時定量 PCR (Quantitaitve real time PGR)
    8.Western Blotting 實驗
    9.應用ELISA法定量檢測細胞因子
    10.統計學分析
實驗結果
    第一部分：Poly(I:C)誘導的卵巢抗病毒反應
    第二部分：病毒模式識別受體在卵細胞中的表達與功能
    第三部分：胚胎卵黃囊的抗病毒免疫反應
討論
全文小結
參考文獻
文獻綜述
    參考文獻
發(fā)表文章
致謝

【參考文獻】

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1 ;A winning war against hepatitis B virus infection in China[J];Chinese Medical Journal;2007年24期

本文編號：2827880