本文關(guān)鍵詞：Mdx小鼠骨骼肌中炎癥反應(yīng)和mpeg1的表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:進(jìn)行性肌營養(yǎng)不良(progressive muscular dystrophy,PMD)是一組以進(jìn)行性加重的肌無力、肌萎縮為主要臨床表現(xiàn)的遺傳性骨骼肌疾病的總稱。由于患者編碼肌細(xì)胞相關(guān)蛋白的基因變異,造成蛋白缺陷或功能障礙,導(dǎo)致肌細(xì)胞的完整性遭到破壞,其中Duchenne肌營養(yǎng)不良(Duchenne muscular dystrophy,DMD)在各類肌營養(yǎng)不良中發(fā)病率最高,約為1/3500男嬰,且無地域和種族間明顯差異。DMD是一種X連鎖隱性遺傳性疾病,其致病基因位于X染色體的Xp21區(qū),為編碼dystrophin蛋白的基因發(fā)生缺失、插入和點突變,dystrophin蛋白的功能缺失引起肌纖維的變性和壞死。女性多為致病基因攜帶者,發(fā)病者罕見,且癥狀較輕。DMD發(fā)病年齡偏小,起病隱襲,且病死率高,受到廣泛關(guān)注。目前關(guān)于DMD的發(fā)病機(jī)制尚不清楚,涉及到很多常見的機(jī)制,例如鈣離子內(nèi)流,炎癥細(xì)胞浸潤,促炎和促進(jìn)纖維化細(xì)胞因子的激活,各種蛋白水解酶的活化,自噬的缺陷和細(xì)胞凋亡等。研究顯示局部的炎癥反應(yīng)是肌肉纖維化和脂肪組織滲透的觸發(fā)點,最終導(dǎo)致肌細(xì)胞纖維化并由脂肪組織替代,失去功能。在炎癥反應(yīng)中,巨噬細(xì)胞浸潤起著關(guān)鍵作用,如激活的巨噬細(xì)胞能產(chǎn)生NO來裂解肌細(xì)胞,同時作為主要的促炎因子,通過激活蛋白水解酶系統(tǒng)和抑制肌肉再生引起肌肉萎縮等。巨噬細(xì)胞表達(dá)基因1(Macrophage expressed gene 1,mpeg1)是首個被發(fā)現(xiàn)高表達(dá)于人類和鼠科動物巨噬細(xì)胞內(nèi)的基因。先前的實驗顯示在斑馬魚中轉(zhuǎn)入mpeg1基因后巨噬細(xì)胞系反應(yīng)明顯增加,這就使得嗜中性粒細(xì)胞與巨噬細(xì)胞得以分別被研究,說明mpeg1特異性表達(dá)于巨噬細(xì)胞內(nèi)。C57BL/10Sc Sn Dmd mdx/JNju小鼠(X-linked muscular dystrophy mouse,X-連鎖肌萎縮小鼠,簡稱mdx小鼠)為編碼dystrophin蛋白的3185位基因自發(fā)突變,使該位點編碼谷氨酰胺的密碼子變成了終止密碼子,導(dǎo)致基因的表達(dá)提前終止,造成其編碼的蛋白縮短。該模型鼠與DMD患者有相同的遺傳基礎(chǔ),已經(jīng)被廣泛用于DMD研究的各個領(lǐng)域。本實驗欲通過組織化學(xué)染色方法觀察mdx小鼠不同骨骼肌的病理改變,利用基因芯片技術(shù)篩選與炎癥相關(guān)基因在疾病不同時期的動態(tài)表達(dá),進(jìn)一步通過實時定量PCR(q RT-PCR)技術(shù)觀察mpeg1在mdx小鼠及對照鼠中的表達(dá)。探討巨噬細(xì)胞相關(guān)性炎癥在mdx小鼠中的作用,進(jìn)而通過抑制巨噬細(xì)胞相關(guān)性炎癥反應(yīng)來改善肌肉質(zhì)量,為DMD提供新的治療靶點。方法:選取雄性C57BL/10Sc Sn-Dmdmdx/JNju鼠(購于南京大學(xué)模式動物研究所)為實驗組,對照組為雄性C57BL/6Sc Sn小鼠,根據(jù)年齡分為2w、4w、8w、12w。每組各時間點選取6只,3只用于常規(guī)組織化學(xué)染色,3只用于基因芯片檢測和q RT-PCR測定。以10%水合氯醛(350mg/Kg體重)腹腔注射麻醉,取小鼠股四頭肌、腓腸肌、脛骨前肌、肱二頭肌、心肌,進(jìn)行包埋冰凍處理。設(shè)置切片厚度為8um,做連續(xù)切片。分別對冰凍切片行常規(guī)染色,包括HE染色、MGT染色、ACP染色觀察其光鏡下的形態(tài)學(xué)變化,總結(jié)mdx小鼠骨骼肌炎性病理變化;小鼠麻醉后,取小鼠股四頭肌迅速投入液氮冷凍,之后保存于-80℃冰箱,用于m RNA提取,基因芯片的檢測及mpeg1的q RT-PCR檢測,結(jié)果應(yīng)用spss13.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。結(jié)果:1利用常規(guī)組織化學(xué)方法,我們觀察到2w的mdx小鼠股四頭肌、腓腸肌、脛骨前肌和肱二頭肌中肌細(xì)胞大小基本一致,偶見高度濃染的肌纖維,未見肌細(xì)胞壞死,炎癥細(xì)胞浸潤;4w可見巨噬細(xì)胞吞噬現(xiàn)象散在分布,偶見小灶樣分布;8w時炎細(xì)胞浸潤灶融合成片,12w時炎性病灶面積減小;mdx小鼠心肌中未見到變性、壞死和炎細(xì)胞浸潤;同齡對照鼠各骨骼肌中未見上述病理改變;2利用基因芯片技術(shù)對mdx小鼠股四頭肌進(jìn)行m RNA測定,篩選出有關(guān)炎癥反應(yīng)的基因30余個,結(jié)果顯示與2w相比,炎癥反應(yīng)相關(guān)基因隨疾病進(jìn)展表達(dá)量增加,在8w時達(dá)到峰值,12w有所下降,但較2w時仍有升高,差別具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);3利用q RT-PCR技術(shù)對mpeg1基因進(jìn)行定量分析,結(jié)果顯示在2w時,mdx小鼠與對照鼠之間mpeg1的含量無差別;從4w開始,mdx小鼠中mpeg1的含量逐漸增加,8w時含量最高,與對照鼠同周齡間差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),但mdx小鼠4w、8w、12w之間表達(dá)量差別無統(tǒng)計學(xué)意義;而對照鼠各周齡間差別無統(tǒng)計學(xué)意義;結(jié)論:1炎癥反應(yīng)參與mdx小鼠疾病的發(fā)生發(fā)展:從2周開始出現(xiàn),8周達(dá)到高峰,12周趨于平穩(wěn);2 Mpeg1在mdx小鼠炎癥反應(yīng)中發(fā)揮了一定的作用。
【關(guān)鍵詞】：Duchenne肌營養(yǎng)不良 mdx小鼠 炎癥反應(yīng) 病理特點 基因芯片 mpeg1
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R746.2
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-18
• 結(jié)果18-20
• 附圖20-25
• 附表25-26
• 討論26-30
• 結(jié)論30
• 參考文獻(xiàn)30-35
• 綜述 肌營養(yǎng)不良的發(fā)病機(jī)制35-48
• 參考文獻(xiàn)41-48
• 致謝48-49
• 個人簡歷49

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