1.背景與目的膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)生率最高的原發(fā)性惡性腫瘤疾病,具有極高的死亡率。目前,膠質(zhì)瘤的主要治療方法是手術(shù)結(jié)合放化療的綜合治療方案,但患者治療效果普遍不佳,極易復(fù)發(fā),生存時(shí)間較短�；谀[瘤免疫和免疫殺傷機(jī)制的抗腫瘤免疫治療被視為最有希望治愈膠質(zhì)瘤及其它惡性腫瘤的方法。隨著腫瘤發(fā)生、發(fā)展機(jī)制和腫瘤免疫反應(yīng)研究的深入,免疫微環(huán)境的重要性日益顯現(xiàn)。膠質(zhì)瘤免疫微環(huán)境的組成成分極為復(fù)雜,包括膠質(zhì)瘤細(xì)胞、浸潤(rùn)的各型淋巴細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、部分實(shí)質(zhì)細(xì)胞等多種細(xì)胞以及上述細(xì)胞合成、分泌的細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、趨化因子等,共同發(fā)揮促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)、血管發(fā)生、侵襲和抗凋亡等作用。因此,針對(duì)腫瘤免疫微環(huán)境的研究,有助于了解和明確微環(huán)境中不同細(xì)胞和細(xì)胞因子在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的作用,并尋找潛在的腫瘤免疫治療靶點(diǎn)。白介素6（Interleukin 6,IL6）是本課題組前期采用生物信息學(xué)分析,于中國(guó)膠質(zhì)瘤基因組圖譜計(jì)劃（Chinese Glioma Genome Atlas,CGGA）和癌癥基因組圖譜計(jì)劃（The Cancer Genome Atlas,TCGA）數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選出的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤免疫相關(guān)...

【文章頁(yè)數(shù)】：101 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)
第一部分 IL6、IL6R在膠質(zhì)瘤不同分子分型中的表達(dá)及預(yù)后意義
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 膠質(zhì)瘤細(xì)胞系和患者來(lái)源膠質(zhì)瘤干細(xì)胞提取及培養(yǎng)試劑
            2.1.2 免疫熒光相關(guān)試劑和材料
            2.1.3 蛋白免疫印跡相關(guān)試劑和材料
            2.1.4 RNA提取及熒光定量PCR試劑
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 生物信息學(xué)檢測(cè)膠質(zhì)瘤中IL6、IL6R的表達(dá)、預(yù)后意義
            2.2.2 膠質(zhì)瘤細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.3 患者來(lái)源膠質(zhì)瘤干細(xì)胞提取及培養(yǎng)
            2.2.4 患者來(lái)源膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的鑒定
            2.2.5 患者來(lái)源膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中IL6、IL6R的表達(dá)
    3 結(jié)果
        3.1 在TCGA膠質(zhì)母細(xì)胞瘤數(shù)據(jù)庫(kù)中,間質(zhì)型IL6、IL6R的表達(dá)最高
        3.2 在TCGA膠質(zhì)瘤數(shù)據(jù)庫(kù)中,IDH野生型IL6、IL6R的表達(dá)高于突變型
        3.3 在TCGA膠質(zhì)瘤、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、Rembrandt膠質(zhì)瘤數(shù)據(jù)庫(kù)中,IL6、IL6R的表達(dá)均具有預(yù)后意義
        3.4 患者來(lái)源膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的鑒定和分型
            3.4.1 膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的鑒定
            3.4.2 膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的分型
        3.5 IL6、IL6R在間質(zhì)型患者來(lái)源膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中表達(dá)最高
        3.6 膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中IL6R的表達(dá)
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 IL6R對(duì)膠質(zhì)瘤增殖、侵襲、凋亡的調(diào)控和介導(dǎo)IL6的促進(jìn)膠質(zhì)瘤作用
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 膠質(zhì)瘤細(xì)胞系及培養(yǎng)試劑
            2.1.2 慢病毒及感染試劑
            2.1.3 細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑和材料
            2.1.4 免疫組化相關(guān)試劑和材料
            2.1.5 蛋白免疫印跡、qPCR相關(guān)試劑和材料同第一部分
            2.1.6 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2 慢病毒感染
            2.2.3 蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)
            2.2.4 qPCR實(shí)驗(yàn)
            2.2.5 細(xì)胞活性檢測(cè)
            2.2.6 集落形成實(shí)驗(yàn)
            2.2.7 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
            2.2.8 神經(jīng)球形成實(shí)驗(yàn)
            2.2.9 Transwell實(shí)驗(yàn)
            2.2.10 Tunel凋亡檢測(cè)
            2.2.11 免疫組化
            2.2.12 HE染色
            2.2.13 裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)
            2.2.14 裸鼠顱內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)
    3 結(jié)果
        3.1 IL6R穩(wěn)定過(guò)表達(dá)和沉默膠質(zhì)瘤細(xì)胞的構(gòu)建
        3.2 IL6R對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖活性的調(diào)控
        3.3 IL6R對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移和侵襲的調(diào)控
        3.4 IL6R對(duì)膠質(zhì)瘤凋亡的調(diào)控
        3.5 IL6R對(duì)腫瘤發(fā)生的調(diào)控
        3.6 IL6R介導(dǎo)IL6體外刺激對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的調(diào)控
        3.7 IL6R介導(dǎo)IL6體外刺激對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移和侵襲的調(diào)控
        3.8 IL6R介導(dǎo)IL6體外刺激對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡的調(diào)控
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分 NFAT1調(diào)控IL6、IL6R的表達(dá)
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 膠質(zhì)瘤細(xì)胞培養(yǎng)、蛋白免疫印跡、免疫熒光及qPCR相關(guān)試劑和材料
            2.1.2 慢病毒及感染試劑
            2.1.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Elisa)
            2.1.4 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)
            2.1.5 染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)
            2.1.6 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 膠質(zhì)瘤細(xì)胞培養(yǎng)、蛋白免疫印跡、免疫熒光、qPCR等方法均同論文第一部分
            2.2.2 慢病毒感染同論文第二部分
            2.2.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
            2.2.4 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)
            2.2.5 染色質(zhì)免疫共沉淀
            2.2.6 裸鼠皮下成瘤
            2.2.7 生物信息學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 TCGA膠質(zhì)瘤數(shù)據(jù)庫(kù)中IL6、IL6R與NFAT1表達(dá)的相關(guān)性
        3.2 NFAT1調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞中IL6、IL6R的表達(dá)
        3.3 NFAT1直接參與IL6、IL6R的轉(zhuǎn)錄調(diào)控
        3.4 NFAT1調(diào)控腫瘤的發(fā)生
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：4049235