本文關(guān)鍵詞：脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)胞（ADSC）調(diào)控變應(yīng)性鼻炎模型鼠T細(xì)胞免疫狀態(tài)的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景 變應(yīng)性鼻炎(allergic rhinitis, AR)是一種呈全球蔓延的鼻腔過敏性疾病,最新根據(jù)變應(yīng)性鼻炎評分(Score for Allergic Rhinitic, SFAR)標(biāo)準(zhǔn)其發(fā)病率為31.6%,嚴(yán)重困擾著人們生活、學(xué)習(xí)和工作。變應(yīng)性鼻炎發(fā)病涉及環(huán)境及遺傳兩個方面,近年提出了Thl/Th2免疫反應(yīng)平衡障礙學(xué)說,即AR的發(fā)病主要是Th2型細(xì)胞免疫反應(yīng)優(yōu)勢,通過介導(dǎo)多種炎癥介質(zhì)及細(xì)胞因子的釋放,而導(dǎo)致一系列鼻過敏癥狀。因此,糾正以Th2型免疫反應(yīng)過度為主而恢復(fù)Th1/Th2細(xì)胞免疫平衡的治療方式成為重要的策略。 T淋巴細(xì)胞來源于骨髓的淋巴樣干細(xì)胞,按免疫效應(yīng)功能可分為輔助性T細(xì)胞(Th)、細(xì)胞毒性T細(xì)胞(Tc/CTL)、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)、抑制性T細(xì)胞(Ts)等。Thl/Th2免疫反應(yīng)失衡的調(diào)節(jié)和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)是目前世界范圍內(nèi)的兩大研究熱點(diǎn)。輔助性T細(xì)胞(Th)主要分為：Th1、Th2和Th17。Th1細(xì)胞主要分泌IL-2、IFN-γ、TNF,參與細(xì)胞免疫及遲發(fā)型超敏反應(yīng)的發(fā)生�？乖禺愋訲h2細(xì)胞在變應(yīng)性免疫反應(yīng)中通過釋放大量的Th2型細(xì)胞因子(IL-4、5、6、10、13等)啟動和維持炎癥,其中IL-4和IL-13,它調(diào)節(jié)抗原特異性IgE的同型轉(zhuǎn)換,IL-5可募集和激活嗜酸性粒細(xì)胞。Thl和Th2型細(xì)胞因子相互拮抗,選擇性抑制Th2反應(yīng)可能對防止變應(yīng)性炎癥至關(guān)重要。Treg細(xì)胞具有調(diào)節(jié)Thl／Th2平衡、抑制T淋巴細(xì)胞增殖和促進(jìn)DC細(xì)胞成熟等作用。Treg細(xì)胞的免疫缺陷是近年來變應(yīng)性疾病研究的重大發(fā)現(xiàn)之一,其中包括AR,已有研究表明變應(yīng)性個體中存在變應(yīng)原特異性Treg細(xì)胞數(shù)量和(或)功能的缺陷,并認(rèn)為可能是AR免疫失衡的重要原因。 間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells, MSCs)屬于中胚層的一類成纖維樣多能干細(xì)胞,在人體骨髓、脂肪、臍帶血等組織中都有其分布,具有自我更新、多向分化和再生修復(fù)實(shí)質(zhì)組織器官的潛能。此外,因其還具有獨(dú)特的低免疫原性和免疫調(diào)節(jié)作用使其成為干細(xì)胞研究領(lǐng)域的一顆新星。MSC可通過誘導(dǎo)細(xì)胞分裂阻滯來抑制T、B和DC細(xì)胞的增殖,還可抑制NK細(xì)胞的增殖和削弱DC細(xì)胞的成熟狀態(tài),以及抗原呈遞。MSC依據(jù)靶器官中炎癥微環(huán)境而實(shí)施有益的免疫調(diào)節(jié),而無論是Th1免疫反應(yīng)偏移還是Th2型免疫反應(yīng)偏移。在變應(yīng)性鼻炎及哮喘等Th2型免疫反應(yīng)優(yōu)勢的變態(tài)反應(yīng)疾病中,MSC可顯著下調(diào)Th2型免疫反應(yīng)而恢復(fù)Th1/Th2細(xì)胞免疫平衡,并可上調(diào)CD4+CD25+Treg細(xì)胞的比例。脂肪組織來源的MSC,即ADSC,與其他來源MSC一樣具有獨(dú)特的非特異性免疫調(diào)節(jié)作用。脂肪組織相比骨髓更豐富,且更易收獲更多量成體干細(xì)胞。 目前,AR治療包括藥物對癥處理及特異性免疫治療,藥物對癥處理僅對發(fā)作期患者起控制病情作用,維持時間短,停藥復(fù)發(fā),特異性免疫治療因治療患者群受變應(yīng)原限制,治療周期長,部分患者依從性差,或半途脫落而導(dǎo)致相當(dāng)一部分患者放棄脫敏治療。因而探尋新的治療方式勢在必行。初步的研究表明,ADSC對Thl／Th2免疫反應(yīng)失衡及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞具有復(fù)雜的調(diào)節(jié)作用。選擇ADSC重新調(diào)整AR患者Thl／Th2細(xì)胞免疫平衡及Treg細(xì)胞治療模式成為一項(xiàng)具有創(chuàng)新性的設(shè)計策略。因此,本研究在構(gòu)建變應(yīng)性鼻炎模型鼠的基礎(chǔ)上探討體外膠原酶消化合并貼壁篩選法分離培養(yǎng)的小鼠ADSC對模型鼠輔助性T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制。本研究的開展有可能將為今后AR臨床治療開辟一個嶄新的領(lǐng)域奠定基礎(chǔ)。 研究目的 探討體外分離培養(yǎng)小鼠ADSC,并在構(gòu)建變應(yīng)性鼻炎模型鼠的基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討ADSC對模型鼠輔助性T細(xì)胞、Treg細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制。 材料及方法 1實(shí)驗(yàn)材料及動物 胰蛋白酶、DMEM/F12、胎牛血清、青-鏈霉素雙抗、二甲亞砜(DMSO)、膠原酶Ⅰ型、間充質(zhì)干細(xì)胞成脂/成骨/成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基、Balb/c小鼠、卵清蛋白Ⅴ級、Ⅱ級、CM-Dil、Trizol、RT-PCR試劑、逆轉(zhuǎn)錄酶、DEPC、Mouse IL-4ELISA Kit、Mouse IL-6ELISA Kit、Mouse IL-10ELISA Kit、Mouse IFN-γELISA Kit。 Balb/c小鼠[6-8周,雄性,體質(zhì)量18-25g,由南方醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供(合格證scxk粵2011-0015)。] 2方法 2.1ADSC的分離、培養(yǎng) 取10只清潔級Balb/c小鼠,斷頸處死,完全浸泡于75%酒精中約5分鐘消毒,無菌取腹股溝處及附睪周圍脂肪組織,剔除肉眼可見的小血管及結(jié)締組織,含高濃度青霉素(300U/ml)+鏈霉素(300ng/ml)的PBS沖洗3次。眼科剪盡可能剪碎,加入2倍體積的0.1%的I型膠原酶,37℃水浴鍋中震蕩消化約30min,加入2倍體積的PBS液混勻,100目的篩網(wǎng)過濾,1200×g離心10min,移液器輕輕吸棄油性上清,沉淀用PBS洗滌3次,含10%胎牛血清的DMFM/F12培養(yǎng)基重懸,接種于25ml培養(yǎng)瓶中于37℃5%CO2孵箱中培養(yǎng)。24小時后首次換液,以去除殘余的紅細(xì)胞及未貼壁的細(xì)胞。以后每2-3天換液一次,細(xì)胞長滿80%用胰酶消化傳代培養(yǎng)。 2.2流式檢測ADSC的表面標(biāo)記 收集第3-5代ADSC約2×106個,1200×g離心4min棄上清。Buffer溶液重懸,吸取100μ1細(xì)胞懸液(約3.0×105個細(xì)胞)加入Ep管內(nèi)。加入適量抗體,避光孵育30min。每樣品管加入1.5～2ml Buffer溶液,1200×g離心4min棄上清。每樣品管加入300μl Buffer溶液重懸后流式細(xì)胞儀檢測。 2.3ADSC或脂、成骨及成軟骨誘導(dǎo)分化 取生長狀態(tài)良好的第3-5代ADSC,待細(xì)胞達(dá)到100%融合時,吸棄舊培養(yǎng)液。先加入2ml/孔的成脂誘導(dǎo)完全培養(yǎng)基A開始誘導(dǎo),三天后更換為成脂誘導(dǎo)完全培養(yǎng)基B,24h后,再次更換為成脂誘導(dǎo)完全培養(yǎng)基A,如此進(jìn)行2個循環(huán)。繼續(xù)培養(yǎng)待胞內(nèi)脂滴已較成熟時,對其進(jìn)行油紅0染色。 取生長狀態(tài)良好的第3-5代ADSC,待細(xì)胞達(dá)到70～80%融合時后,吸棄舊培養(yǎng)液,加入2ml／孔的成骨誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基。每三天換液,直至可觀察到明顯鈣結(jié)節(jié)。鏡下觀察見細(xì)胞鈣結(jié)節(jié)變多,分化情況較恒定時,進(jìn)行茜素紅染色。 取生長狀態(tài)良好的第3-5代ADSC,消化離心棄上清,按7.5×105/m1加入軟骨誘導(dǎo)基礎(chǔ)液重懸細(xì)胞,1100×g離心5min;棄上清,按5.0×105/ml加入軟骨誘導(dǎo)完全培養(yǎng)液重懸細(xì)胞；吸取500μl細(xì)胞懸液(即2.5×105個細(xì)胞)至15ml離心管中,1100×g離心5min;離心后不可搖動或吹打細(xì)胞團(tuán),擰松離心管蓋,置于37℃,5%C02中孵育(24h內(nèi)避免搖動細(xì)胞團(tuán))。每2～3天半量更換軟骨分化誘導(dǎo)液,并輕彈使其脫離管壁懸浮。繼續(xù)誘導(dǎo)培養(yǎng)待細(xì)胞團(tuán)增大后,送做石蠟切片,進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色。 2.4變應(yīng)性鼻炎小鼠模型的建立、采用尾靜脈注射ADSC處理模型鼠 2.4.1致敏液和激發(fā)液的配制 OVA致敏液：稱取卵清蛋白V (OVA V)2mg,溶于4ml無菌PBS液中,常溫下震蕩溶解配成500ug/ml的OVA溶液：稱取適量明礬(氫氧化鋁),溶于適量無菌PBS液中,超聲波下完全溶解配成10%的明礬溶液,取4ml明礬溶液加入OVA溶液中并充分混勻,用10N NaOH溶液調(diào)整PH至6.5,室溫靜置孵育60min,1200×g離心5min,吸棄上清,沉淀用無菌PBS液重懸至4ml,渦旋振蕩器充分震蕩搖勻。 OVA激發(fā)液：稱取卵清蛋白Ⅱ(OVA Ⅱ)40mg,溶于lml無菌PBS液中,使用前充分混勻。 2.4.2致敏和激發(fā) Balb/c小鼠,60只,適應(yīng)性飼養(yǎng)3d后完全隨機(jī)分為6組(分組表示為：致敏/激發(fā)/處理),隨機(jī)選組分別為實(shí)驗(yàn)組1(OVA/OVA/高劑量ADSC)、實(shí)驗(yàn)組2(OVA/OVA/低劑量ADSC)、實(shí)驗(yàn)組3(OVA/OVA/PBS)、實(shí)驗(yàn)組4(OVA/OVA/0)、對照組1(PBS/PBS/0)和對照組2(0/0/0)。實(shí)驗(yàn)組1-4和對照組1分別于第0、7、14天的相同時間,lml無菌注射器取現(xiàn)配的OVA致敏液和PBS液200ul/只(實(shí)驗(yàn)組1-4即100ug)進(jìn)行基礎(chǔ)致敏。第15-19d,每天相同時間以現(xiàn)配的OVA激發(fā)液(和PBS液)20ul(每側(cè)鼻孔10ul,共800ug)進(jìn)行滴鼻激發(fā)。滴鼻結(jié)束后立即觀察雙鼻流涕、撓鼻及噴嚏情況并記錄(將其一次性連續(xù)多次抓鼻視為一次反應(yīng))。對照組2不做任何處理。 2.4.3CM-Di1熒光探針標(biāo)記ADSC 取第3-5代長滿約80%的ADSC, DPBS洗滌細(xì)胞,胰酶消化,重懸于DPBS液中并計數(shù),每106個細(xì)胞加入500ul的2uM的CM-Dil,37℃孵育5min,4℃孵育15min, PBS洗滌3次,重懸于PBS中調(diào)整細(xì)胞密度分別為：高濃度ADSC液：3×107/ml和低濃度ADSC液：1×107/ml。 2.4.4尾靜脈注射ADSC處理模型鼠 對致敏組1、2和3分別于致敏激發(fā)第20-22天,溫鹽水擦拭暴露鼠尾靜脈后,1ml注射器分別抽取0.1ml的高濃度ADSC液(即高劑量ADSC)、低濃度ADSC液(即低劑量ADSC)和PBS液對相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)鼠進(jìn)行尾靜脈注射。 2.4.5癥狀學(xué)分析： 從造模第1天開始觀察動物行為、形態(tài)、體征、攝食、飲水等,并于每次鼻腔激發(fā)后觀察記錄15min內(nèi)鼻清涕、噴嚏及撓鼻次數(shù),采用疊加量化計算總分,總分大于5分視為造模成功。 2.5ELISA法檢測血清中的IL-4、IL-6、IL-10及IFN-Y水平 末次處理48小時后,1ml水合氯醛腹腔麻醉小鼠后摘眼球后立即收集外周血,室溫靜置2h后,1500×g離心10min。移液槍小心吸取上層血清采用小鼠ELISA試劑盒檢測其中IL-4、IL-6、IL-10及IFN-γ水平,并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)檢驗(yàn)。 2.6熒光定量PCR法檢測脾臟組織中IL-4、IL-6、IL-10及IFN-γ的mRNA水平 末次處理48小時后,1ml水合氯醛腹腔麻醉小鼠后摘眼球取外周血并處死,固定四肢后取脾臟,TRIZOL提取總RNA,取2ugRNA模板做逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),熒光定量PCR檢測IL-4、IL-6、IL-10及IFN-Y基因表達(dá)情況。依據(jù)方法計算各組CT值,并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)檢驗(yàn)。 2.7組織學(xué)分析 末次處理48小時后處死小鼠,顯微鏡下取鼻腔呼吸區(qū)粘膜,10%的甲醛溶液固定,石蠟包埋,連續(xù)切片(約3um),進(jìn)行常規(guī)HE染色,光鏡下觀察各組鼻粘膜中炎細(xì)胞的浸潤情況。熒光顯微鏡綠色激發(fā)光下觀察CM-Dil標(biāo)記的ADSC在小鼠鼻粘膜(鼻粘膜白片)的遷移。 2.8統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理,結(jié)果以X±s表示。多個樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析；Levene方差齊性檢驗(yàn),若方差不齊,用基于方差不齊的近似F檢驗(yàn)Welch法；多重比較采用LSD(方差齊時)或Dunnett'sT3法(方差不齊時)。P0.05為差異有顯著性意義。 結(jié)果 1、小鼠ADSC的分離、培養(yǎng) 接種24小時后,顯微鏡下可見少數(shù)細(xì)胞貼壁生長,形態(tài)不均一,呈短梭形、多角形,折光性較差。48小時后貼壁細(xì)胞明顯增多,逐漸開始伸展,呈長梭形,有粗大突起,立體感增強(qiáng)�；祀s生長細(xì)胞隨換液及傳代次數(shù)增加而明顯減少。 2、ADSC的表面標(biāo)記鑒定 流式細(xì)胞表面標(biāo)志鑒定可見ADSC陽性表達(dá)CD44(31.60%),陰性表達(dá)CD106(4.98%)、CD34(10.46%)和CD45(12.43%)。 3、ADSC成脂、成骨及成軟骨分化 成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)3d后,顯微鏡下細(xì)胞立體感漸增強(qiáng),繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)小脂滴部分開始融合,約6d左右胞內(nèi)脂滴數(shù)量漸增加,細(xì)胞由長梭形漸變?yōu)轭悎A形、多邊形,油紅0染色可見胞內(nèi)大量脂質(zhì)沉淀； 成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)誘導(dǎo)后細(xì)胞漸呈多角形,約10d后,胞質(zhì)內(nèi)可見大量顆粒,細(xì)胞呈集落樣生長,細(xì)胞間可見鈣質(zhì)沉積；繼續(xù)培養(yǎng)集落中心的細(xì)胞漸融合失去細(xì)胞結(jié)構(gòu),形成鈣結(jié)節(jié),經(jīng)茜素紅染色見紅色結(jié)節(jié)； 成軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng)后細(xì)胞團(tuán)直徑緩慢增大,表面漸光滑呈膠質(zhì),誘導(dǎo)20天左右后甲苯胺藍(lán)染色呈淡藍(lán)色。 4、癥狀學(xué)評分： 實(shí)驗(yàn)組1-4的40只鼠在鼻腔激發(fā)后的15min內(nèi),前5min小鼠即出現(xiàn)反復(fù)雙前爪撓鼻、連續(xù)性噴嚏及多量清涕,后10min噴嚏間隙延長,撓鼻及清涕無明顯變化,評分都大于5分,視為造模成功,其中8只出現(xiàn)陣發(fā)性撓耳、撓頸等癥狀。對照組1的10只鼠在致敏激發(fā)后的15min內(nèi),前5min小鼠均出現(xiàn)反復(fù)雙前爪撓鼻,但連續(xù)性噴嚏及清涕不明顯,評分小于或等于5。 實(shí)驗(yàn)組1-4和對照組1、2比較,F=414.912,P=0.000,方差齊(P=0.280)進(jìn)一步采用LSD法進(jìn)行多重比較,實(shí)驗(yàn)組1-4的癥狀學(xué)評分較對照組1、2均具有顯著差異(分別為P=0.000,P=0.000),對照組1與2間無顯著性差異(P=0.483)。提示實(shí)驗(yàn)組1-4的癥狀學(xué)評分具有顯著性差異。 5、ELISA法檢測血清中的IL-4、IL-6、IL-10及IFN-γ的水平 按照ELISA試劑盒說明書操作,實(shí)驗(yàn)組1血清中IL-4和IL-6水平顯著下降(與實(shí)驗(yàn)組4比較,P0.05),IL-10和IFN-γ水平顯著增加(與實(shí)驗(yàn)組4比較,P0.05)；實(shí)驗(yàn)組2血清中IL-6水平顯著下降(與實(shí)驗(yàn)組4比較,P0.05),IL-10水平顯著增加(與實(shí)驗(yàn)組4比較,P0.05),IL-4和IFN-γ的水平無顯著性變化(與實(shí)驗(yàn)組4比較,P0.05),盡管二者分別具有降低和增加的趨勢。這提示全身應(yīng)用ADSC可影響AR模型鼠Th1、Th2及Treg細(xì)胞的分泌,進(jìn)而調(diào)節(jié)機(jī)體Th1/Th2免疫狀態(tài)和Treg細(xì)胞,并在一定程度上存在ADSC劑量依賴性。 實(shí)驗(yàn)組4血清中IL-4和IL-6水平顯著升高(與對照組2比較,P0.05),IL-10和IFN-γ水平顯著降低(與實(shí)驗(yàn)組4比較,P0.05)。這提示本研究采用0VA+Alum方案成功構(gòu)建了變應(yīng)性鼻炎模型鼠,模型鼠存在Th1/Th2免疫失衡和Treg細(xì)胞功能缺陷。 6、熒光定量PCR法檢測脾臟組織的IL-4、IL-6、IL-10及IFN-Y mRNA的表達(dá) 實(shí)驗(yàn)組1脾臟中IL-4和IL-6的mRNA水平顯著下降(與實(shí)驗(yàn)組4比較,P0.05),IL-10和IFN-γ的mRNA水平顯著升高(與實(shí)驗(yàn)組4比較,P0.05)；實(shí)驗(yàn)組2中IL-6的mRNA水平顯著下降(與實(shí)驗(yàn)組4比較,P0.05),IL-10的mRNA水平顯著升高(與實(shí)驗(yàn)組4比較,P0.05),IL-4和IFN-γ的mRNA水平無顯著性變化(與實(shí)驗(yàn)組4比較,P0.05).這提示全身應(yīng)用ADSC可從基因水平影響AR模型鼠Th1、Th2及Treg細(xì)胞的分泌,進(jìn)而調(diào)節(jié)機(jī)體Th1/Th2免疫狀態(tài)和Treg細(xì)胞,并在一定程度上存在ADSC劑量依賴性。 實(shí)驗(yàn)組4中IL-4和IL-6的mRNA水平顯著升高(與對照組2比較,P0.05),IL-10和IFN-γ的mRNA水平顯著降低(與實(shí)驗(yàn)組4比較,P0.05)。這提示本研究采用OVA+Alum方案成功構(gòu)建了變應(yīng)性鼻炎模型鼠,模型鼠在基因水平存在Th1/Th2免疫失衡和Treg細(xì)胞功能缺陷。 7、CM-Dil標(biāo)記的ADSC在鼻粘膜的遷移 鼻粘膜切片在熒光顯微鏡綠色激發(fā)光下可見CM-Dil標(biāo)記的ADSC呈紅色熒光,可遷移至小鼠鼻粘膜,主要分布于鼻粘膜上皮層和上皮下層,實(shí)驗(yàn)組1(OVA/OVA/高劑量ADSC)明顯多于實(shí)驗(yàn)組2(OVA/OVA/低劑量ADSC)。 8、鼻粘膜組織學(xué)分析 實(shí)驗(yàn)組4：嗜酸性粒細(xì)胞主要分布于粘膜固有層,并且基底膜增厚,間質(zhì)水腫；實(shí)驗(yàn)組1、實(shí)驗(yàn)組2粘膜中無明顯嗜酸性粒細(xì)胞浸潤,基底膜增厚和間質(zhì)水腫明顯低于實(shí)驗(yàn)組4。 結(jié)論 1、Balb/c小鼠雙側(cè)腹股溝及附睪周圍是脂肪組織良好的取材部位。采用膠原酶消化合并貼壁篩選法可分離獲得ADSC。 2、采用Balb/c小鼠以O(shè)VA+明礬可成功構(gòu)建變應(yīng)性鼻炎動物模型。采用CM-Dil成功標(biāo)記小鼠ADSC。 3、異體靜脈移植的ADSC可向模型鼠鼻粘膜遷移,并發(fā)揮非特異性免疫調(diào)節(jié)效應(yīng),這部分是通過影響多種細(xì)胞因子的分泌進(jìn)而調(diào)節(jié)Th1/Th2免疫失衡和Treg細(xì)胞的功能,且在一定程度上具有劑量依賴性。
【關(guān)鍵詞】：變應(yīng)性鼻炎 脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)胞 Th1/Th2免疫平衡 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R-332;R765.21
【目錄】：

• 摘要3-12
• ABSTRACT12-26
• 前言26-30
• 第一章 小鼠ADSC的分離、培養(yǎng)及鑒定30-39
• 1 主要試劑與儀器30-31
• 2 實(shí)驗(yàn)動物及方法31-33
• 3 結(jié)果33-36
• 4 結(jié)論36
• 5 討論36-39
• 第二章 AR鼠模型的建立、鑒定及ADSC對模型鼠T細(xì)胞免疫狀態(tài)的研究39-62
• 1 主要試劑與儀器39-40
• 2 實(shí)驗(yàn)方法40-47
• 3 結(jié)果47-55
• 4 結(jié)論55
• 5 討論55-62
• 全文總結(jié)62-63
• 參考文獻(xiàn)63-69
• 中英文縮略詞表69-70
• 綜述70-79
• 參考文獻(xiàn)76-79
• 碩士期間成果79-80
• 致謝80-81

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4 馬學(xué)忠,尹昕,馬f ;小青龍湯治療變應(yīng)性鼻炎50例[J];國醫(yī)論壇;1996年03期

5 胡麗娟,梁國欣,陳紹仁,王麗芳,官杰,金四立,孟曉萍;變應(yīng)性鼻炎患者血清中可溶性白細(xì)胞介素2受體水平的測定[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1996年04期

6 成述昌;王秀媛;王儒九;豐紹祥;;微波熱療法治療變應(yīng)性鼻炎臨床觀察[J];中華理療雜志;1996年03期

7 李兵,余和平;He-Ne激光治療變應(yīng)性鼻炎68例臨床觀察[J];激光雜志;1997年05期

8 曾鋼,黃光武,農(nóng)輝圖,小杉忠誠,余奇松;炎癥介質(zhì)(PAF)致變應(yīng)性鼻炎血小板聚集的研究[J];廣西科學(xué);1998年02期

9 沈小明;;小兒變應(yīng)性鼻炎與支氣管哮喘的防治[J];上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;1998年04期

10 覃啟書;微波治療變應(yīng)性鼻炎42例療效分析[J];廣西醫(yī)學(xué);2000年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉立思;;變應(yīng)性鼻炎診斷和治療的現(xiàn)狀及進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會2009年全國變態(tài)反應(yīng)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

2 張曉陽;連增林;李穎;;從風(fēng)論治變應(yīng)性鼻炎的理論與臨床依據(jù)[A];全國中醫(yī)內(nèi)科肺系病第十四次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

3 向建文;;張介賓“陽非有余、陰常不足”理論在變應(yīng)性鼻炎治療中的指導(dǎo)作用——讀《中醫(yī)各家學(xué)說》有感[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會耳鼻喉科分會第十六次全國學(xué)術(shù)交流會論文摘要[C];2010年

4 郟雪峰;;鼻內(nèi)結(jié)構(gòu)正�；中g(shù)配合中醫(yī)藥治療變應(yīng)性鼻炎初探[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會耳鼻喉科分會第十六次全國學(xué)術(shù)交流會論文摘要[C];2010年

5 林志斌;陳冬;李添應(yīng);徐睿;;免疫捕獲法在變應(yīng)性鼻炎診斷中的應(yīng)用[A];中華醫(yī)學(xué)會2011年全國變態(tài)反應(yīng)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

6 祝君紅;;玉屏風(fēng)散治療變應(yīng)性鼻炎體會[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會耳鼻喉科分會第15屆學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2009年

7 祁方;;益氣固表法治療變應(yīng)性鼻炎的療效觀察[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會耳鼻喉科分會第15屆學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2009年

8 鄭軍;朱學(xué)偉;;吉林省變應(yīng)性鼻炎變應(yīng)原調(diào)查[A];吉林省醫(yī)學(xué)會第九次耳鼻咽喉—頭頸外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

9 王宇;;中醫(yī)藥治療變應(yīng)性鼻炎研究概況[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會耳鼻喉科分會第十六次全國學(xué)術(shù)交流會論文摘要[C];2010年

10 劉素文;;鵝蝥藿香粒天灸防治小兒變應(yīng)性鼻炎的臨床研究[A];第28次全國中醫(yī)兒科學(xué)術(shù)大會暨2011年名老中醫(yī)治療（兒科）疑難病臨床經(jīng)驗(yàn)高級專修班論文匯編[C];2011年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 記者 李衛(wèi)中　通訊員 任曉輝;我國對變應(yīng)性鼻炎規(guī)范化診斷和防治體系的研究正式啟動[N];山西經(jīng)濟(jì)日報;2008年

2 木每　本報記者 周芳;秋季預(yù)防變應(yīng)性鼻炎[N];吉林日報;2010年

3 副主任藥師 趙民生　(曹秀虹);變應(yīng)性鼻炎的藥物治療[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2009年

4 謝欣;變應(yīng)性鼻炎：一年四季打噴嚏[N];大眾衛(wèi)生報;2005年

5 國家中醫(yī)藥管理局適宜技術(shù)推廣項(xiàng)目;按揉法治變應(yīng)性鼻炎[N];中國中醫(yī)藥報;2009年

6 健康時報記者 許曉華;治過敏至少要堅(jiān)持兩年[N];健康時報;2008年

7 ;中醫(yī)藥綜合療法治療變應(yīng)性鼻炎效佳[N];中國中醫(yī)藥報;2004年

8 一文;急性鼻炎變應(yīng)性鼻炎之區(qū)別[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2002年

9 ;益肺通竅法治療變應(yīng)性鼻炎[N];中國中醫(yī)藥報;2003年

10 王秋月　王琳;空軍總醫(yī)院采用間充質(zhì)干細(xì)胞救治小腦萎縮[N];科技日報;2009年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 彭飛;620nm非相干紅光對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的光生物調(diào)節(jié)作用[D];華中科技大學(xué);2011年

2 于美嬌;系統(tǒng)歸巢的間充質(zhì)干細(xì)胞在牙周組織修復(fù)再生過程中的作用研究[D];山東大學(xué);2011年

3 李東杰;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)創(chuàng)面愈合及體外誘導(dǎo)分化為表皮樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2011年

4 鄧可斌;鼻鼽合劑治療風(fēng)寒型變應(yīng)性鼻炎的臨床與實(shí)驗(yàn)研究[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2010年

5 王曉巍;變應(yīng)性鼻炎對嗅覺的影響及糖皮質(zhì)激素干預(yù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

6 李寶軍;脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)及復(fù)合PLGA體內(nèi)異位成軟骨的實(shí)驗(yàn)研究[D];中南大學(xué);2007年

7 朱雅姝;Flk-1~+間充質(zhì)干細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用及其分子機(jī)制研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

8 吳桂珠;脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞治療壓力性尿失禁的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

9 黃桂鋒;培土生金法治療脾氣虛變應(yīng)性鼻炎大鼠的實(shí)驗(yàn)研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2010年

10 李家樂;小青龍湯治療變應(yīng)性鼻炎的文獻(xiàn)與實(shí)驗(yàn)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 沙驥超;兒童變應(yīng)性鼻炎臨床特點(diǎn)分析及相關(guān)問題調(diào)查[D];吉林大學(xué);2011年

2 滑[

本文編號：277878