【摘要】：目的:神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚,并缺乏有效的治療手段。外側(cè)韁核(LHb)是一個(gè)“反獎(jiǎng)賞”核團(tuán),疼痛慢性化是一個(gè)獎(jiǎng)勵(lì)缺失的過(guò)程,但LHb在神經(jīng)病理性疼痛中發(fā)揮的作用尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)旨在研究LHb谷氨酸能神經(jīng)元在神經(jīng)病理性疼痛中的作用,為L(zhǎng)Hb作為治療神經(jīng)病理性疼痛的靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法與結(jié)果:[1]在體神經(jīng)元放電記錄發(fā)現(xiàn),在坐骨神經(jīng)部分損傷(PSL)和眶下神經(jīng)部分損傷(p-IONX)誘導(dǎo)的軀體和口面部神經(jīng)病理性疼痛模型小鼠(C57BL/6J)中,LHb谷氨酸能神經(jīng)元自發(fā)放電頻率和簇狀(burst)放電比假手術(shù)組小鼠呈顯著性增加。PSL模型組小鼠的外周傷害性刺激激活的神經(jīng)元百分比明顯高于假手術(shù)組。[2]將pAAV-CaMKIIα-eArchT-eYFP病毒注入C57BL/6J小鼠LHb,用黃光特異性抑制LHb谷氨酸能神經(jīng)元,不影響假手術(shù)組小鼠的機(jī)械感受閾值,但可以顯著性增加PSL以及p-IONX小鼠雙側(cè)后爪機(jī)械痛閾值。在條件性位置偏愛(ài)實(shí)驗(yàn)中,假手術(shù)組和手術(shù)組小鼠在給光側(cè)箱子的時(shí)間都增加,表現(xiàn)出對(duì)給光側(cè)的偏愛(ài)。[3]將 pAAV-CaMKIIα-hChR2(H 134R)-eYFP 病毒注入 C57BL/6J 小鼠LHb,用藍(lán)光特異性激活LHb谷氨酸能神經(jīng)元,對(duì)假手術(shù)組和PSL小鼠后爪的機(jī)械痛閾值無(wú)影響。但在條件性位置偏愛(ài)實(shí)驗(yàn)中,假手術(shù)組小鼠在給光側(cè)箱子的時(shí)間減少,表現(xiàn)出對(duì)給光側(cè)箱子的厭惡,而在模型組動(dòng)物沒(méi)有誘導(dǎo)出條件性位置偏愛(ài)。[4]將 pAAV-CaMKIIα-hM4Di-mCherry注入 C57BL/6J 小鼠右側(cè) LHb,給予CNO(1 mg/kg)抑制LHb谷氨酸能神經(jīng)元,能抬高p-IONX小鼠口面部及左側(cè)后爪機(jī)械痛閾值。[5]在LHb內(nèi)植入電極,在PSL術(shù)后第1天到第7天給予LHb 1 Hz低頻電刺激,能顯著性地增加左側(cè)后爪機(jī)械痛閾值。結(jié)論:生理?xiàng)l件下,LHb谷氨酸能神經(jīng)元能感知痛覺(jué)信息的傳入,參與編碼痛覺(jué)的厭惡情緒成分,而不參與編碼感覺(jué)成分。神經(jīng)病理性疼痛時(shí),LHb谷氨酸能神經(jīng)元活性增加,抑制其活性能減輕脊神經(jīng)損傷誘發(fā)的軀體部位和眶下神經(jīng)部分切斷誘發(fā)的口面部及擴(kuò)散性神經(jīng)病理性機(jī)械痛覺(jué)超敏。研究表明,LHb在神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生中發(fā)揮重要作用,LHb可以作為治療神經(jīng)病理性疼痛的一個(gè)潛在治療靶點(diǎn)。
【圖文】：

光遺傳學(xué)方法，特異性激活ＬＨｂ谷氨酸能神經(jīng)元，觀察對(duì)神經(jīng)病理性疼痛的影響。逡逑我們?cè)阱澹茫担罚拢蹋叮叔逍∈笥覀?cè)邋ＬＨｂ邋注射邋ｐＡＡＶ－ＣａＭＫＩＩｏｔ－ｈＣｈＲ２（Ｈ１３４Ｒ）－ｅＹＦＰ邋病毒逡逑（圖３Ａ），使ＬＨｂ谷氨酸能神經(jīng)元表達(dá)ＣｈＲ２。單細(xì)胞神經(jīng)元放電記錄發(fā)現(xiàn)，２０逡逑Ｈｚ的藍(lán)光能夠激活ＬＨｂ的谷氨酸能神經(jīng)元（圖３Ｂ），，證明ＣｈＲ２功能性表達(dá)在逡逑ＬＨｂ的谷氨酸能神經(jīng)元上。逡逑疼痛行為學(xué)測(cè)試發(fā)現(xiàn)，與不給光照組相比，不論是手術(shù)前還是手術(shù)后，光照均逡逑不改變小鼠兩側(cè)后爪的機(jī)械痛閾值（圖３Ｃ和Ｄ）。在條件性位置偏愛(ài)實(shí)驗(yàn)中，ｓｈａｍ逡逑組小鼠在給光側(cè)停留時(shí)間減少（Ｐ＜０．０５），表現(xiàn)出對(duì)給光側(cè)的厭惡，而光照不改變逡逑ＰＳＬ手術(shù)組對(duì)兩側(cè)箱子的偏愛(ài)（圖３Ｅ）。以上結(jié)果提示，選擇性激活ＬＨｂ谷氨酸逡逑能神經(jīng)元不影響小鼠的機(jī)械痛閾值，但在ｓｈａｍ組小鼠中引起厭惡情緒。逡逑１９逡逑

手術(shù)前，對(duì)照組與光照組小鼠左右側(cè)后爪的機(jī)械痛閾值無(wú)顯著差異。在術(shù)后第逡逑７、１１和１４天，光照組的機(jī)械痛閾值均顯著高于對(duì)照組（Ｐ＜０．０５，邋０．０１或０．０００１，逡逑圖６Ｃ和Ｄ）。在左側(cè)后爪，術(shù)后第７天的機(jī)械痛閾值對(duì)照組為０．２２５±０．０７２ｇ（ｎ＝ｌｌ），逡逑光照組為邋０．７５８±０．１８０ｇ邋（ｎ＝１２）；術(shù)后第邋１１邋天對(duì)照組為邋０．２０９±０．０７０ｇ邋（ｎ＝ｌｌ），光逡逑照組為邋０．６９４±０．１７２ｇ邋（ｎ＝１２）；術(shù)后第邋１４邋天對(duì)照俎為邋０．１２３土０．０４２ｇ邋（ｎ＝ｌｌ），光照逡逑組為０．７１８±０．１１０ｇ邋（ｎ＝１２）（圖６Ｃ）。在右側(cè)后爪，術(shù)后第７天的機(jī)械痛閾值對(duì)照逡逑組為邋０．２３６±０．０７０ｇ邋（ｎ＝ｌｌ），光照組為邋０．７７０±０．１４７ｇ邋（ｎ＝１２）；手術(shù)后第邋１１邋天對(duì)照逡逑組為邋０．１６５±０．０５７ｇ邋（ｎ＝ｌｌ），光照組為邋０．６７９±０．１４４ｇ邋（ｎ＝１２）；手術(shù)后第邋１４邋天對(duì)照逡逑組為０．１３８±０．０３９邋ｇ（ｎ＝ｌｌ），光照組為０．３８７±０．０６７邋ｇ（ｎ＝１２）。以上結(jié)果表明，選逡逑擇性抑制ＬＨｂ谷氨酸能神經(jīng)元能減輕ｐ－ＩＯＮＸ后同側(cè)和對(duì)側(cè)的擴(kuò)散性機(jī)械痛覺(jué)超逡逑敏。逡逑２５逡逑
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R741.02

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本文編號(hào)：2652811