發(fā)布時間：2017-04-01 22:13

  本文關鍵詞：TAK1抑制TGF-β1誘導巨噬細胞凋亡的分子機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的： 本課題旨在探討TAK1介導TGF-β1誘導巨噬細胞RAW264.7凋亡中的作用以及相關的分子機制。研究內容包括三個部分：一、觀察TGF-β1在巨噬細胞RAW264.7凋亡中的作用和對TLR4受體表達的影響；二、觀察TAK1在TGF-β1誘導巨噬細胞RAW264.7凋亡中的作用；三、探討TAK1介導TGF-β1誘導巨噬細胞RAW264.7凋亡的相關分子機制。 研究方法與結果： 本課題實驗分三部分進行： 第一部分應用流式細胞術檢測TGF-β1刺激對巨噬細胞RAW264.7凋亡的影響,包括以下兩個實驗： 1、分別用5ng/ml、10ng/ml TGF-β1刺激巨噬細胞12小時,流式細胞儀檢測巨噬細胞RAW264.7凋亡情況,結果顯示TGF-β1具有誘導巨噬細胞RAW264.7凋亡的作用,且這種作用具有劑量依賴性； 2、流式細胞術檢測TGF-β1刺激對巨噬細胞RAW264.7TLR4表達的影響,這部分實驗分組如下：對照組,LPS組、TGF-β1組、LPS與TGF-β1聯(lián)合刺激組、anti-TGF-β1中和抗體組,以及LPS與anti-TGF-β1中和抗體聯(lián)合刺激組,檢測結果顯示,單獨LPS、TGF-β1均能誘導巨噬細胞TLR4表達下降,并且者聯(lián)合刺激時效應增強,LPS與anti-TGF-β1聯(lián)合刺激和LPS單獨刺激時相比,TLR4表達無明顯變化,說明LPS與外源性TGF-β1具有協(xié)同抑制TLR4表達的作用。 第二部分利用電轉染的方法在巨噬細胞RAW264.7中過表達TAKl,流式細胞術檢測TAK1對TGF-β1誘導巨噬細胞凋亡的影響,包括以下兩個實驗： 1、分別電轉染10μg、15μg空質粒CMV、野生型質粒TAK1以及TAK1突變體TAK1K63W,60h后用lOng/ml TGF-β1刺激巨噬細胞30min,流式細胞術檢測巨噬細胞RAW264.7凋亡情況,結果顯示：與空質粒CMV、TAK1突變體TAK1K63W相比,TAK1具有明顯抑制TGF-β1誘導巨噬細胞凋亡的作用,以10μg TAK1抑制凋亡效應最明顯。 2、檢測TAK1在TAB1作用下對TGF-β1誘導巨噬細胞細胞凋亡的影響,實驗分組如下：Empty plasmid組、TAB1組、TAKl組、TAK1與TAB1共轉染組、TAK1K63W組、TAK1K63W與TAB1共轉染組,結果顯示TAK1具有抑制TGF-β1誘導巨噬細胞細胞凋亡的作用,并且在與TAB1共轉染時,TAKl抗凋亡效應進一步增強。 第三部分探討TAK1抑制TGF-β1誘導巨噬細胞凋亡的分子機制,包括以下兩個實驗： 1.TAKl對TGF-β1介導的巨噬細胞分泌TNF-α、IL-10等細胞因子的影響,實驗分組如前,轉染相應質粒入巨噬細胞,60h后,10ng/ml TGF-β1刺激巨噬細胞24小時,ELISA檢測炎性細胞因子TNF-α、IL-10,結果顯示：與對照組相比,TAK1、TAK1與TAB1共轉染組在TGF-β1刺激后TNF-α分泌減少,各轉染組IL-10分泌與對照組相比無明顯差異。 2.檢測TAK1對TGF-β1介導的巨噬細胞凋亡相關分子的影響：實驗分組如前,轉染相應質粒入巨噬細胞,60h后,10ng/ml TGF-β1刺激巨噬細胞,提取蛋白,Western blot檢測巨噬細胞中caspase-3活化情況,結果顯示,對照組在TGF-β1刺激時,caspase-3明顯活化,過表達TAK1后caspase-3活化受抑制。 結論： 1、TGF-β1具有誘導巨噬細胞RAW264.7凋亡的作用,且這種作用呈劑量依賴性；TGF-β1具有抑制巨噬細胞TLR4表達的作用。 2、在巨噬細胞RAW264.7中過表達TAK1能抑制TGF-β1誘導的巨噬細胞凋亡效應,TAB1具有促進TAK1抗凋亡效應的作用。 3、TAKl抑制TGF-β1介導的巨噬細胞的凋亡與TGF-β1刺激巨噬細胞分泌TNF-α相關,與IL-10無明顯相關性；其凋亡信號傳導與抑制caspase-3活化相關。
【關鍵詞】：轉化生長因子-β1 轉化生長因子β1 激活激酶1 RAW264.7 凋亡
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語10-11
• 前言11-14
• 研究現狀、成果11-13
• 研究目的、方法13-14
• 一、TGF-β1刺激對巨噬細胞RAW264.7凋亡的影響14-25
• 1.1 對象和方法14-18
• 1.1.1 實驗材料14-15
• 1.1.2 方法與流程15-17
• 1.1.3 結果分析17-18
• 1.2 結果18-22
• 1.2.1 TGF-β1刺激對巨噬細胞RAW264.7凋亡的影響18-19
• 1.2.2 TGF-β1刺激對巨噬細胞TLR4表達的影響19-22
• 1.3 討論22-24
• 1.4 小結24-25
• 二、TAK1對TGF-β1誘導巨噬細胞凋亡的影響25-37
• 2.1 對象和方法25-28
• 2.1.1 實驗材料25-26
• 2.1.2 方法與流程26-28
• 2.1.6 結果分析28
• 2.2 結果28-34
• 2.2.1 TAK1抑制TGF-β1誘導的巨噬細胞凋亡29-31
• 2.2.2 TAK1對TGF-β1誘導巨噬細胞分泌炎性細胞因子的影響31-34
• 2.3 討論34-36
• 2.4 小結36-37
• 三、TAK1抑制TGF-β1誘導巨噬細胞凋亡的分子機制37-47
• 3.1 對象和方法37-43
• 3.1.1 實驗材料37-40
• 3.1.5 方法與流程40-43
• 3.1.6 結果分析43
• 3.2 結果43-45
• 3.2.1 TAK1對TGF-β1介導的巨噬細胞分泌炎性細胞因子的影響43-44
• 3.2.2 TAK1對TGF-β1介導的巨噬細胞凋亡相關分子的影響44-45
• 3.3 討論45-46
• 3.4 小結46-47
• 結論47-48
• 參考文獻48-53
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明53-54
• 綜述 TAK1與細胞凋亡54-67
• 綜述參考文獻61-67
• 致謝67

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本文編號：281397