本文關鍵詞：燈盞花素對胰島素抵抗大鼠骨骼肌脂肪酸代謝的影響及作用機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:前期研究發(fā)現(xiàn),燈盞花素對2型糖尿病及高脂血癥有明顯改善作用。本實驗通過高脂高糖喂養(yǎng),誘導胰島素抵抗(IR)大鼠模型。通過口服糖耐量試驗,觀察空腹血糖(FBG)、空腹血清胰島素(FINS)、胰島素抵抗指數(shù)(IRI),評價模型建立;燈盞花素作用2周后,檢測血清及骨骼肌中游離脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)含量,觀察并判定骨骼肌組織脂質(zhì)沉積情況;測定骨骼肌中長鏈脂酰輔酶A(Lcco As)水平,及脂肪酸轉(zhuǎn)位酶(FAT/CD36)、肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶(CPT-1)蛋白水平及m RNA表達差異,探討燈盞花素對IR、骨骼肌脂質(zhì)沉積及脂肪酸代謝的改善情況及作用機制。方法:健康雄性SD大鼠55只,適應性喂養(yǎng)一周,禁食12h測FBG,選正常大鼠50只。隨機分為正常組(10只)、高脂高糖組(40只),分別喂養(yǎng)普通飼料和高脂高糖飼料;12周后,行大鼠口服糖耐量實驗(50%葡萄糖,2g/kg,灌胃)。篩選成模大鼠30只,隨機分為模型組、燈盞花素高劑量組(200mg/kg,ip)、燈盞花素低劑量組(100mg/kg,ip),每組10只,分別給藥2周,正常組、模型組以同樣方式,給予相同劑量0.9%Na Cl注射液。14周末,各組大鼠禁食12 h,尾部采血測FBG,10%水合氯醛麻醉,腹主動脈取血,分離股四頭肌組織;離心分離血清,檢測血清中FINS水平,并評價胰島素抵抗指數(shù);試劑盒測定血清及組織中FFA、TG變化;冰凍切片油紅O染色,觀察骨骼肌組織脂質(zhì)沉積情況;酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測血清Lcco As濃度的變化;western blot觀察FAT/CD36、CPT-1在股四頭肌的蛋白表達水平;常規(guī)PCR測定FAT/CD36、CPT-1的m RNA含量。結(jié)果:(1)大鼠FBG、FINS、IRI變化:14周后,大鼠FBG、FINS、IRI,模型組均明顯高于正常組(P0.01);燈盞花素高、低劑量組各水平均低于模型組(P0.01);與低劑量組相比,高劑量組效果更顯著(P0.01),有明顯劑量依賴性。說明高脂高糖飲食,使大鼠出現(xiàn)高血糖、高胰島素血癥,明顯出現(xiàn)IR,燈盞花素可明顯降低FBG、FINS,改善IR。(2)油紅O染色結(jié)果:模型組大鼠出現(xiàn)大量的脂滴,脂肪沉積明顯(P0.01)。燈盞花素高、低劑量組較模型組有不同程度改善(P0.05),高劑量組改善效果更明顯(P0.01)。提示高脂高糖飲食使大鼠骨骼肌脂肪增多,出現(xiàn)明顯脂質(zhì)沉積,燈盞花素干預后癥狀明顯改善。(3)組織、血清內(nèi)FFA、TG結(jié)果:模型組血清、骨骼肌內(nèi)FFA、TG明顯升高(P0.01);與模型組相比,燈盞花素高、低劑量組FFA均有明顯降低(P0.01);與低劑量組相比,高劑量組TG明顯降低(P0.01)。14周喂養(yǎng),大鼠出現(xiàn)高甘油三酯、高脂肪酸血癥,燈盞花素可顯著降低高脂血癥。(4)骨骼肌Lcco As結(jié)果:與正常組比較,模型組大鼠Lcco As水平明顯增加(P0.01);用藥后,與模型組比較,燈盞花素高、低劑量組大鼠Lcco As水平降低(P0.01),高劑量組改善更為明顯(P0.01)。Lcco As為長鏈脂肪酸在細胞內(nèi)的活性形式,IR大鼠Lcco As含量升高,說明細胞內(nèi)攝入的長鏈脂肪酸增多,燈盞花素可以改善此酶的活性,抑制其攝入。(5)FAT/CD36蛋白及m RNA結(jié)果:FAT/CD36在股四頭肌的表達,模型組比正常組表達增多(P0.01);與模型組比較,燈盞花素高、低劑量組表達不同程度改變(P0.01),其中高劑量組表達改變最明顯(P0.01),且有劑量依賴性。FAT/CD36介導脂肪酸進入細胞,IR大鼠FAT/CD36含量增加,說明脂肪酸攝入增多,而燈盞花素能抑制其攝入增多。(6)CPT-1蛋白及m RNA結(jié)果:與正常組相比,模型組CPT-1蛋白及m RNA表達明顯減少(P0.01);燈盞花素高、低劑量組相較于模型組,CPT-1蛋白及m RNA均增加(P0.01)。CPT-1是線粒體氧化脂肪酸的關鍵限速酶,IR大鼠CPT-1蛋白及m RNA明顯減少,脂肪酸氧化減少,而燈盞花素治療使其表達增加,脂肪酸氧化增多,改善糖脂代謝紊亂。結(jié)論:(1)高脂高糖飲食可以成功復制胰島素抵抗大鼠模型。(2)胰島素抵抗大鼠,血清及骨骼肌中FFA、TG明顯升高,股四頭肌出現(xiàn)明顯脂質(zhì)沉積。(3)胰島素抵抗大鼠模型,骨骼肌中與脂肪酸攝入相關的FAT/CD36及Lcco As含量增加,而氧化必須的CPT-1表達減少。(4)燈盞花素可降低FBG、FINS,改善IR;減少FFA、TG含量,改善骨骼肌脂質(zhì)堆積情況;其機制可能與降低Lcco As、FAT/CD36,增加CPT-1的表達相關。
【關鍵詞】：燈盞花素 胰島素抵抗 FAT/CD36 LccoAs CPT-1
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R285.5
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 常用縮寫詞中英文對照表12-13
• 前言13-15
• 1 材料與方法15-27
• 1.1 實驗動物15
• 1.2 主要試劑和儀器15-16
• 1.3 模型制備與標本采集16-17
• 1.4 指標檢測17-26
• 1.5 結(jié)果處理26-27
• 2 結(jié)果27-31
• 2.1 模型評價結(jié)果27
• 2.2 FBG、FINS及IRI水平比較27-28
• 2.3 油紅O染色結(jié)果28
• 2.4 大鼠血清、組織FFA、TG含量28-29
• 2.5 股四頭肌組織Lcco As含量29
• 2.6 western blot檢測FAT/CD36、CPT-1 的水平29-30
• 2.7 常規(guī)PCR測定FAT/CD36、CPT-1 的mRNA含量變化30-31
• 3 討論31-33
• 4 結(jié)論33-34
• 參考文獻34-37
• 附圖37-45
• 綜述45-55
• 參考文獻50-55
• 附錄55-57
• 致謝57-58
• 在學期間承擔/參與的科研課題與研究成果58-59
• 個人簡歷59

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本文編號：323798