【摘要】：目的缺血性腦卒中是人類(lèi)主要死亡原因之一,同時(shí)它也是致使成年人肢體殘障的重要因素。在此,我們以氧糖剝奪/復(fù)氧復(fù)糖(Oxygenglucose deprivation/Reoxygen,OGD/R)為模型探討長(zhǎng)鏈非編碼RNA(LncRNA)Snhg12在腦缺氧缺糖損傷中的作用以及信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制。方法以原代神經(jīng)元細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。使用PCR檢測(cè)Snhg12在各不同處理的原代神經(jīng)元中的表達(dá)。應(yīng)用原位雜交實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Snhg12在原代神經(jīng)元內(nèi)的定位。神經(jīng)元細(xì)胞毒性損傷程度以及存活率使用MTT比色分析實(shí)驗(yàn)、乳酸脫氫酶(LDH)活力測(cè)定實(shí)驗(yàn)、Western blot檢測(cè)Bcl-2/Bax來(lái)分析。Western blot檢測(cè)下游靶基因Akt的表達(dá)改變。結(jié)果OGD/R處理對(duì)原代神經(jīng)元造成細(xì)胞毒性作用:LDH釋放增加死亡率上升、存活率下降,且損傷隨著缺氧缺糖和復(fù)氧復(fù)糖時(shí)間的增加而加重。其中以缺氧缺糖12h和復(fù)氧復(fù)糖24h對(duì)原代神經(jīng)元細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞毒性損傷最為顯著。Snhg12在OGD12h/R24h處理后表達(dá)水平達(dá)到最高。Snhg12在原代神經(jīng)元的細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中均大量廣泛表達(dá)。Snhg12敲減后的原代神經(jīng)元在OGD/R處理后,細(xì)胞毒性損傷增加:LDH釋放增加死亡率上升、存活率下降、Bcl-2水平下降、Bax水平升高、Bcl-2/Bax比值下降。Snhg12敲減組原代神經(jīng)元細(xì)胞在OGD/R處理后,Akt總水平不變、p-Akt減少、p-Akt/Akt比值下降。結(jié)論OGD/R處理導(dǎo)致原代神經(jīng)元細(xì)胞毒性損傷,Snhg12在細(xì)胞遭受OGD/R損傷后顯著升高產(chǎn)生保護(hù)作用,且Snhg12通過(guò)調(diào)節(jié)Akt磷酸化從而介導(dǎo)OGD/R誘導(dǎo)的原代神經(jīng)元毒性損傷的保護(hù)。
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R743
【圖文】：

13圖 1. 原代神經(jīng)元細(xì)胞接種后不同時(shí)間光鏡下的形態(tài)改變Figure 1. Changes of primary neuron under optical microscope-OGD 組接種后 2h。b.Non-OGD 組接種后 4h。c.Non-OGD 組接種后 1 天。d.No后 3 天。e. Non-OGD 組接種后 7 天。f. OGD12h/R24h 組接種后 7 天。 不同缺氧缺糖和復(fù)氧復(fù)糖時(shí)間誘導(dǎo)原代神經(jīng)元產(chǎn)生細(xì)胞毒性損傷了驗(yàn)證 OGD/R 處理對(duì)原代神經(jīng)元產(chǎn)生細(xì)胞毒性損傷的影響。我們控與缺氧缺糖時(shí)間中的一項(xiàng)不變，改變另一項(xiàng)，運(yùn)用 MTT 比色分析實(shí)驗(yàn)和測(cè)定實(shí)驗(yàn)檢測(cè) OGD/R 對(duì)原代神經(jīng)元產(chǎn)生的細(xì)胞毒性損傷。BLANK 組性對(duì)照組，Non-OGD 組為未經(jīng) OGD/R 處理的對(duì)照組。氧缺糖時(shí)間分別為 2h、4h、8h、12h，復(fù)氧復(fù)糖時(shí)間為 24h。LDH 活顯示各組死亡率為 0.85 0.16%（Non-OGD）、35.97 3.11%（OGD2h/R

15圖 2. 不同缺氧缺糖和復(fù)氧復(fù)糖時(shí)間誘導(dǎo)原代神經(jīng)元產(chǎn)生細(xì)胞毒性損傷Figure 2. Different time of OGD/R induces neuronal damagea. 控制缺氧缺糖時(shí)間分別為 2h、4h、8h、12h，復(fù)氧復(fù)糖時(shí)間為 24h，檢測(cè)各組 LDH 釋放程度，即細(xì)胞死亡率（**p<0.01）。b. 控制缺氧缺糖時(shí)間分別為 2h、4h、8h、12h，復(fù)氧復(fù)糖時(shí)間為 24h，MTT 比色分析實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組神經(jīng)元存活率（**p<0.01）c. 控制復(fù)氧復(fù)糖時(shí)間分別為 6h、12h、24h，缺氧缺糖時(shí)間為 12h，檢測(cè)各組 LDH 釋放程度，即細(xì)胞死亡率（**p<0.01）d. 控制復(fù)氧復(fù)糖時(shí)間分別為 6h、12h、24h，缺氧缺糖時(shí)間為 12h，MTT 比色分析實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組神經(jīng)元存活率（**p < 0.01）。1.4 討論在臨床上，腦卒中是圍術(shù)期非常嚴(yán)重的并發(fā)癥，發(fā)病率在0.05%-7%，也是患者在圍術(shù)期死亡的重要原因之一。在心臟以及腦部手術(shù)中，腦卒中的發(fā)生的主要機(jī)制是灌注不足、栓塞和血液稀釋[11-13]。在非心臟及腦部手術(shù)中，機(jī)制主要有：

圖 3. pGMLV-SC5 RNAi 慢病毒載體Figure 3. Lentiviral vector針對(duì)本課題需要的目標(biāo)基因靶基因序列，設(shè)計(jì) 3 個(gè) shRNA 靶點(diǎn)（表 8）表 8. 針對(duì)目標(biāo)基因靶基因序列設(shè)計(jì) 3 個(gè) shRNA 靶點(diǎn)Table 8. Target sequencesNO. TargetSeq1 GCCTTGTACTTCTACCCAACG2 GGACAACGATACAGCAGAAGG3 GCCTGGCCTACATTGAGAAAC設(shè)計(jì)合成 shRNA 寡聚單鏈 DNA，Oligo 序列見(jiàn)表 9。

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 梁君銘;曾寬;鄒堂斌;;S1P通路在膽鹽所致HL-7702細(xì)胞毒性損傷中的作用[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新;2015年20期

2 王曉虹;孫長(zhǎng)凱;王蘇平;范明;丁愛(ài)石;吳燕;馬輝;王祿;;谷胱甘肽抗谷氨酸誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元損傷鈣超載機(jī)制研究[J];中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué);2006年01期

3 袁傳順;陳吉慶;陸超;徐莉;陳新躍;杜娟;張子前;;不同模式光療對(duì)高膽紅素血癥新生兒的影響[J];江蘇醫(yī)藥;2009年08期

4 張子理;扶正補(bǔ)血膏和扶正補(bǔ)血沖劑臨床療效對(duì)比觀察[J];蘭州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1995年02期

5 李保森;孫穎;;藥物性肝損傷的研究現(xiàn)狀及存在問(wèn)題[J];傳染病信息;2013年05期

6 彭雙清,鄒玉寶,劉洪英,宮澤輝;刺尾魚(yú)毒素細(xì)胞毒性損傷特征與細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)[J];中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志;2003年04期

7 王驍;劉泉波;;抗結(jié)核藥物性肝損害機(jī)制的研究進(jìn)展[J];兒科藥學(xué)雜志;2019年12期

8 任光民,趙鳴武,唐朝樞;香煙煙霧提取物對(duì)兔氣道平滑肌細(xì)胞毒性損傷及對(duì)一氧化氮生成的影響[J];徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1998年03期

9 張飛飛;陳玉英;王占祥;;腦出血干預(yù)相關(guān)因子研究進(jìn)展[J];福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2011年02期

10 馬驕;俞丹;毛萌;童煜;;神經(jīng)絲氨酸蛋白酶抑制劑對(duì)新生大鼠神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用[J];實(shí)用兒科臨床雜志;2010年24期

相關(guān)會(huì)議論文 前2條

1 王桂斌;劉運(yùn)海;;依達(dá)拉奉對(duì)缺血缺氧酸中毒誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性損傷分子機(jī)制研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十七次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下）[C];2014年

2 阮鋒凱;張永興;何承勇;;黑磷量子點(diǎn)誘導(dǎo)氧化應(yīng)激和細(xì)胞周期阻滯介導(dǎo)肺細(xì)胞毒性損傷[A];2019全國(guó)呼吸毒理與衛(wèi)生毒理學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2019年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 方琪;凝血酶對(duì)實(shí)驗(yàn)鼠腦細(xì)胞毒性損傷機(jī)制的研究[D];蘇州大學(xué);2002年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前5條

1 程燕詠;Snhg12在腦缺氧缺糖損傷中的作用及機(jī)制研究[D];上海交通大學(xué);2018年

2 鄧皓月;白藜蘆醇通過(guò)誘導(dǎo)自噬改善Aβ_(25-35)引起的神經(jīng)細(xì)胞損傷的作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2016年

3 甘燕青;�；撬釋�(duì)內(nèi)毒素性心肌損傷的保護(hù)作用及機(jī)制初步研究[D];南華大學(xué);2014年

4 唐莎;自噬在氟致人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞毒性損傷中的作用研究[D];華中科技大學(xué);2017年

5 王姍姍;苦馬豆素致BRL-3A細(xì)胞毒性損傷及“棘防E號(hào)”和Fe~(2+)保護(hù)效應(yīng)研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2014年

本文編號(hào)：2772688