本文關鍵詞：rhEPO對新型BPD模型肺發(fā)育及肺Bcl-2、Caspase-9表達的影響及意義

  更多相關文章： 支氣管肺發(fā)育不良 脂多糖 高氧 重組人促紅細胞生成素 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B

【摘要】：目的:(1)探討重組人促紅細胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)對新型支氣管肺發(fā)育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)模型新生大鼠肺組織病理改變及肺Bcl-2、Caspase-9蛋白和mRNA表達的影響。(2)探討磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路在重組人促紅細胞生成素保護新型BPD中的作用。方法:定期受孕SD大鼠分別于孕第15天孕囊內(nèi)注射脂多糖(LPS)或生理鹽水(NS);予NS者新生鼠分為A、B、C組,分別予空氣(氧濃度21%)、高氧、高氧+rh EPO處理,空氣處理組為對照組;予LPS者新生鼠分為D、E、F組,分別予高氧、高氧+rhEPO及高氧+rhEPO+LY294002處理。高氧即給予60%高氧暴露;C、E、F組分別于高氧暴露第1天起,隔天背部皮下注射rhEPO(1 200 IU/kg),F組于注射rhEPO前30min背部皮下注射LY294002(0.3 mg/kg),共7次。于實驗第1、7、14天每組隨機選取8只處死。采用HE染色觀察肺組織病理改變,RT-PCR和Western blot法檢測肺組織中BCL-2、Caspase-9 mRNA和蛋白的表達。結果:B、D組新生大鼠肺組織發(fā)生明顯病理改變,Caspase-9蛋白及mRNA表達增加,同時BCL-2蛋白及mRNA表達減少;C、E組肺組織病理變化明顯改善,Caspase-9蛋白及mRNA表達減少,同時BCL-2蛋白及mRNA表達增加;F組與E組比較,前者病理改變要差,Caspase-9蛋白及m RNA表達明顯增加,而BCL-2蛋白及mRNA表達明顯減少。肺組織BCL-2、Caspase-9蛋白和mRNA的表達于實驗第1、7、14天末各組間的差異均有統(tǒng)計學意義(P均0.05)。結論:宮內(nèi)炎性暴露和生后高氧干預均可引起支氣管肺發(fā)育不良,同時可導致肺組織BCL-2、Caspase-9 mRNA和蛋白表達發(fā)生明顯改變;rhEPO可明顯減輕肺組織病理改變,增加BCL-2表達,同時減少Caspase-9表達,LY294002抑制PI3K活性后可明顯降低rhEPO對新型BPD的保護作用,提示rhEPO可能通過減少肺細胞凋亡,最終改善肺發(fā)育,從而對新型BPD起一定的保護作用,其機制可能與PI3K/AKT信號轉導通路有關。
【關鍵詞】：支氣管肺發(fā)育不良 脂多糖 高氧 重組人促紅細胞生成素 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B
【學位授予單位】：桂林醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R722.1
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 英漢縮略詞對照表10-11
• 前言11-13
• 1 材料與方法13-33
• 1.1 實驗材料與儀器13
• 1.1.1 實驗動物13
• 1.2 主要實驗試劑13-18
• 1.2.1 主要藥品與試劑13-14
• 1.2.2 主要試劑的配制14-18
• 1.3 主要實驗儀器18-19
• 1.4 實驗方法19-33
• 1.4.1 動物模型的制備及標本收集19-21
• 1.4.1.1 雌雄大鼠合籠19
• 1.4.1.2 孕囊注射19-20
• 1.4.1.3 新型BPD動物模型的制備及分組20
• 1.4.1.4 高氧干預20-21
• 1.4.1.5 rhEPO干預和LY294002處理21
• 1.4.1.6 標本采集21
• 1.4.2 HE染色切片制作21-23
• 1.4.2.1 石蠟切片制作22
• 1.4.2.2HE染色22-23
• 1.4.3 RT-PCR法檢測肺組織Bcl-2、Caspase-9 mRNA表達23-28
• 1.4.3.1 肺組織RNA提取過程23-24
• 1.4.3.2 RNA純度、濃度及完整性測定24-25
• 1.4.3.3 逆轉錄25-26
• 1.4.3.4 PCR反應26-28
• 1.4.4 western blot法檢測肺組織Bcl-2、Caspase-9 蛋白表達28-33
• 1.4.4.1 肺組織總蛋白的提取28
• 1.4.4.2 BCA法測定蛋白質濃度28-29
• 1.4.4.3 凝膠配置29-31
• 1.4.4.4 蛋白樣品的處理及加樣31
• 1.4.4.5 SDS-PAGE電泳31
• 1.4.4.6 半干法轉膜31-32
• 1.4.4.7 免疫雜交32
• 1.4.4.8 蛋白質的檢測32-33
• 1.5 統(tǒng)計學分析33
• 2 結果33-40
• 2.1 肺組織病理形態(tài)學改變33-35
• 2.2 肺組織BCL-2 和caspase-9 mRNA的表達情況35-38
• 2.3 肺組織Bcl-2、Caspase-9 蛋白的表達情況38-40
• 3 討論40-46
• 4 結論46
• 參考文獻46-52
• 綜述52-62
• 參考文獻58-62
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術論文目錄62-63
• 致謝63-64

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1 張順業(yè),孫宗全,劉立新,哈斯朝努;Carvedilol attenuates CPB-induced apoptosis in dog heart: regulation of Fas/FasL and caspase-3 pathway[J];Chinese Medical Journal;2003年05期

2 姚克,王凱軍,徐雯,孫朝暉,申屠形超,邱培瑾;Caspase-3 and its inhibitor Ac-DEVD-CHO in rat lens epithelial cell apoptosis induced by hydrogen in vitro[J];Chinese Medical Journal;2003年07期

3 鄭廣瑛,張成,李志剛;Early activation of caspase-1 after retinal ischemia and reperfusion injury in mice[J];Chinese Medical Journal;2004年05期

4 張曉華,李兆申,屠振興,許國銘,龔燕芳,滿曉華;Therapeutic effect of Caspase-1 inhibitor on liver injury in experimental severe acute pancreatitis[J];Journal of Medical Colleges of PLA;2004年02期

5 高慧;鄒麗;;The Effects of Magnesium Sulfate on Fetal Rats of FGR and the Expression of Caspase-3 in the Placenta of Maternal Rat[J];華中科技大學學報(醫(yī)學英德文版);2005年06期

6 屈軍樂;潘文良;趙伶羚;孫磊;王小平;陳同生;;蟾酥靈誘導細胞內(nèi)caspase-3活化特性熒光分析[J];深圳大學學報(理工版);2008年03期

7 ;Analysis of in vivo patterns of caspase 3 gene expression in primary hepatocellular carcinoma and its relationship to p21~(WAF1) expression and hepatic apoptosis[J];World Journal of Gastroenterology;2000年03期

8 徐人歡 ,劉靜 ,徐豐 ,江舸 ,謝青 ,周霞秋 ,金由辛 ,王德寶;Activity identification of chimeric anti-caspase-3 mRNA hammerhead ribozyme in vitro and in vivo[J];Science in China(Series C:Life Sciences);2001年06期

9 黃偉;Caspase研究進展[J];國外醫(yī)學.輸血及血液學分冊;2001年04期

10 崔銀珠;Caspase抑制劑有望成為一類新藥[J];國外醫(yī)藥(合成藥 生化藥 制劑分冊);2002年03期

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1 Qiang Su;Lang Li;Yang-chun Liu;You Zhou;;Effect of metoprolol on myocardial apoptosis and caspase-9 activation after coronary microembolization in rats[A];中華醫(yī)學會第十五次全國心血管病學大會論文匯編[C];2013年

2 韓志君;蔣廷旺;唐裕杰;胡志德;孫懿;周曄;陳燕;谷明莉;鄧安梅;仲人前;;Caspase在原發(fā)性膽汁性肝硬化患者外周血單個核細胞的表達及其臨床意義[A];全國臨床免疫檢驗研討會暨第六屆全國臨床免疫學術會議論文匯編[C];2009年

3 葉月芳;周韌;;漢族人群caspase-10基因中可能存在一個新的微衛(wèi)星位點[A];中華醫(yī)學會病理學分會2005年學術年會論文匯編[C];2005年

4 ;Effect of atorvastatin on myocardial apoptosis and caspase-8 activation following coronary microembolization[A];第十三次全國心血管病學術會議論文集[C];2011年

5 ;The Effect of Theanine on the Expression of Survivin,Bax,Caspase-3 in the Hippocampus and the Ability of Spatial Learning and Memory after Global Cerebral Ischemia /Reperfusion in Rats[A];全國第三次麻醉藥理學術會議論文集[C];2012年

6 Ki Seong Eom;Gil-Saeng Jeong;Tae Young Kim;;Ophiobolin B inhibits proliferation of glioblastoma U87MG cells by inducing S phase arrest and caspase-dependent apoptosis[A];中國抗癌協(xié)會神經(jīng)腫瘤專業(yè)委員會第八屆學術會議論文集[C];2011年

7 鄧常清;唐映紅;李花;陳北陽;陳瑞芬;;補陽還五湯有效部位對局灶性腦缺血再灌注后caspase表達的作用[A];第六次全國中西醫(yī)結合血瘀證及活血化瘀研究學術大會論文匯編[C];2005年

8 鄭世營;葛錦峰;趙軍;蔣東;紀勇;邵峰;;Caspase活化的細胞凋亡在老年非小細胞肺癌組織中的表達[A];第八屆華東六省一市胸心血管外科學術會議論文匯編[C];2005年

9 吳小候;李俊;;Expression of TRAIL and caspase 3 and their significance in rat’s renal ischemia-reperfusion injury[A];第十五屆全國泌尿外科學術會議論文集[C];2008年

10 朱秋華;江煥峰;李佳;劉叔文;;新型Caspase-3抑制劑二氫吡咯衍生物的研究[A];第十屆全國抗炎免疫藥理學學術會議論文集[C];2010年

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1 一帆;caspase—8缺陷導致免疫紊亂[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2002年

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1 張放;阻斷NLRP3炎癥小體中Caspase-1活化治療小鼠急性胃潰瘍的實驗研究[D];第二軍醫(yī)大學;2015年

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4 楊銳;硬脂酰酪氨酸對非caspase依賴的細胞損傷的神經(jīng)保護作用及其機制研究[D];上海交通大學;2013年

5 薛寅佳;小型豬自體移植腎灌注短效Caspase-3小干擾RNA冷保存導致腎損傷加劇的機制初探[D];復旦大學;2013年

6 廖文韜;Tn-IAP1v的結構與功能分析[D];中國科學院研究生院（上海生命科學研究院）;2002年

7 徐華;Caspase-3蛋白在重離子輻照肺癌細胞中的功能研究[D];蘭州大學;2012年

8 賈林濤;靶向性重組caspase-3基因的構建、表達及其對腫瘤細胞的殺傷作用[D];第四軍醫(yī)大學;2001年

9 路斌;小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中caspase抑制劑對caspase活性的影響和對細胞凋亡抑制作用的研究[D];中國醫(yī)科大學;2007年

10 王暉;接頭蛋白NRBP及蛋白酶caspase-10新剪切體的功能研究[D];上海交通大學;2007年

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1 薛子成;樺木酸及其衍生物與Caspase-3分子對接及分子動力學研究[D];哈爾濱理工大學;2014年

2 臧韻;TTF1-NP通過活化內(nèi)質網(wǎng)應激的Caspase通路抑制大鼠原發(fā)性肝癌的生長[D];延邊大學;2015年

3 胡麗華;四氯苯醌激活Caspase 8/t-Bid誘導PC12細胞凋亡的信號通路分析[D];西南大學;2015年

4 董娜;Nestin和活化型caspase-3在狼掩性腎炎腎小球中的表達及意義[D];河北醫(yī)科大學;2015年

5 常貫超;klotho蛋白、Caspase12蛋白在糖尿病腎病中的表達及意義[D];河北醫(yī)科大學;2015年

6 徐彥楠;異牛肝菌素誘導人胃癌細胞BGC-823凋亡的機制研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

7 武辰楠;沙利度胺對人真皮成纖維細胞Caspase-3、Bcl-2和BAX mRNA的表達影響[D];河北醫(yī)科大學;2015年

8 陳素艷;不同時間和濃度的常壓氧對大鼠腦缺血半暗帶細胞凋亡的影響[D];鄭州大學;2015年

9 閆文相;Nrf2、Caspase3在人腦膠質瘤中的表達及相關性[D];河北醫(yī)科大學;2015年

10 劉麗;失僂剌知丸對腦缺血大鼠再灌注后Caspase-3和Caspase-9表達的影響[D];寧夏醫(yī)科大學;2015年

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本文編號：604794