【摘要】：目的:子宮頸癌是全球第四常見的女性惡性腫瘤,是全球一項(xiàng)重大的健康挑戰(zhàn)。2015年統(tǒng)計(jì)調(diào)查發(fā)現(xiàn),低收入和中等收入國(guó)家中約有27萬例宮頸癌患者死亡,這些國(guó)家的死亡率是發(fā)達(dá)國(guó)家的18倍。盡管近年來宮頸癌篩查的覆蓋面在不斷擴(kuò)大,治療手段也隨著技術(shù)革新在進(jìn)步。但是對(duì)于HPV感染、宮頸癌前病變及宮頸癌的診斷的準(zhǔn)確性和治療的有效性仍存在較大的個(gè)體差異及局限性。青蒿素(Artemisinin,ARS)一直作為有效的抗瘧藥物為人們所熟知,研究表明其在抗癌、抗病毒、抗寄生蟲、抗真菌、過敏性炎癥、特異性炎癥、感染性炎癥以及白血病治療均有顯著效果。因此本研究擬從雙氫青蒿素的抗腫瘤的特性出發(fā),明確其對(duì)宮頸癌細(xì)胞的作用及其機(jī)制。方法:1.收集宮頸炎癥組織,低級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變(Low-grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)、高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變(High-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)、宮頸鱗狀細(xì)胞癌(Cervical squamous cell carcinoma)組織共172例。使用免疫組化方法檢測(cè)不同級(jí)別宮頸病變組織中ki67、p16表達(dá)水平。2.使用宮頸癌HeLa細(xì)胞系作為宮頸癌細(xì)胞離體模型,CCK-8利用細(xì)胞活性和細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)測(cè)定離體水平雙氫青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)作用宮頸癌細(xì)胞的50%抑制濃度(Half maximal inhibitory concentration,IC50值),及藥物對(duì)宮頸癌細(xì)胞的增值能力的影響。使用western blot檢測(cè)細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白及遷徙相關(guān)蛋白的表達(dá)水平;使用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢檢測(cè)雙氫青蒿素對(duì)于宮頸癌細(xì)胞遷移能力的影響。通過western blot檢測(cè)藥物處理后HeLa細(xì)胞中ki67、p16的表達(dá)情況,探究青蒿素是否同時(shí)具有抵抗HPV病毒基因引起的宮頸細(xì)胞惡性增殖的藥物作用。結(jié)果:1.ki67、p16在不同宮頸組織中的陽性表達(dá)率如下:其中炎癥組p16的陽性表達(dá)率為11.11%(4/36),低級(jí)別宮頸上皮內(nèi)瘤變組的陽性表達(dá)率為60.00%(30/50),高級(jí)別宮頸上皮內(nèi)瘤變組的陽性表達(dá)率為94.34(50/53),宮頸癌組陽性表達(dá)率為100.00%(33/33)。其中炎癥組ki67的陽性表達(dá)率為30.56%(11/36),低級(jí)別宮頸上皮內(nèi)瘤變組的陽性表達(dá)率為56.00%(28/50),高級(jí)別宮頸上皮內(nèi)瘤變組的陽性表達(dá)率為94.34(50/53),宮頸癌組陽性表達(dá)率為100.00%(33/33)。不同級(jí)別宮頸病變組織中的p16、ki67的陽性表達(dá)率進(jìn)行比較(χ_1~2=87.474,P_10.001;χ_2~2=61.477,P_20.001),不同宮頸組織中p16、ki67的表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。P16、ki67的陽性表達(dá)率與宮頸組織病變等級(jí)呈正相關(guān)。2.雙氫青蒿素對(duì)HeLa細(xì)胞的藥物作用主要以下幾個(gè)方面:(1)CCK-8細(xì)胞增殖活力實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示青蒿素對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖呈時(shí)間和濃度依賴性抑制作用。經(jīng)計(jì)算測(cè)得青蒿素對(duì)于HeLa細(xì)胞的IC50值為22.86±3.765umol/l。(2)可通過線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑促進(jìn)HeLa細(xì)胞的凋亡。其中線粒體途徑中促凋亡蛋白clever-Caspase3、clever-Caspase9、clever-Caspase12表達(dá)量均上升,抑制凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl表達(dá)下降。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑中相關(guān)蛋白Chop表達(dá)量增多。(3)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)表明DHA抑制宮頸癌細(xì)胞的遷徙。雙氫青蒿素處理后,HeLa細(xì)胞中E-鈣粘蛋白表達(dá)量增加。(4)青蒿素可能存在抵抗HPV感染引起的細(xì)胞惡性增殖的作用。檢測(cè)藥物處理36小時(shí)后HeLa中ki67蛋白表達(dá)明顯減少,p16蛋白的表達(dá)增加。結(jié)論:雙氫青蒿素對(duì)宮頸癌的發(fā)生發(fā)展具有一定的抑制作用,有著廣闊的臨床應(yīng)用前景,可作為未來宮頸癌新型防治武器。
【圖文】：

圖①為正常對(duì)照組 HeLa 細(xì)胞放大 100 倍顯微鏡下圖像，圖②為圖①中方框區(qū)域放大圖像。圖③為實(shí)驗(yàn)組 20umol/L 的 DHA 處理 24 小時(shí)后 HeLa 細(xì)胞放大 100 倍顯微鏡下圖像，圖④為圖③中方框區(qū)域放大圖像。圖 B
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R737.33

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本文編號(hào)：2614907