【摘要】：分化抗原是人血細(xì)胞膜胞膜分子中的一組抗原決定簇，有著十分重要的生物學(xué)意義。迄今為止，已命名的人類白細(xì)胞分化抗原已有166個(gè)。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)知識(shí)與技術(shù)的摻入，極大地促進(jìn)了分化抗原結(jié)構(gòu)與功能的研究。 本論文的目的是尋找和克隆編碼新分化抗原的cDNA，測(cè)定其核苷酸順序，，分析此序列及其編碼蛋白質(zhì)的性質(zhì)。論文工作分兩部分： 1．5C5 cDNA 數(shù)年前本實(shí)驗(yàn)室曾用單抗5C5和5C5-G1的混合物從一個(gè)人扁桃體細(xì)胞λgt11 cDNA文庫(kù)(ATCC No.37545)篩選到一個(gè)613bp長(zhǎng)的cDNA。由于它并非全長(zhǎng)，我用此cDNA 5’端467bp核苷酸序列作探針，再行篩選。但從另一個(gè)人扁桃體細(xì)胞λgt11 cDNA文庫(kù)(ATCC No.37546)僅篩選到一個(gè)序列完全相同的467bp cDNA。鑒于單抗5C5和5C5-G1是用人活化B細(xì)胞3D5免疫小鼠并用3D5細(xì)胞作篩選靶細(xì)胞得到的，我構(gòu)建了3D5細(xì)胞的λgt11 cDNA文庫(kù)。庫(kù)中九噬菌體滴度為1.1×10~6，插入重組率為97.5％，插入片段大小在0.4-2.5Kb之間，平均為1.6Kb左右。用467bp cDNA做探針從3D5細(xì)胞λgt11 cDNA文庫(kù)中篩選到17個(gè)陽(yáng)性克隆，其中一部分克隆的插入片段長(zhǎng)0.9Kb左右，另一部分長(zhǎng)0.7Kb左右。測(cè)序得到長(zhǎng)908bp和746bp兩個(gè)cDNA，稱5C5-1 cDNA與5C5-2 cDNA。5C5-1 cDNA中從19bp至846bp為開(kāi)放閱讀框架，編碼276個(gè)從的蛋白質(zhì)。此蛋白質(zhì)從序列中有兩個(gè)明顯的疏水區(qū)(85-110AA或180-200AA)�？缒そY(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)95-112AA和186-208AA為兩個(gè)有意義的跨膜螺旋區(qū)，跨膜方向?yàn)榍罢哂赡?nèi)向外，后者由膜外向內(nèi)�；蚍治霭l(fā)現(xiàn)，5C5-1 cDNA編碼蛋白質(zhì)中有六種基序。2-23AA形成亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)，268-271AA為cAMP-cGMP依賴性蛋白激酶磷酸化位點(diǎn)，144-152AA為酪氨酸激酶磷酸化位點(diǎn)，75-78為酪氨酸激酶Ⅱ磷酸化位點(diǎn)。另外，還有4個(gè)蛋白激酶C磷酸化位點(diǎn)及10個(gè)N-myristylaion位點(diǎn)。上述結(jié)果提示，5C5-1 cDNA編碼的蛋
【圖文】：

圖28.5D4eDNA克隆1和克隆3的比較Fig28.ComParisonof5D4eDNAelone1andelone3克隆1eDNA序列全長(zhǎng)1846bp(圖29)。5，端。端87bp為非編碼區(qū)，內(nèi)含兩個(gè)連續(xù)的終止密碼子。AGT的一3和+4為嚓吟堿基，符合真核細(xì)胞RNA有效轉(zhuǎn)錄的需要。88bp至1209bp之間1122個(gè)bp組成一個(gè)完整的開(kāi)放閱讀框架，編碼374個(gè)氨基酸的蛋白。然后是終止密碼子，以及637個(gè)bp的3’非編碼區(qū)，內(nèi)含加尾信號(hào)AATAAA，及PolyA尾。由此可見(jiàn)，此DcNA序列為一完整序列。經(jīng)Blasnt方式與GeBnank資料進(jìn)行同源性比較，未發(fā)現(xiàn)有相同基因，因此申請(qǐng)GenBank登記，按收號(hào)為AF043290。圖29中上行為5D4cDNA核普酸序列，下行為由此cDNA序列中開(kāi)放閱讀框架所推導(dǎo)出的蛋白質(zhì)氨基酸序列。在此蛋白質(zhì)氨基酸序列中半朧氨酸十分豐富。3.D54全長(zhǎng)DcNA編碼蛋白的同源性比較及二級(jí)結(jié)構(gòu)的分析3.1同源性比較，
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：1998
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2661926