目的分離并培養(yǎng)C57BL/6J-TgN (chickenβ-actin-EGFP) ZLFILAS小鼠羊膜干細胞(amnion-derived stem cells, ADSCs),并探索其特性。ADSCs具有多潛能分化和自我更新的能力,并能分泌神經營養(yǎng)因子營養(yǎng)支持神經元存活。通過移植小鼠ADSCs至APPswe/PS1AE9 (PAP)雙轉基因模型小鼠海馬內,檢測PAP小鼠認知功能,明確小鼠ADSCs對PAP小鼠認知功能的影響并進行初步的機制探討研究,為干細胞移植治療探尋新的細胞來源,并對ADSCs治療AD的基礎研究和臨床應用提供依據(jù)。方法無菌條件下機械分離C57BL/6J-TgN (chickenβ-actin-EGFP) ZLFILAS小鼠羊膜,并采用0.25%胰蛋白酶-EDTA的消化,應用高糖-DMEM培養(yǎng)基(添加10gg/L人表皮生長因子)培養(yǎng)。取2-4代小鼠ADSCs,免疫熒光方法檢測干細胞表面標記物：性別決定區(qū)Y框蛋白(sex determining region Y box 2, SOX-2)、八聚體結合轉錄因子4 (octamer-binding transcripti...

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
綜述
    參考文獻
前言
第一部分 小鼠羊膜干細胞體外分離及其特性研究
    材料與方法
        1. 材料
            1.1 實驗動物
            1.2 主要儀器設備
            1.3 主要試劑
            1.4 主要抗體
            1.5 溶液配制
        2. 實驗方法
            2.1 ADSCs分離及培養(yǎng)
            2.2 免疫熒光細胞染色檢測細胞表面標記物
            2.3 流式細胞術檢測ADSCs表面標記物
    結果
        1. ADSCs體外培養(yǎng)
        2. ADSCs表達干細胞表面標記物及表達神經營養(yǎng)因子BDNF、NGF
        3. 流式細胞術檢測ADSCs表面標記物
    討論
    小結
第二部分 ADSCs移植改善APPswe/PS1△E9小鼠認知功能的研究
    材料和方法
        1. 材料
            1.1 實驗動物
            1.2 主要儀器
            1.3 主要試劑
            1.4 主要抗體
            1.5 主要試劑配制方法
        2. 實驗方法
            2.1 轉基因動物的鑒定
            2.2 ADSCs移植
            2.3 行為學檢測
            2.4 小鼠腦組織取材
            2.5 腦組織海馬蛋白提取、濃度鑒定
            2.6 免疫組織化學及硫黃素-S熒光染色
            2.7 ELISA檢測Aβ含量
            2.8 Western blotting實驗步驟
            2.9 統(tǒng)計方法
    結果
        1. APPswe/PS1△E9小鼠基因型的鑒定
        2. BDNF在6月齡AD模型小鼠和WT小鼠海馬內分泌情況
        3. ADSCs移植并在腦內存活
        4. 行為學檢測小鼠空間學習記憶能力和自主活動及焦慮狀態(tài)情況
        5. 檢測腦組織海馬內膠質細胞激活情況
        6. 腦組織海馬內BDNF、Synaptophysin蛋白水平變化
        7. 腦組織內APP、Aβ42、Aβ40及P-Tau(Thr231)蛋白水平變化
        8. ADSCs移植后小鼠腦內APPswe/PS1△E9小鼠腦內老年斑沉積情況
        9. ADSCs移植后對小鼠腦形態(tài)和結構的影響
        10. ADSCs移植后對小鼠腦內神經元的影響
    討論
    小結
全文總結
參考文獻
縮略詞語
個人簡介及發(fā)表文章
致謝



本文編號：4048262