神經(jīng)退行性疾病（Neurodegenerative diseases）多發(fā)于老年群體,具有病情發(fā)展緩慢、發(fā)病率高、治愈率低等特點(diǎn),對(duì)患者的健康生活造成較大影響,氧化應(yīng)激是該類疾病的重要發(fā)病機(jī)制。核轉(zhuǎn)錄因子E2相關(guān)因子2（Nuclear factor erythroid 2 related factor2,Nrf2）是內(nèi)源性抗氧化系統(tǒng)中的關(guān)鍵元件,氧化應(yīng)激條件下調(diào)控機(jī)體抗氧化系統(tǒng),進(jìn)而發(fā)揮對(duì)機(jī)體的保護(hù)作用。Nrf2激活劑可以增強(qiáng)機(jī)體抗氧化應(yīng)激的能力,在多種神經(jīng)退行性疾病中表現(xiàn)出良好的保護(hù)作用。本研究以已報(bào)道的178種天然抗氧化劑為研究對(duì)象,通過(guò)分子對(duì)接篩選出具有激活Nrf2活性的苯乙醇苷（Phenylpropanoid glycosides,PhGs）,并利用氧化損傷細(xì)胞和動(dòng)物模型,從基因和蛋白水平深入研究其神經(jīng)保護(hù)作用及作用機(jī)制,為苯乙醇苷特別是毛蕊花糖苷應(yīng)用于預(yù)防帕金森疾病（Parkinson's disease,PD）的發(fā)生奠定了理論基礎(chǔ)。本文主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:1.建立178種天然抗氧化劑數(shù)據(jù)庫(kù),利用分子對(duì)接篩選Nrf2的潛在激活劑。結(jié)果表明,不同類型化合物與Keap1的親和力...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 神經(jīng)退行性疾病研究進(jìn)展
        1.1.1 神經(jīng)退行性疾病概述
        1.1.2 神經(jīng)退行性疾病發(fā)病機(jī)制
        1.1.3 天然抗氧化劑與神經(jīng)退行性疾病
    1.2 Nrf2-ARE信號(hào)通路在神經(jīng)退行性疾病中的作用研究進(jìn)展
        1.2.1 Nrf2-ARE信號(hào)通路概述
        1.2.2 Nrf2-ARE信號(hào)通路與神經(jīng)退行性疾病
        1.2.3 天然抗氧化劑與Nrf2激活劑
    1.3 苯乙醇苷類化合物研究進(jìn)展
        1.3.1 苯乙醇苷類化合物概述
        1.3.2 苯乙醇苷類化合物生物活性
        1.3.3 苯乙醇苷類化合物與神經(jīng)退行性疾病
    1.4 天然產(chǎn)物抗氧化活性的常見(jiàn)評(píng)價(jià)方法
        1.4.1 化學(xué)分析法
        1.4.2 細(xì)胞模型
        1.4.3 動(dòng)物模型
    1.5 分子對(duì)接與藥物篩選
    1.6 研究背景及主要內(nèi)容
        1.6.1 研究背景和意義
        1.6.2 研究主要內(nèi)容
        1.6.3 技術(shù)路線圖
第二章 基于分子對(duì)接的天然抗氧化劑對(duì)Nrf2激活作用研究
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 生物學(xué)軟件
        2.2.2 細(xì)胞品系
        2.2.3 試劑與耗材
        2.2.4 主要儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 天然抗氧化劑的整理與配體分子的準(zhǔn)備
        2.3.2 天然抗氧化劑與Keap1蛋白分子對(duì)接
        2.3.3 天然抗氧化劑與Keap1親和力的3D-QSAR模型研究
        2.3.4 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.4.5 細(xì)胞活力檢測(cè)
        2.3.6 細(xì)胞質(zhì)蛋白與細(xì)胞核蛋白分離提取
        2.3.7 蛋白質(zhì)定量檢測(cè)
        2.3.8 Western blot
        2.3.9 數(shù)據(jù)分析
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 天然抗氧化劑與Keap1分子對(duì)接結(jié)果分析
        2.4.2 天然抗氧化劑與Keap1分子對(duì)接影響因素分析
        2.4.3 天然抗氧化劑與Keap1親和力的3D-QSAR分析
        2.4.4 天然抗氧化劑的細(xì)胞毒性分析
        2.4.5 天然抗氧化劑對(duì)Nrf2的激活能力分析
    2.5 本章小結(jié)
第三章 苯乙醇苷對(duì)氧化應(yīng)激損傷細(xì)胞的保護(hù)作用研究
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 細(xì)胞品系
        3.2.2 試劑與耗材
        3.2.3 主要儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.3.2 細(xì)胞活力測(cè)定
        3.3.3 蛋白質(zhì)定量檢測(cè)
        3.3.4 細(xì)胞內(nèi)SOD、GSH-Px、CAT酶活力檢測(cè)
        3.3.5 細(xì)胞內(nèi)MDA含量檢測(cè)
        3.3.6 細(xì)胞內(nèi)ROS水平檢測(cè)
        3.3.7 細(xì)胞凋亡率檢測(cè)
        3.3.8 DAPI染色
        3.3.9 數(shù)據(jù)分析
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 苯乙醇苷的細(xì)胞毒性分析
        3.4.2 苯乙醇苷對(duì)氧化應(yīng)激損傷細(xì)胞增殖率的影響
        3.4.3 苯乙醇苷對(duì)氧化應(yīng)激損傷細(xì)胞抗氧化酶活性的影響
        3.4.4 苯乙醇苷對(duì)氧化應(yīng)激損傷細(xì)胞ROS水平的影響
        3.4.5 苯乙醇苷對(duì)氧化應(yīng)激損傷細(xì)胞MDA含量的影響
        3.4.6 苯乙醇苷對(duì)氧化應(yīng)激損傷細(xì)胞凋亡率的影響
    3.5 本章小結(jié)
第四章 苯乙醇苷對(duì)氧化應(yīng)激損傷細(xì)胞的保護(hù)作用機(jī)制研究
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.1 細(xì)胞品系
        4.2.2 試劑與耗材
        4.2.3 主要儀器
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.3.2 免疫熒光檢測(cè)
        4.3.3 蛋白質(zhì)提取方法
        4.3.4 蛋白質(zhì)定量檢測(cè)
        4.3.5 Western blot
        4.3.6 總RNA提取
        4.3.7 反轉(zhuǎn)錄
        4.3.8 RT-PCR
        4.3.9 抑制劑處理
        4.3.10 siRNA轉(zhuǎn)染
        4.3.11 數(shù)據(jù)分析
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 苯乙醇苷對(duì)細(xì)胞內(nèi)Nrf2分布的影響
        4.4.2 苯乙醇苷對(duì)細(xì)胞保護(hù)作用中Nrf2效果確證
        4.4.3 苯乙醇苷對(duì)Nrf2下游Ⅱ相解毒酶的影響
        4.4.4 苯乙醇苷對(duì)細(xì)胞保護(hù)作用中Ⅱ相解毒酶HO-1效果確證
        4.4.5 苯乙醇苷對(duì)Nrf2內(nèi)源性蛋白抑制劑Keap1的影響
        4.4.6 苯乙醇苷對(duì)Nrf2-ARE信號(hào)通路激活機(jī)制分析
    4.5 本章小結(jié)
第五章 毛蕊花糖苷對(duì)6-OHDA誘導(dǎo)的PD斑馬魚(yú)的保護(hù)作用研究
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗(yàn)材料
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        5.2.2 試劑與耗材
        5.2.3 主要儀器
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.1 斑馬魚(yú)的飼養(yǎng)
        5.3.2 配魚(yú)與魚(yú)卵收集
        5.3.3 毛蕊花糖苷最大耐受劑量篩選
        5.3.4 斑馬魚(yú)行為學(xué)檢測(cè)
        5.3.5 斑馬魚(yú)體內(nèi)SOD、GSH-Px、CAT酶活力檢測(cè)
        5.3.6 斑馬魚(yú)體內(nèi)MDA含量檢測(cè)
        5.3.7 酪氨酸羥化酶活性檢測(cè)
        5.3.8 數(shù)據(jù)分析
    5.4 結(jié)果與分析
        5.4.1 斑馬魚(yú)對(duì)毛蕊花糖苷的耐受劑量分析
        5.4.2 毛蕊花糖苷對(duì)PD斑馬魚(yú)行為學(xué)的影響
        5.4.3 毛蕊花糖苷對(duì)PD斑馬魚(yú)MDA含量的影響
        5.4.4 毛蕊花糖苷對(duì)PD斑馬魚(yú)抗氧化酶活性的影響
        5.4.5 毛蕊花糖苷對(duì)PD斑馬魚(yú)黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的影響
    5.5 本章小結(jié)
第六章 毛蕊花糖苷對(duì)6-OHDA誘導(dǎo)的PD斑馬魚(yú)的保護(hù)作用機(jī)制研究
    6.1 引言
    6.2 實(shí)驗(yàn)材料
        6.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        6.2.2 試劑與耗材
        6.2.3 主要儀器
    6.3 實(shí)驗(yàn)方法
        6.3.1 斑馬魚(yú)的飼養(yǎng)
        6.3.2 配魚(yú)與魚(yú)卵收集
        6.3.3 總RNA提取
        6.3.4 反轉(zhuǎn)錄
        6.3.5 RT-PCR
        6.3.6 斑馬魚(yú)幼魚(yú)毛蕊花糖苷暴露處理
        6.3.7 斑馬魚(yú)成魚(yú)毛蕊花糖苷腹腔注射處理
        6.3.8 UHPLC-PDA分析
        6.3.9 伊文思藍(lán)染色
        6.3.10 數(shù)據(jù)分析
    6.4 結(jié)果與分析
        6.4.1 毛蕊花糖苷對(duì)NRF2基因轉(zhuǎn)錄的影響
        6.4.2 毛蕊花糖苷對(duì)Nrf2下游Ⅱ相解毒酶基因轉(zhuǎn)錄的影響
        6.4.3 毛蕊花糖苷對(duì)PD相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄的影響
        6.4.4 毛蕊花糖苷對(duì)血腦屏障透過(guò)性的研究
        6.4.6 毛蕊花糖苷對(duì)已受損血腦屏障的影響
    6.5 本章小結(jié)
第七章 全文總結(jié)、創(chuàng)新點(diǎn)及展望
    7.1 全文總結(jié)
    7.2 創(chuàng)新點(diǎn)
    7.3 展望
參考文獻(xiàn)
附錄
個(gè)人簡(jiǎn)介
攻讀博士期間主要科研成果
攻讀博士期間獲獎(jiǎng)情況



本文編號(hào)：4025050