【摘要】：[目的]利用急性腦片全細胞膜片鉗記錄、神經(jīng)藥理學和組織化學染色技術(shù),研究尿皮素Ⅱ(UCN Ⅱ)對大鼠下丘腦室旁核(PVN)小細胞分泌神經(jīng)元的自發(fā)性放電活動和谷氨酸能突觸傳遞的影響機制。[方法]實驗動物選用出生后14-21天(P14-P21)的Wistar系雄性大鼠,用異氟烷吸入麻醉后,迅速斷頭取腦,然后用振動切片機來制備含PVN的下丘腦切片,切片厚度為250微米。在24-25攝氏度條件下,將下丘腦切片置于沖95%02和5%CO2混合氣體的人工腦脊液(ACSF)中孵育60分鐘以上。ACSF有以下組分(毫摩爾):NaCl(118),KCl(3),MgCl2.6H2O(1),NaH2P04.2H20(1),NaHCO3(25),D-Glucose(10),CaCll2(2)。PH值在 7.25-7.35 之間,滲透壓為295-300mOsM。記錄電極內(nèi)含10微升的電極內(nèi)液,其組分如下(毫摩爾):120 Potassium Gluconate,10 HEPES,1 EGTA,5 KCl,3.5 MgCl2,4 NaCl,8 biocytin,4Na2ATPan 0.2 Xa2GTP。加KOH將pH值調(diào)到7.3。電極的阻抗為5-7兆歐。通過膜片鉗放大器(Axopatch-700B)及數(shù)據(jù)采集軟件記錄PVN神經(jīng)元細胞自發(fā)性放電活動;通過微量泵將UCNⅡ注射到記錄神經(jīng)元周圍300-500微米處,以活化記錄神經(jīng)元的傳入纖維;在記錄自發(fā)性和電刺激誘發(fā)的興奮性突觸后電流時,ACSF中加入GABAA受體阻斷劑Picrotoxin,以阻斷GABA能突觸傳遞;電生理實驗數(shù)據(jù)分析采用Clampf it 10.4軟件.各組數(shù)據(jù)均用Mean 士 SEM表示,n代表樣本數(shù).數(shù)據(jù)統(tǒng)計學分析采用SPSS軟件,均數(shù)的比較采用配對T檢驗分析,P0.05被認為有顯著性差異.[結(jié)果](1)在電流鉗下,PVN的小細胞分泌神經(jīng)元對注入去極化電流敏感,但不表現(xiàn)出明顯的內(nèi)向整流電流和超極化活化的內(nèi)向(Ih)電流。(2)局部微量注射UCN Ⅱ(100 nM)可導(dǎo)致51.6%的PVN小細胞型分泌神經(jīng)細胞的放電頻率顯著升高,沖洗20分鐘以后恢復(fù)到給藥前水平。(3)UCNⅡ?qū)ψ园l(fā)性放電頻率的作用隨著給藥濃度的升高而加強,具有明顯的濃度依存性,半數(shù)有效劑量為143.3 nM。(4)局部注射給予UCN引起的部分PVN小細胞神經(jīng)細胞的發(fā)電頻率升高和膜去極化作用可以被非選擇性的離子型谷氨酸受體的阻斷劑(kynurenin acid,KYC)所阻斷。(5)在GABAA受體阻斷劑Picrotoxin存在下,UCN顯著增加自發(fā)性興奮性突觸后電流的發(fā)生頻率,增強其振幅幅度。(6)此外,UCN Ⅱ可顯著增加雙電刺激誘發(fā)的第一個興奮性突觸后電流的振幅(P1),明顯降低了 P2/P1的比率。[結(jié)論]UCN Ⅱ通過增強興奮性谷氨酸能突觸傳入來增強下丘腦PVN小細胞分泌神經(jīng)元的興奮性,增加其自發(fā)性放電的頻率,提示UCN通過間接方式調(diào)節(jié)PVN小細胞分泌神經(jīng)元的活動。
【學位授予單位】：延邊大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R338

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本文編號：2740556