【摘要】：【研究目的】 本實驗通過檢測小鼠外周血細胞因子表達水平的變化及肝組織病理學變化等方法，旨在研究紅景天苷預處理對刀豆蛋白A誘導的肝損傷小鼠是否具有保護作用，并探討其在刀豆蛋白A誘導肝損傷模型中可能的免疫機制。 【研究方法】 1.將C57BL/6雄性小鼠隨機分為3組：生理鹽水（normal saline， NS）組：經小鼠尾靜脈注射生理鹽水100μl，1h后再次經尾靜脈注射生理鹽水100μl。刀豆蛋白A(concanavalineA，ConA)組：經小鼠尾靜脈注射生理鹽水100μl，1h后經尾靜脈注射刀豆蛋白A(20mg/kg，100μl)。紅景天苷(salidroside，SAL)組：經小鼠尾靜脈注射紅景天苷(50mg/kg，100μl)，1h后經尾靜脈注射刀豆蛋白A(20mg/kg，100μl)。 2.各組小鼠每組各10只，尾靜脈最后一次注射12h時，在七氟烷麻醉下，經心臟采血，采用全自動生化分析儀技術檢測小鼠血漿中谷丙轉氨酶（alanineaminotransferase, ALT）和谷草轉氨酶（aspartate aminotransferase, AST）水平。安爾碘消毒皮膚，經腹中線開腹，取出小鼠肝臟組織，行HE染色，在光學顯微鏡下觀察小鼠肝臟損傷程度。 3.各組小鼠每組各10只，尾靜脈最后一次注射12h時，在七氟烷麻醉下，經心臟采血，置入抗凝管冷存；取出肝組織及脾臟進行研磨，采用流式細胞術檢測小鼠外周血、肝臟及脾臟研磨液中CD4+T和CD8+T淋巴細胞計數。 4.各組小鼠每組各10只，尾靜脈最后一次注射12h時，在七氟烷麻醉下，經心臟采血，采用血漿酶聯免疫吸附法檢測小鼠外周血TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-10濃度；取出肝臟組織采用實時熒光定量PCR法檢測肝臟組織中TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-10以及CXCL-10mRNA表達水平。 5.各組小鼠每組各10只，尾靜脈最后一次注射12h時，在七氟烷麻醉下，取出肝臟組織，采用Western蛋白印跡方法檢測NF-κB p65與IκBα的蛋白表達水平。 【結果】 1. Con A組外周血中ALT、AST表達水平均顯著高于NS組(P均小于0.01)；SAL組外周血中ALT、AST表達水平均顯著低于Con A組(P均小于0.01)；SAL組與NS組之間外周血中ALT、AST表達水平均無統(tǒng)計學差異（P均大于0.05）。小鼠肝臟組織病理切片在光學顯微鏡下顯示，NS組小鼠肝細胞形態(tài)無異常，肝小葉結構完整；ConA組小鼠肝組織大片及亞大片壞死，細胞壞死、腫脹嚴重；SAL組肝臟病變程度較刀豆蛋白A對照組顯著減輕。各組小鼠肝臟病理切片光學顯微鏡下評分統(tǒng)計分析提示，ConA組評分顯著高于NS組(P0.01)；SAL組評分明顯低于Con A組(P0.01); SAL組評分顯著高于NS組(P0.01)。 2.采用流式細胞術檢測小鼠外周血、肝臟及脾臟組織結果顯示，Con A組小鼠外周血中CD4+T及CD8+T淋巴淋巴細胞計數均顯著低于NS組(P均小于0.01)，肝臟組織中CD4+T及CD8+T淋巴淋巴細胞計數均顯著高于NS組(P均小于0.01)，脾臟組織中CD4+T及CD8+T淋巴淋巴細胞計數均顯著低于NS組(P均小于0.01)；SAL組小鼠外周血中CD4+T及CD8+T淋巴淋巴細胞計數與Con A組均無統(tǒng)計學差異(P均大于0.05)，肝臟組織內CD4+T及CD8+T淋巴細胞計數均顯著低于Con A組(P均小于0.01)，脾臟組織中CD4+T及CD8+T淋巴計數均明顯高于Con A組(P均小于0.01)；SAL組小鼠外周血中CD4+T及CD8+T淋巴淋巴細胞計數均顯著低于NS組(P均小于0.01)，肝臟組織內CD4+T淋巴細胞計數顯著高于NS組(P0.01)而CD8+T淋巴細胞計數與NS組之間無統(tǒng)計學差異(P0.05)，脾臟組織中CD4+T及CD8+T淋巴計數均明顯低于NS組(P均小于0.05)。 3．采用酶聯免疫吸附法檢測小鼠外周血結果顯示， Con A組中TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-10水平顯著高于NS組（P均小于0.01)；SAL組中上述指標均顯著低于Con A組（P均小于0.01)。采用RT-PCR法檢測小鼠肝臟組織結果顯示，，Con A組中TNF-α、IFN-γ、IL-6、CXCL-10mRNA表達水平顯著高于NS組（P均小于0.01),IL-10mRNA顯著低于NS組（P0.01）；SAL組中TNF-α、IFN-γ、IL-6、CXCL-10mRNA顯著低于Con A組（P均小于0.01)，IL-10mRNA顯著高于Con A組（P0.05）。 4.采用western蛋白印跡法檢測小鼠肝組織結果顯示，SAL組小鼠肝臟組織中NF-κB p65及IκBα蛋白表達明顯低于Con A組。 【結論】 紅景天苷預處理可顯著減輕刀豆蛋白A誘導的小鼠肝損傷，其機制可能與紅景天苷抑制趨化因子CXCL-10mRNA表達減少CXCL-10的分泌，降低CD4+T及CD8+T淋巴細胞在肝臟組織浸潤，以及抑制NF-κB p65和IκBα表達水平，調控TNF-α、IFN-γ、IL-6及IL-10等炎癥因子分泌有關。
【圖文】：

紅景天苷預處理對刀豆蛋白 A 誘導小鼠肝損傷的結 果景天苷預處理對刀豆蛋白 A 誘導肝損傷小酶及谷草轉氨酶的影響最后一次尾靜脈注射后12h時，外周血經自動生化儀檢測血漿 ALT、AST 的水平均明顯高于 NS 組（P 均小于 0.0T、AST 水平均顯著低于 Con A 組（P 均小于 0.01），而大于＞0.05) （圖 1，圖 2）。

天苷預處理對刀豆蛋白 A 誘導肝損傷小鼠外周血谷草轉水組；Con A：刀豆蛋白 A 組；SAL：紅景天苷組。與 NS 組相比，P<0.01。紅景天苷預處理對刀豆蛋白 A 誘導小鼠肝響微鏡下，NS 組肝臟組織病理切片可見肝小葉結構完整，A）。Con A 組肝組織大面積壞死，肝細胞氣球樣變，表現變，匯管區(qū)明顯有大量淋巴細胞浸潤（圖 3B）。SAL 組肝死，但肝小葉仍舊存在，偶有不完整情況存在，匯管區(qū)亦（圖 3C）。
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 ;Signal molecule-mediated hepatic cell communication during liver regeneration[J];World Journal of Gastroenterology;2009年46期

2 ;Immune mechanisms of Concanavalin A model of autoimmune hepatitis[J];World Journal of Gastroenterology;2012年02期

本文編號：2699945