第一部分MDR1基因定量表達(dá)的檢測：實時定量PCR方法的建立 目的：建立實時定量PCR方法,檢測多藥耐藥基因1(multidrug-resistance 1,MDR1)mRNA的表達(dá)水平。 方法：采用Primer 5.0軟件設(shè)計PCR擴(kuò)增引物,Trizol法提取MCF-7細(xì)胞株mRNA, RT-PCR擴(kuò)增目標(biāo)片段,T-A克隆測序驗證擴(kuò)增的目的基因片段序列,應(yīng)用Bio-Rad icycler熒光定量PCR儀實時定量檢測MDR1基因和P-actin表達(dá),繪制目的基因MDR1和看家基因β-actin標(biāo)準(zhǔn)曲線,獲得擴(kuò)增效率,并進(jìn)行溶解曲線分析,判斷擴(kuò)增的特異性。 結(jié)果：(1)成功擴(kuò)增MDR1基因目標(biāo)片段,并經(jīng)TA克隆、測序證實；(2)溶解曲線分析MDR1及β-actin基因出現(xiàn)的峰值均為單峰,沒有非特異性PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；(3)成功繪制目的基因MDR1及看家基因β-actin的標(biāo)準(zhǔn)曲線,二者的擴(kuò)增效率在同一水平。 結(jié)論：成功建立實時定量PCR方法,以檢測MDR1基因mRNA的表達(dá)水平。 第二部分MDR1基因C3435T位點多態(tài)性與MDR1基因表達(dá)水平的關(guān)系 目的：探討惡性腫瘤患者M(jìn)DR1基因C3435T位點多態(tài)性與MDR1基因mRNA表達(dá)水平的關(guān)系。 方法：提取74例惡性腫瘤患者外周靜脈血DNA,應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)。限制性片段長度多態(tài)性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP)技術(shù)對MDR1基因C3435T位點進(jìn)行分型,部分分型結(jié)果經(jīng)DNA測序驗證；應(yīng)用實時定量PCR方法,測定每例患者的MDR1基因表達(dá)量,分析74例腫瘤患者M(jìn)DR1基因C3435T位點多態(tài)性與MDR1基因mRNA表達(dá)水平的關(guān)系；數(shù)據(jù)分析采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行多個獨立樣本非參數(shù)檢驗(Kruskal-Wallis檢驗)。 結(jié)果：MDR1基因C3435T位點CC、CT、TT三種基因型之間MDR1mRNA表達(dá)水平的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.036)；三種基因型的相對表達(dá)量CC:CT:TT為3.01：2.55：1.0。 結(jié)論：MDR1基因C3435T位點三種基因型的MDR1 mRNA表達(dá)水平有差異,其表達(dá)水平CC、CT、TT。 第三部分MDRl基因C3435T位點多態(tài)性的臨床意義 目的：探討腫瘤患者M(jìn)DR1基因C3435T位點多態(tài)性與臨床化療療效及血液學(xué)毒性的關(guān)系。 方法：收集74例惡性腫瘤患者的臨床資料,分析MDR1基因C3435T位點多態(tài)性與臨床化療療效、血液學(xué)毒性的關(guān)系,采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行X2檢驗。 結(jié)果：(1)MDR1基因C3435T位點多態(tài)性與臨床療效的關(guān)系：①非小細(xì)胞肺癌患者中,TT+CT基因型組和CC基因型組的有效率(CR+PR)分別為50%和21.4%,TT+CT基因型有效率比CC基因型高,它們的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。②消化道腫瘤中,TT+CT基因型組和CC基因型組的有效率(CR+PR)分別為21.4%和16.7%,TT+CT基因型有效率比CC基因型高,它們的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。③非霍奇金淋巴瘤中,TT+CT基因型組和CC基因型組的完全緩解率(CR)分別為25%和0%,TT+CT基因型CR率比CC基因型高；兩組有效率分別為66.7%和83.3%,它們的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)MDR1基因C3435T位點多態(tài)性與血液學(xué)毒性的關(guān)系：①非小細(xì)胞肺癌患者中,TT+CT基因組和CC基因組的嚴(yán)重白細(xì)胞下降率(Ⅲ+Ⅳ度)分別為28.6%和14.3 %,TT+CT基因型組白細(xì)胞下降率較CC基因組高,但兩組間的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.648)；兩組的嚴(yán)重血紅蛋白下降率(Ⅲ+Ⅳ度)分別為7.1%和14.3%,兩組間的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P=1.000)；兩組的嚴(yán)重血小板下降率(Ⅲ+Ⅳ度)分別為7.1%和21.4%,兩組間的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.596)。②消化道腫瘤患者中,TT+CT基因型組和CC基因型組的嚴(yán)重白細(xì)胞下降率(Ⅲ+Ⅳ度)分別為10.0%和33.3%,兩組間的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.518)；兩組的嚴(yán)重血紅蛋白下降率(Ⅲ+Ⅳ度)分別為10.0%和0%,兩組間的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P=1.000)；兩組的嚴(yán)重血小板下降率(Ⅲ+Ⅳ度)均為0%,兩組間的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P=1.000)。③非霍奇金淋巴瘤患者中,TT+CT基因型組和CC基因型組的嚴(yán)重白細(xì)胞下降率(Ⅲ+Ⅳ度)分別為45.5%和40%,兩組間的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P=1.000)；嚴(yán)重血紅蛋白下降率(Ⅲ+Ⅳ度)均為0%,兩組間的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P=1.000)；嚴(yán)重血小板下降率(Ⅲ+Ⅳ度)分別為9.1%和0%,兩組間的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P=1.000)。 結(jié)論：(1)接受化療的腫瘤患者,MDR1基因C3435T位點TT+CT基因型組比CC基因型組的有效率高,但兩者之間的差異未達(dá)到統(tǒng)計學(xué)意義。(2)化療后TT+CT基因型組與CC基因型組的嚴(yán)重血液學(xué)毒性差異無統(tǒng)計學(xué)意義。(3)本研究樣本量偏小,結(jié)果尚需在擴(kuò)大樣本量研究中進(jìn)一步驗證。



本文編號：2117357