【摘要】：受精是雄、雌性生殖細胞之間極為復雜的相互作用過程，有賴于一系列事件在正確的時間準確地完成。正常的受精過程離不開成熟的功能完整的精子的參與。在精子成熟和參與受精過程中，有許多睪丸特異表達的基因在調(diào)控因子的作用下，以既定的時空秩序開放或關閉。本室一直致力于對精子發(fā)生、受精等過程的分子機理的研究。HSD-3.8就是本實驗室既往發(fā)現(xiàn)的人睪丸特異表達并與受精和／或精子發(fā)生有關的基因。 HSD-3.8是以不孕婦女血清先后篩選人睪丸λgt11表達文庫和人睪丸cDNA文庫，并利用5'-RACE及重疊區(qū)擴增基因拼接法而獲得的人睪丸特異表達的基因。全長3818bp，編碼蛋白質(zhì)全長926個氨基酸，GenBank接受號為AF311312。根據(jù)基因組信息學分析顯示該基因定位于8號染色體上，由19個外顯子和18個內(nèi)含子組成。親疏水性分析提示HSD-3.8全長cDNA編碼蛋白質(zhì)是一個親水性較強的蛋白質(zhì)，沒有明顯的疏水區(qū)域。SMART和Prosite軟件對該蛋白質(zhì)進行結(jié)構域分析，確認HSD-3.8編碼蛋白質(zhì)具有糖基化位點、PKC磷酸化位點、CK-2磷酸化位點、酪氨酸激酶磷酸化位點、豆蔻酸化位點、酰胺化位點、ATP／GTP結(jié)合位點基序A(P-loop)，以及三個TPR區(qū)，每個TPR區(qū)又分別由三個TPR基序構成。利用以往制備的抗HSD-0.7的多克隆抗體檢測在人和大鼠睪丸中表達的HSD-3.8編碼蛋白，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在這兩種組織中僅有一大小約為55～60kDa的蛋白質(zhì)能與多克隆抗體特異反應，顯示HSD-3.8及其同源基因所編碼蛋白質(zhì)在生理狀態(tài)下約為55～60kDa。推測HSD-3.8編碼蛋白質(zhì)的功能正常發(fā)揮需要翻譯水平或翻譯后水平的修飾過程。 以往的工作表明HSD-3.8編碼蛋白質(zhì)中的一個片段：HSD-0.7對大鼠具有比較好的抗生育效果，該片段能與GTP特異結(jié)合，且其結(jié)合具有可飽和性。酶學活性測定分析證明HSD-0.7具有GTPase酶活性，在體外能夠被PKC磷酸化。據(jù)此推測，HSD-3.8蛋白可能作為一個功能活性受到GTP／GDP調(diào)節(jié)的某個因子參與調(diào)節(jié)人類的生殖過程。因此，尋找HSD-3.8編碼蛋白的作用配體有利于揭示該蛋白質(zhì)的生理功能。以往的工作以HSD-3.8編碼蛋白質(zhì)中與生育相關的片段HSD-0.7和較長的包含HSD-0.7的片段HSD-1.4作為“誘餌”蛋白，利用酵母雙雜交系統(tǒng)分別從人卵巢和人睪丸cDNA文庫中篩選與之相互作用的蛋白質(zhì)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)人G蛋白β1亞基以及人TRAF4相關因子1可能是與HSD-3.8編碼蛋白相互作用的蛋白因子。
【學位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R346

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