【摘要】：目的：研究通天草提取物對老年癡呆(AD)大鼠的保護作用及機制。 方法：通天草提取物由本實驗室提取并制成水提物和醇提物。將初篩后的大鼠隨機分成以下8組：陰性對照組、假手術(shù)組、AD模型組、西藥治療組、通天草醇提物低劑量組和高劑量組、水提物低劑量組和高劑量組。采用腦內(nèi)注射Aβ1-40(10μg/鼠),建立大鼠老年癡呆模型,然后給予通天草提取物治療28d。采用Morris水迷宮實驗檢測大鼠的學(xué)習(xí)記憶等行為學(xué)能力；采用HE染色和透射電鏡對海馬組織進行病理學(xué)檢測；血清中GSH-Px和T-SOD的活力以及MDA含量采用分光光度法進行測定；采用ELISA法檢測血清中IL-1、IL-6、TNF-α的水平；采用免疫組織化學(xué)方法檢測nNOS、iNOS、bcl-2、bax、GFAP蛋白的表達；采用RT-PCR法檢測海馬組織中NF-κB、IκB、H SP70、APP和BACE1mRNA的表達。 結(jié)果 1、通過Morris水迷宮實驗和病理學(xué)檢測結(jié)果,可以肯定本實驗成功建立了Aβ誘導(dǎo)的AD大鼠模型。主要表現(xiàn)為逃避潛伏期明顯延長AD模型組為(45.5±6.25)s,明顯高于陰性對照組(24.5±5.75)s。AD模型組的穿越跳臺次數(shù)(1.7±0.89)明顯低于陰性對照組(3.2±1.27)。透射電鏡結(jié)果顯示,AD模型組海馬神經(jīng)元細胞間隔增大,突觸明顯減少,突觸小泡融合,腫脹明顯；神經(jīng)元細胞皺縮明顯,核膜皺縮并出現(xiàn)階段性融合,核形異常,異染色質(zhì)聚集,細胞器如線粒體、核糖體、溶酶體損傷明顯,脂褐素異常增多 2、通天草提取物能明顯改善AD大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。低、高劑量的醇提物投予動物后,能以劑量依賴方式明顯縮短大鼠的逃避潛伏期,分別為(34.5±7.25)s和(24.0±6.5)s,與AD模型組(45.5±7.3)比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義；高劑量醇提物的降低作用與西藥治療組相似。同時通天草提取物各組均在不同程度上增加了大鼠穿越跳臺的次數(shù),高劑量醇提物的作用尤為明顯 3、病理學(xué)HE染色結(jié)果可見,高劑量醇提物作用組大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元細胞數(shù)量較AD模型組明顯增多,神經(jīng)元細胞核形態(tài)及排列緊密度上均明顯改善,類似于西藥治療組。透射電鏡可見,與AD模型組大鼠海馬神經(jīng)元細胞(細胞膜、細胞器等)的明顯損傷相比,西藥治療組神經(jīng)元細胞間界限清晰,連接較緊密,核形基本正常,核糖體、線粒體結(jié)構(gòu)基本正常,脂褐素增多不明顯,但仍可見毛細血管及星形膠質(zhì)細胞腫脹；高劑量的通天草水提物和醇提物組海馬神經(jīng)元細胞皺縮不明顯,突觸數(shù)量有一定的增加,神經(jīng)元細胞核尚欠規(guī)則,低劑量醇提物組可見大量的自噬體存在。 4、血清學(xué)檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),通天草提取物各組能明顯抑制血清中Aβ1-40水平,與AD模型組(316.8±28.2pg/mL)相比,差異有顯著性(p0.05,p0.01),醇提物的作用更明顯。通天草醇提物(高、低劑量)和水提物高劑量組能明顯降低MDA水平,同時增加GSH-Px的活性；通天草提取物各組均能增加T-SOD的活性,與AD模型組比較,差異顯著(p0.01,p0.05)。血清學(xué)炎癥因子(IL-1、IL-6、TNF-α)檢測結(jié)果顯示,通天草提取物各組均能在一定程度上降低Aβ誘發(fā)的炎癥因子分泌,特別是高劑量醇提物對各炎癥因子的抑制作用更加明顯。 5、大鼠海馬組織的免疫組化結(jié)果顯示,通天草提取物能抑制Aβ誘導(dǎo)的海馬GFAP蛋白的表達,誘導(dǎo)抗凋亡蛋白bcl-2同時抑制促凋亡蛋白bax蛋白的表達,使bcl-2/bax的比值增加。此外,高劑量的通天草提取物(醇提物和水提物)能明顯抑制誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)的表達,同時促進神經(jīng)元型一氧化氮合酶(nNOS)的表達 6、RT-PCR結(jié)果顯示,通天草提取物能明顯降低Aβ前體APP mRNA的表達,同時降低APP的β-裂解酶BACE1mRNA表達,高劑量醇提物的抑制作用尤為明顯。此外,通天草提取物(特別是醇提物)能明顯降低NF-κB mRNA的表達,同時增強其抑制因子IκB mRNA的表達。HSP70的表達在AD模型組并無顯著變化(與陰性對照組比較,p0.05)。 結(jié)論 1、采用腦內(nèi)注射Aβ蛋白,成功建立了Aβ誘導(dǎo)的AD大鼠模型。 2、通天草提取物能明顯改善AD大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力,高劑量醇提物的作用與西藥治療組相似。通天草提取物能部分改善Aβ對大鼠海馬神經(jīng)元細胞的病理學(xué)表現(xiàn)。通天草提取物能明顯抑制血清中Aβ1-40水平,該作用與抑制Aβ前體物APP mRNA的表達、降低APP裂解酶BACE1mRNA的表達有關(guān)。 3、通天草提取物保護AD大鼠的可能分子機制如下 (1)通過誘導(dǎo)GSH-Px和T-SOD的活性、抑制MDA生成而增強抗氧化能力; (2)通過抑制炎癥因子IL-1、IL-6和TNF-α的分泌,降低Aβ引起的炎性損傷,該作用與NF-κB/IκB調(diào)節(jié)通路及iNOS有關(guān)。 (3)通過誘導(dǎo)bcl-2蛋白同時抑制bax蛋白的表達,抑制海馬神經(jīng)細胞凋亡；通過抑制海馬星形膠質(zhì)細胞中GFAP蛋白的表達來增加神經(jīng)突觸的傳遞能力；通過誘導(dǎo)nNOS的表達來發(fā)揮神經(jīng)保護作用。
【學(xué)位授予單位】：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R285.5;R749.16

【引證文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 張賡;吳金娟;姜淼;翟玉祥;劉濤;;中醫(yī)藥治療阿爾茲海默病的研究進展[J];中國實驗方劑學(xué)雜志;2014年06期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 李嬌;三七總皂苷、梔子苷及其配伍對APP/PS1小鼠樹突棘損傷的保護作用及機制[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2014年

2 張賡;改良三甲散治療老年性癡呆病腦細胞損傷機制研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2014年

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本文編號：2563008