發(fā)布時間：2024-06-15 01:33

　　因腫瘤、外傷、放射性骨壞死、骨髓炎、牙周炎或先天疾病等導致的顱頜面骨缺損直接影響口腔頜面部修復，頜骨缺損修復時新骨形成的質量、速度和長期穩(wěn)定性與種植義齒修復息息相關。多年來，臨床醫(yī)師和研究者們嘗試利用自體或異體骨移植、人工骨移植、細胞或／和生長因子介導的組織工程技術、屏障膜及骨牽張等臨床技術，在修復頜骨或牙槽骨缺損方面取得了一定的成效。近年來，骨缺損修復的理念更傾向于——結合細胞及活性分子的骨支架材料植入機體后能引導及促進機體自身組織的再生修復，因此，設計模仿骨再生生理機制的骨缺損修復方案至關重要。根據顱頜面膜內成骨的特點，我們選擇了在骨缺損修復初期能促進血管再生的堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)，和在骨缺損修復中后期能調控其下游信號通路促進新骨再生的信號分子SonicHedgehog(Shh)，目的是通過對這兩種關鍵因子的調控，模擬機體骨缺損修復過程，探尋理想的促頜骨缺損修復方案。方法是利用腺相關病毒高效穩(wěn)定的感染效率及四環(huán)素調控系統(tǒng)對外源基因的開關作用，構建重組病毒rAAV2-Shh及rAAV2-tet-off-bFGF；將兩種病毒共同感染原代培養(yǎng)的大鼠骨髓間充質干細胞；繼而將這...

【文章頁數(shù)】：168 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1.1.1重組質拉示意圖

2.2穩(wěn)定細胞株的建立按GIBCO舊RL產品說明書提供的方法，用Lipofeetamine2000將pSNAV2.0一Shh質粒轉染六孔板中的BHK一21細胞，24h后用800m留LG418選擇培養(yǎng)。待抗性克隆生長至孔底面積的二分之一左右時，用胰酶消化，繼續(xù)用G418選擇培養(yǎng)直至....

圖1.1‘ZpBlueseriptSKll一Shh經&oRI和介nl雙酶t)J鑒定Ml:DNAMarker2000

3.2重組質粒pSNAV2.0一Shh的鑒定PCR產物電泳結果顯示能從質粒pBltlescriPtsKI卜Sllh_}幾擴增出l.4kb的特異條帶(圖1.1.3);將此特異條帶垂組至lJ質粒PSN八VZ.o上幾，構建幣組質粒psNAVZ.O一Shh;隨淚L挑取轉化菌落的陽性克隆....

圖11.5斤oRI和L\.azl雙酶切鑒定重組質粒pSNAVZ.o一shrlMl:DN八Marker2000

斤oRI和L\.azl雙酶切鑒定重組質粒pSNAVZMl:DN八Marker2000入12:DNANlarker15000l:l直落樣品1中提取的psN八v2.()一shrl2:l宜落樣品2「掃提取的psN八v2.()一sh一13:菌落樣品3，護提取的psN八VZ.o一shh測層....

圖I.16r八AvZ一shll的505一P八GE純度分析

250020001000.5斤oRI和L\.azl雙酶切鑒定重組質粒pSNAMl:DN八Marker2000入12:DNANlarker15000l:l直落樣品1中提取的psN八v2.()一2:l宜落樣品2「掃提取的psN八v2.()一3:菌落樣品3，護提取的psN八VZ.o一測....

本文編號：3994720