發(fā)布時間：2017-06-03 08:19

  本文關鍵詞：模擬微重力對變異鏈球菌生長、產(chǎn)酸及合成胞外多糖影響的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究發(fā)現(xiàn),微重力環(huán)境下一些條件致病菌的毒力和致病性增加或減弱。齲病是在以細菌為主的多種因素作用下發(fā)生的口腔常見疾病,其中變異鏈球菌是目前公認的主要致齲菌之一。本研究旨在觀察模擬微重力環(huán)境對變異鏈球菌的生長、形態(tài)學、產(chǎn)酸能力、合成胞外多糖能力及gtfs mRNA表達的影響,探討模擬微重力環(huán)境下變異鏈球菌致齲能力的變化,為維護航天員的口腔健康提供實驗依據(jù)。采用高截面縱橫比容器(high aspect ratio vessel,HARV)建立模擬微重力細菌培養(yǎng)模型。模擬微重力組及對照組分別在培養(yǎng)2h、4h、6h、8h、10h、12h、16h、20h和24 h時取菌懸液,用分光光度計測定菌液的OD600nm吸光度值。每組設3個樣本,實驗重復3次,取平均值,繪制生長曲線,觀察模擬微重力環(huán)境對變異鏈球菌生長的影響。模擬微重力組及對照組分別在培養(yǎng)24 h時取菌懸液,收集菌體,固定后采用掃描電鏡和透射電鏡觀察模擬微重力環(huán)境下變異鏈球菌形態(tài)學的變化。模擬微重力組及對照組培養(yǎng)24h時,用精密pH計測定菌液的pH值,并計算pH的變化值ΔpH(即初始pH值減去培養(yǎng)24h時菌液pH值)。每組設3個樣本,實驗重復3次,取平均值。通過ΔpH間接反映模擬微重力環(huán)境對變異鏈球菌產(chǎn)酸能力的影響。模擬微重力組及對照組培養(yǎng)24h時,利用稀釋涂布平板法測定兩組樣本中的細菌量,采用蒽酮法測定兩組樣本中水溶性多糖(water soluble glucan,WSG)和水不溶性多糖(water insoluble glucan,WIG)的含量,計算細菌合成胞外多糖的能力:細菌合成胞外多糖的能力=合成胞外多糖的量/細菌的量,觀察模擬微重力對變異鏈球菌合成水不溶性及水溶性胞外多糖能力的影響。模擬微重力組及對照組培養(yǎng)24h時,分別收集模擬微重力及對照組菌液,通過實時熒光定量PCR(real-time quantitative PCR,Q-PCR)方法檢測模擬微重力對變異鏈球菌的gtfsmrna表達的影響。本文獲得主要結果如下:1.模擬微重力組及對照組均生長良好,具有靜止期、對數(shù)生長期和平臺期,生長曲線呈類似“s”形。模擬微重力條件下變異鏈球菌培養(yǎng)2h~4h后進入對數(shù)生長期,約12h進入平臺期;對照組在4h后才進入對數(shù)生長期,16h進入平臺期。經(jīng)統(tǒng)計學分析,模擬微重力組與對照組相比,2h、4h、6h、8h、10h和12h的od600nm值升高,其差異有統(tǒng)計學意義(p0.05);16h、20h和24h的od600nm值無明顯變化,其差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。掃描電鏡圖片顯示,與對照組相比,模擬微重力組變異鏈球菌有較明顯的形態(tài)學改變。對照組細菌形態(tài)規(guī)則,結構完整,呈球桿狀,表面不光滑,菌體之間存在較多的不定形膠凍樣物質,模擬微重力組菌體表面較光滑,細菌間的不定形物質明顯少于對照組。透射電鏡觀察可見微重力環(huán)境下變異鏈球菌的超微結構有顯著改變。對照組可見細菌莢膜、細胞壁、細胞膜結構清晰完整,形態(tài)正常,分裂后的細菌形態(tài)對稱;模擬微重力組細菌的莢膜部分減少,分裂狀態(tài)下的細菌兩極不對稱。2.培養(yǎng)24h時,模擬微重力組及正常對照組的Δph的差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。模擬微重力條件下變異鏈球菌合成水溶性和水不溶性胞外多糖的量均少于對照組細菌的產(chǎn)糖量,具有統(tǒng)計學意義(p0.05),合成水溶性和水不溶性胞外多糖的能力較對照組相比均有明顯抑制,具有統(tǒng)計學意義(p0.05)。3.模擬微重力環(huán)境下培養(yǎng)24h時,變異鏈球菌gtfb,gtfc,gtfdmrna表達均明顯降低,與對照組之間均有顯著差異(p0.05)。基于以上結果,本文得出如下結論:1.模擬微重力環(huán)境下變異鏈球菌生長的靜止期縮短,對數(shù)期提前,模擬微重力環(huán)境培養(yǎng)2h~12h時變異鏈球菌具有生長加快的趨勢。模擬微重力環(huán)境下變異鏈球菌有較明顯的形態(tài)學改變。2.模擬微重力環(huán)境下培養(yǎng)24h時,變異鏈球菌菌液的ph值無明顯變化,變異鏈球菌合成水溶性和水不溶性胞外多糖的能力受到明顯抑制。3.模擬微重力環(huán)境下培養(yǎng)24h時,變異鏈球菌gtfB,gtfC,gtf D mRNA表達受到明顯的抑制作用。
【關鍵詞】：模擬微重力 變異鏈球菌 生長 胞外多糖
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R781.1
【目錄】：

• 英文縮略詞表6-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-16
• 實驗一 模擬微重力對變異鏈球菌生長及形態(tài)學的影響16-24
• 1 引言16
• 2 材料與方法16-19
• 3 結果19-21
• 4 討論21-23
• 5 結論23-24
• 實驗二 模擬微重力對變異鏈球菌產(chǎn)酸及合成胞外多糖能力的影響24-32
• 1 引言24
• 2 材料與方法24-27
• 3 結果27-29
• 4 討論29-31
• 5 結論31-32
• 實驗三 模擬微重力對變異鏈球菌gtfs mRNA表達的影響32-41
• 1 引言32
• 2 材料與方法32-36
• 3 結果36-38
• 4 討論38-40
• 5 結論40-41
• 全文總結41-43
• 參考文獻43-47
• 附錄47-49
• 致謝49-50
• 綜述50-57
• 參考文獻55-57

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 周學東,黃正蔚,李繼遙,肖悅,劉天佳;黃芩對三種主要致齲菌生長、產(chǎn)酸及產(chǎn)胞外多糖的影響[J];華西醫(yī)科大學學報;2002年03期

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本文編號：417643