研究背景:膀胱癌是發(fā)病率最高的人類(lèi)泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤,其中以膀胱移行上皮癌最為常見(jiàn)。目前,對(duì)于晚期膀胱腫瘤仍缺乏有效的治療方法。腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL),因其可以特異性地殺傷腫瘤細(xì)胞而不傷及正常細(xì)胞,故被認(rèn)為是一種有效的抗腫瘤藥物。然而,膀胱腫瘤細(xì)胞可產(chǎn)生對(duì)TRAIL的耐藥性。近年來(lái)的研究表明,在多種腫瘤細(xì)胞系中,穿心蓮內(nèi)酯(Andrographolide)具有增強(qiáng)TRAIL誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用。然而,聯(lián)合應(yīng)用TRAIL和穿心蓮內(nèi)酯的治療方法尚未被應(yīng)用于治療膀胱腫瘤,其具體分子機(jī)制也有待進(jìn)一步研究。目的:為證實(shí)穿心蓮內(nèi)酯可作為T(mén)RAIL的有效增敏劑,可以用來(lái)克服人膀胱癌細(xì)胞對(duì)TRAIL的耐藥。進(jìn)一步研究穿心蓮內(nèi)酯與TRAIL聯(lián)合應(yīng)用,增強(qiáng)TRAIL誘導(dǎo)人膀胱癌細(xì)胞凋亡能力的分子機(jī)制。方法:在生物信息學(xué)分析部分,基于TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)、Oncomine數(shù)據(jù)庫(kù)中膀胱上皮癌的mRNA表達(dá)數(shù)據(jù),分析目的基因在腫瘤和癌旁正常組織中的表達(dá)差異。利用基因集富集分析(Gene set enrichment analysis,GSEA),評(píng)估預(yù)先定義的基因集與特定表型的相關(guān)程度。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)部...

【文章頁(yè)數(shù)】：104 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
英文縮略詞
第1章 緒論
    1.1 膀胱癌背景知識(shí)
        1.1.1 膀胱癌概況
        1.1.2 膀胱癌治療方法簡(jiǎn)介
    1.2 腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體的背景知識(shí)
        1.2.1 腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體與腫瘤的關(guān)系
        1.2.2 TRAIL和其相關(guān)的受體分子
        1.2.3 TRAIL誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡信號(hào)通路
        1.2.4 細(xì)胞對(duì)于TRAIL的敏感性和抵抗性
    1.3 穿心蓮內(nèi)酯的背景知識(shí)
        1.3.1 穿心蓮內(nèi)酯簡(jiǎn)介
        1.3.2 穿心蓮內(nèi)酯的抗腫瘤活性
    1.4 穿心蓮內(nèi)酯與其他藥物的協(xié)同作用
    1.5 結(jié)語(yǔ)與前景展望
第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)耗材
    2.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.4 生物信息學(xué)分析方法
        2.4.1 目的基因mRNA表達(dá)差異分析
        2.4.2 基因共表達(dá)分析部分
        2.4.3 GSEA基因集富集分析
    2.5 體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)部分
        2.5.1 細(xì)胞培養(yǎng)條件
        2.5.2 MTS法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力
        2.5.3 細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力
        2.5.4 MTS法測(cè)定藥物IC50(半數(shù)抑制濃度)值
        2.5.5 MTS法檢測(cè)細(xì)胞活力
        2.5.6 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
        2.5.7 細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)
        2.5.8 BCA法標(biāo)定蛋白樣品濃度
        2.5.9 免疫蛋白印跡實(shí)驗(yàn)(Western blot assays)
        2.5.10 實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)
        2.5.11 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率
        2.5.12 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)檢測(cè)方法
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 生物信息學(xué)分析部分
        3.1.1 mRNA表達(dá)差異分析
        3.1.2 單基因的基因集富集分析結(jié)果
        3.1.3 mRNA共表達(dá)表達(dá)相關(guān)性分析
        3.1.4 蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)預(yù)測(cè)
    3.2 體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)部分
        3.2.1 在多種膀胱癌細(xì)胞系中TRAIL的IC50值測(cè)定
        3.2.2 在多種膀胱癌細(xì)胞系中穿心蓮內(nèi)酯的IC50值測(cè)定
        3.2.3 在多種膀胱癌細(xì)胞系中應(yīng)用各濃度TRAIL對(duì)細(xì)胞活力的影響
        3.2.4 在多種膀胱癌細(xì)胞系中應(yīng)用各濃度穿心蓮內(nèi)酯對(duì)細(xì)胞活力的影響
        3.2.5 聯(lián)合應(yīng)用TRAIL和穿心蓮內(nèi)酯對(duì)T24細(xì)胞活力的影響
        3.2.6 聯(lián)合應(yīng)用TRAIL和穿心蓮內(nèi)酯對(duì)5637細(xì)胞和UM-UC3細(xì)胞活力的影響
        3.2.7 聯(lián)合應(yīng)用TRAIL和穿心蓮內(nèi)酯對(duì)T24細(xì)胞增殖能力的影響
        3.2.8 聯(lián)合應(yīng)用TRAIL和穿心蓮內(nèi)酯對(duì)T24細(xì)胞克隆形成能力的影響
        3.2.9 聯(lián)合應(yīng)用TRAIL和穿心蓮內(nèi)酯對(duì)T24細(xì)胞遷移能力的影響
        3.2.10 應(yīng)用穿心蓮內(nèi)酯可增強(qiáng)TRAIL誘導(dǎo)的T24細(xì)胞凋亡
        3.2.11 聯(lián)合用藥誘導(dǎo)T24細(xì)胞死亡依賴(lài)于半胱天冬酶家族(Caspase family)
        3.2.12 穿心蓮內(nèi)酯通過(guò)上調(diào)死亡受體表達(dá)量來(lái)增強(qiáng)TRAIL誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡
        3.2.13 沉默DR4或DR5的基因表達(dá)可削弱聯(lián)合用藥對(duì)T24細(xì)胞的殺傷效果
        3.2.14 在T24細(xì)胞中穿心蓮內(nèi)酯上調(diào)DR4和DR5基因的表達(dá)依賴(lài)于P53基因
        3.2.15 在T24細(xì)胞中沉默P53基因的表達(dá)可削弱聯(lián)合用藥對(duì)細(xì)胞活力的抑制
        3.2.16 在T24細(xì)胞中沉默P53基因可降低聯(lián)合用藥誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡比率
        3.2.17 在T24細(xì)胞中穿心蓮內(nèi)酯通過(guò)抑制RelA增強(qiáng)TRAIL誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡
        3.2.18 抑制NF-κB的活性可增強(qiáng)TRAIL誘導(dǎo)的T24細(xì)胞凋亡和細(xì)胞活力抑制
        3.2.19 抑制NF-κB通路可提高TRAIL誘導(dǎo)的5637、UM-UC3細(xì)胞的凋亡比率
        3.2.20 聯(lián)合應(yīng)用穿心蓮內(nèi)酯可提高TRAIL誘導(dǎo)的5637、UM-UC3細(xì)胞的凋亡比率
    3.3 結(jié)果討論
第4章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介以及攻讀博士期間的科研成果
致謝



本文編號(hào)：4039774